西松烷型二萜对小鼠H22肝癌腹水瘤的抑制作用及其机制

目的研究西松烷型二萜对小鼠H22肝癌腹水瘤抑制作用,并初步探讨其作用机制。方法建立昆明小鼠H22肝癌腹水瘤模型,随机分为生理盐水组（Ⅰ组）、西松烷型二萜低剂量组（Ⅱ组）、中剂量组（Ⅲ组）、高剂量组（Ⅳ组）与环磷酰胺组（Ⅴ组）。建模后24 h开始给药,Ⅱ~Ⅳ组以不同剂量的西松烷型二萜连续灌胃给药7 d,对照组给予同体积生理盐水,Ⅴ组连续腹腔注射环磷酰胺7 d,末次给药24 h后处死半数动物。计算平均腹水量、腹水抑制率、腹水中瘤细胞数、瘤细胞存活率、细胞因子白细胞介素2（IL-2）、干扰素γ（IFN-γ）浓度。另一半小鼠继续观察生存状况,计算生存期及生存延长率。结果Ⅲ、Ⅳ组腹水量与Ⅰ组比较明显减少（F=28.37,q=2.91、4.76,P〈0.05）,腹水抑制率随药物剂量增加而升高。Ⅱ~Ⅳ组瘤细胞计数及瘤细胞存活率与Ⅰ组比较显著降低（F=7.21-19.13,q=2.92~4.76,P〈0.05）。Ⅱ~Ⅳ组小鼠平均生存期与Ⅰ组比较显著延长（F=35.77,q=2.91~4.75,P〈0.05）,延长率分别为20.21%、42.10%和51.02%。与Ⅴ组比较,Ⅱ、Ⅲ组小鼠在饮食、活动等方面状态较好。Ⅳ组用药期间食欲下降,活动少,停药后好转。Ⅱ~Ⅳ组IL-2和IFN-γ含量与Ⅰ组比较,差异均有显著性（F=21.17、35.47,q=2.93~4.77,P〈0.05）。结论西松烷型二萜对H22肝癌腹水瘤的生长具有明显的抑制作用,其机制可能与影响细胞免疫功能有关,其有可能开发成为一种新的海洋源性抗肿瘤药物。

癌消I号对肝癌H_(22)和艾氏腹水瘤小鼠的影响

目的研究癌消I号对肝癌22和艾氏腹水瘤小鼠的作用。方法以肝癌(H22)小鼠和艾氏腹水瘤(EAC)为模型,观察癌消I号的抗肿瘤作用,并分别计算出抑瘤率和生命延长率。结果相当于生药3、6、12g/kg的癌消I号对肝癌(H22)小鼠的抑瘤率均在40%以上,与对照组比较差异均有显著性意义,P<0.01;能延长艾氏腹水瘤(EAC)小鼠的生存期,生命延长率均在50%以上,与对照组比较差异均有显著性意义,P<0.01。结论癌消I号对肝癌H22和艾氏腹水瘤有明显作用。

含笑内酯对H22肝癌腹水瘤模型小鼠腹腔积液的治疗作用

目的探讨含笑内酯(MCL)对H22肝癌腹水瘤模型小鼠腹腔积液的治疗作用及机制。方法取H22肝癌腹水瘤细胞(0.2 m L,约2×10~7个)注射至40只BALB/C小鼠腹腔建立腹水瘤模型。接种24 h后小鼠随机分为MCL组[50 mg/(kg·d)MCL连续腹腔给药7 d]和模型组(等剂量生理盐水),每组20只。每日观察小鼠日常活动状态,记录小鼠体质量、腹围的变化。末次给药24 h后各组处死13只小鼠,采血后检测肿瘤标志物糖类抗原(CA)199、血清癌胚抗原(CEA)、铁蛋白、CA242、甲胎蛋白(AFP)水平;留取肝脏组织及腹水瘤细胞行HE染色,观察其病理状态;流式细胞术检测2组小鼠腹水瘤细胞凋亡情况。结果实验第4天开始,与模型组相比,MCL组体质量下降,腹围缩小(P<0.05)。与模型组比较,MCL组CEA、CA242、AFP水平出现下降,铁蛋白明显升高,肝组织及腹水瘤细胞水肿程度降低,腹水瘤细胞凋亡率升高(均P<0.05)。结论 MCL可抑制H22肝癌腹水瘤小鼠腹腔积液的生成,其机制可能是通过诱导肝癌细胞凋亡来实现的。

清肝化瘀颗粒对H22肝癌腹水瘤小鼠的治疗作用

目的:研究清肝化瘀颗粒对H22肝癌腹水瘤小鼠的治疗作用。方法:建立H22肝癌腹水瘤小鼠模型,将120只小鼠随机平均分为模型组、肝复乐组(1.35 g/kg)、氟尿嘧啶组(50 mg/kg,i.p)、清肝化瘀颗粒低剂量组(0.67 g/kg)、清肝化瘀中剂量组(1.34 g/kg)、清肝化瘀高剂量组(2.68 g/kg),连续给药10 d,每3日监测体重及腹围,第11天每组随机选择8只小鼠取材,检测腹水量、腹膜渗透性及腹膜组织病理染色等,剩余小鼠观察生存期。使用Westernblot法检测腹膜组织血管内皮生长因子A(VEGFA)及血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)表达量。结果:与模型组相比,氟尿嘧啶组、中剂量组、高剂量组小鼠体重增长较慢(P<0.05);与模型组相比,各用药组小鼠腹围增长较慢,第6天,氟尿嘧啶组、中剂量组腹围显著小于模型组(P<0.05);第12天高剂量组腹围显著小于模型组(P<0.05)。此外,与模型组相比,中、高剂量组小鼠腹水量明显减少(P<0.05);中、高剂量组、氟尿嘧啶组小鼠腹水上清吸光度明显降低(P<0.05);中剂量组和氟尿嘧啶组生存期明显延长(P<0.05)。低剂量组、肝复乐组上述指标的差异无统计学意义。腹膜病理染色显示,氟尿嘧啶组、中、高剂量组小鼠腹膜结构较完整、水肿较轻、血管新生较少,优于肝复乐组和低剂量组。与模型组相比,清肝化瘀中剂量组VEGFA及VEGFR2表达量显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论:清肝化瘀颗粒可抑制H22肝癌腹水瘤小鼠腹水产生、延长小鼠生存期,并降低腹膜渗透性、抑制腹膜新生血管的增加,其机制可能与抑制VEGF/VEGFR通路相关。

桑黄多糖对肝癌H_(22)荷瘤小鼠的治疗作用

目的:研究桑黄多糖对肝癌H_(22)荷瘤小鼠的治疗效果,并探讨其作用机制。方法:将60只昆明种小鼠随机分为6组:正常对照组、模型组、环磷酰胺阳性对照组及桑黄多糖低、中、高剂量组。除正常对照组外,其余各组小鼠均在左前肢皮下注射H_(22)肝癌细胞,建立肝癌模型,成模后给药15 d,比较各组相关指标。结果:与模型组比较,桑黄多糖低、中、高剂量组的抑瘤率分别为26.71%、34.48%、56.65%;除桑黄多糖低剂量组中的TNF-α无显著差异外,其他各给药组血清细胞因子IL-6、IL-2、TNF-α均显著升高(P<0.05);与阳性对照组比较,桑黄多糖各剂量组T、B淋巴细胞的增殖能力显著升高(P<0.05)。组织病理学观察显示桑黄多糖能促使肿瘤细胞坏死。结论:桑黄多糖对H_(22)荷瘤小鼠具有一定的抑瘤作用,其机制可能与免疫调节有关。

八月札水提物对H22肝癌荷瘤鼠免疫功能的影响

目的探讨八月札水提物对H22肝癌荷瘤鼠免疫功能的影响及其对化疗药物环磷酰胺(CTX)的增效减毒作用。方法通过计算肿瘤抑制率和胸腺(脾)重量指数以及应用放射免疫法(RIA)检测H22荷瘤鼠血清中肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-2水平,观察八月札水提物对H22荷瘤鼠免疫功能的影响及其对化疗药物CTX的增效减毒效果。结果 CTX组、水提低组、水提高组、联合用药组与阴性对照组比较,荷瘤鼠肿瘤重量明显降低,肿瘤组织生长的抑制率分别为44.0%、36.4%、38.0%、58.4%和60.0%;而且八月札水提组及联合用药组小鼠存活数量明显高于CTX组;CTX组、水提低组、水提高组、联合用药组与阴性对照组比较,能够显著降低H22荷瘤鼠胸腺、脾重量指数;CTX组、水提低组、水提高组、联合用药组与阴性对照组比较,显著提高荷瘤鼠血清中IL-2和TNF-α水平。结论八月札水提物对H22荷瘤鼠肿瘤生长有显著抑制作用,能够显著提高荷瘤鼠血清中TNF-α和IL-2水平;同时,八月札水提物与CTX联合应用对荷瘤鼠血清中TNF-α和IL-2的提高效果更为明显,明显优于单独CTX组,推测八月札对CTX存在增效、减毒作用。

独角莲醇提液对H22肝癌荷瘤小鼠血清IL-2和TNF-α水平的影响

目的探讨独角莲醇提液对H22肝癌荷瘤小鼠血清IL-2和TNF-α水平的影响。方法建立体内H22肝癌荷瘤小鼠的模型,采用灌胃法给予其100 mg·kg-1·d-1独角莲醇提液,以生理盐水灌胃和5-FU腹腔注射作为对照,连续10 d,停药后第2天摘取小鼠眼球取血后断髓处死,取出胸腺、脾脏称重,计算小鼠的胸腺重量指数、脾脏重量指数,采用ELISA法检测小鼠血清中细胞因子白介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平。结果与生理盐水灌胃的H22肝癌荷瘤小鼠比较,5-FU腹腔注射和独角莲醇提液灌胃处理的H22荷瘤鼠血清中细胞因子IL-2、TNF-α水平明显升高;但胸腺重量指数、脾脏重量指数显著下降,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论独角莲醇提液可提高H22荷瘤鼠的血清IL-2和TNF-α水平。

猫棒束孢联合环磷酰胺对H22荷瘤小鼠的治疗作用

目的 研究冬虫夏草来源的猫棒束孢(Isaria felina,IF)联合环磷酰胺(cyclophosphamide, CTX)对肝癌H22荷瘤小鼠的治疗作用。方法 建立H22荷瘤小鼠模型,随机分组,设正常对照组(NC group,蒸馏水)、模型对照组(MC group,蒸馏水)、CTX组(CTX group, 25 mg/kg)、IF组(IF group, 400 mg/kg)和IF+CTX组(IF+CTX group, IF 400 mg/kg+CTX 25 mg/kg),每组5只小鼠;蒸馏水、IF灌胃给药,CTX腹腔注射给药,连续给药10 d。实验结束后,计算各组小鼠平均肿瘤体积和瘤重、抑瘤率、q值、免疫器官脏器指数;检测血常规和血清细胞因子含量;观察肿瘤组织苏木精-伊红(HE)染色病理形态变化。结果 各给药组小鼠的肿瘤体积和重量均显著低于MC组(P<0.05)。CTX组、IF组、IF+CTX组小鼠的抑瘤率分别为49.3%、34.2%、72.8%,q值为1.09。IF+CTX组白细胞(WBC)、淋巴细胞(Lymph)、血小板(PLT)数量显著高于CTX组(P<0.05)。MC组小鼠的脾指数显著高于NC组,IF+CTX组小鼠脾指数显著低于MC组(P<0.05)。MC组小鼠的血清IFN-γ水平显著低于NC组,IF组和IF+CTX组的IFN-γ水平显著高于MC组和CTX组(P<0.05)。MC组肿瘤细胞生长状态良好,数量多,排列紧密;CTX组、IF组和IF+CTX组肿瘤组织可见肿瘤细胞排列松散,多处肿瘤细胞灶性坏死,坏死细胞核固缩碎裂。结论 IF和CTX联用对H22荷瘤小鼠有相加的抑瘤作用,可减轻小鼠的免疫功能抑制,具有免疫调节功能。

邪毒壅盛和气虚证H22肝癌荷瘤小鼠肾上腺基因转录的差异

目的揭示H22荷瘤小鼠早期邪毒壅盛证和气虚证肾上腺基因表达的特征。方法采用小鼠标准化四诊及辨证方法,以及GeneChip Mouse Exon 1.0 ST Array等技术,检测H22荷瘤小鼠早期邪毒壅盛证和气虚证、中期阳气虚证、中晚期气阴阳虚证共4个证候肾上腺基因表达的差异,重点关注早期2个证候表达量大、差异显著的基因。结果①筛选邪毒壅盛证上调和下调基因20条和7条,气虚证上调和下调基因4条和7条。②邪毒壅盛证上调的基因涉及到信号转导与免疫应答的Pomc1、Tnfaip6、Ccrl2、Rgs1等,调控转录的Bhlhb2、Ell2、Atf3、Hivep2、Klf4等,参与代谢调节的Usp37、Chka、Dusp10等;邪毒壅盛证下调基因有Hbxip、H2-T22、Ndufs6,Tgfb1、Mgat4b、Cdkl3等。③气虚证独特上调基因有Pde10a、Ol-fr1305、Olfr46、Cyp3a13等;气虚证独特下调基因涉及到激素类Gh、Pomc1、Prl、Cga和原癌基因Junb。结论荷瘤小鼠邪毒壅盛证和气虚证肾上腺存在大量基因表达的改变,这可能是证候内在的本质之一。

扶正消癥方(含药血清)对H_(22)肝癌荷瘤小鼠IL-8及VEGF的影响

目的:研究扶正消癥方(含药血清)对H22肝癌荷瘤小鼠血清中IL-8和VEGF的影响及对肿瘤生长、增殖的抑制作用。方法:采用肿瘤双植入模型技术制作H22荷瘤小鼠模型及中药含药血清的制备。40只6周龄昆明种小鼠随机均分为4组:正常组,模型组,顺铂组,扶正消癥方组(含药血清)。造模成功后连续3d把已制备好的含药血清分别注入对应组小鼠的右侧接种肿瘤,共给药3次。观测21d,第21天处死小鼠收集血清,检测血清中IL-8和VEGF的含量。结果:与正常组比较,模型组小鼠血清中IL-8和VEGF表达水平明显升高(P<0.01),扶正消癥方(含药血清)组及顺铂组可降低小鼠血清中IL-8和VEGF表达水平。与模型组相比,顺铂组和扶正消癥方(含药血清)组均可降低小鼠血清中IL-8和VEGF表达水平,顺铂组(P<0.01),扶正消癥方(含药血清)组(P<0.05)。结论:扶正消癥方(含药血清)对H22荷瘤小鼠具有提高免疫作用,降低血清中IL-8和VEGF的表达水平,具有进一步研究的价值。

小鼠肝、再生肝、H22_a腹水型肝癌细胞及荷癌鼠肝中脂质过氧化物水平与SOD及GSH-P_x酶活力

测定了再生鼠肝、H22_a 腹水型肝癌细胞及荷癌鼠肝中脂质过氧化物水平、SOD 及 GSH-Px 的活力,与正常鼠肝相比,再生鼠肝和荷癌鼠肝的脂质过氧化物水平增高,GSH-Px 活力降低,荷瘤鼠肝的 SOD 活力也高于正常鼠肝,去甲斑蝥素和斑蝥酸钠能使荷瘤鼠肝的 GSH-Px 活力上升,脂质过氧化物水平下降。

罗勒多糖对H22肝癌荷瘤小鼠化疗增效药效学研究

目的:研究罗勒多糖对H22荷瘤小鼠化疗增效的影响。方法:通过对H22荷瘤小鼠瘤质量及生存率的检测,观察罗勒多糖与紫杉醇合用对H22荷瘤小鼠的增效作用;通过检测血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶及尿素氮,观察罗勒多糖联合化药对H22荷瘤小鼠肝肾的影响。结果:罗勒多糖能在一定程度上增强紫杉醇的抑瘤作用以及提高小鼠生存率,并对肝肾无损伤作用。结论:罗勒多糖对荷瘤小鼠具有一定的化疗增效及提高生存率的作用。

MBP在小鼠肝癌H22荷瘤模型中的抗肿瘤作用

目的：探讨大肠杆菌麦芽糖结合蛋白（MBP）在小鼠肝癌H22荷瘤模型中的抗肿瘤作用及可能机制。方法：将12只6～8周龄的BALB/c小鼠皮下注射2×10^6个H22细胞,建立荷瘤模型,荷瘤后第2天将小鼠分为PBS组和MBP组,每组6只,并通过皮下瘤旁注射给药的方式进行干预,期间监测肿瘤体积和小鼠体重变化,测量肿瘤和各脏器质量,ELISA法检测脾细胞分泌IL-12和IFN-γ的水平,Real-time PCR检测肿瘤组织中IFN-γ和IL-17A mRNA的相对表达量。结果：MBP能抑制肿瘤的生长（P〈0.05）。与PBS组相比,MBP组小鼠脾细胞中IL-12、IFN-γ分泌量上升,肿瘤组织中IFN-γmRNA的表达量上升,IL-17A mRNA的表达量下降（P〈0.05）。结论：MBP能够有效抑制肝癌H22肿瘤生长,其作用可能是通过激活Th1型免疫反应和抑制Th17型免疫反应。

3种壁虎酶解物对H22荷瘤小鼠及Bel7402肝癌细胞抑制活性差异的研究

目的研究3种解壁虎酶解物对其体内外抗肿瘤活性的影响。方法采用木瓜蛋白酶(papain)、碱性蛋白酶2.4L(alcalase)、胰蛋白酶(trypsin)分别水解壁虎粉,得水溶性粗肽混合物。采用甲醛滴定法测定游离氨基态氮(AN)含量,从而计算水解度(DH);MTT法评估水解产物对人肝癌Bel7402细胞体外增殖活性的影响;制备H22荷瘤小鼠模型,检测壁虎不同酶解终产物的抑瘤效果及其对荷瘤小鼠体重和免疫器官的影响。结果Alcalase水解效率较高,水解度可达63%;体外抗肿瘤活性排序为alcalase(79.91%)>papain(67%)>原粉组(49.37%);体内抗肿瘤活性为alcalase(67.11%)>papain(53.48%)>原粉组(17.47%),trypsin组体内外活性与原粉组相比均无显著差异。结论壁虎酶解物体内外抗肿瘤活性具有一致性且与水解度相关,alcalase酶解效果最优。

龙葵碱对H_(22)荷瘤小鼠肿瘤细胞膜唾液酸和封闭度的影响

目的研究龙葵碱对H22荷瘤小鼠肿瘤细胞膜唾液酸(SA)水平和封闭度的影响。方法建立H22荷瘤小鼠模型,荷瘤小鼠分别sc生理盐水、环磷酰胺、龙葵碱(9.375、18.75、37.5mg/kg)。采用比色法测定H22小鼠肿瘤细胞膜SA水平和封闭度。结果龙葵碱可剂量依赖性地降低荷瘤小鼠肿瘤细胞膜SA水平和肿瘤细胞膜封闭度。结论龙葵碱通过降低H22荷瘤小鼠肿瘤细胞膜SA水平和肿瘤细胞膜封闭度起抗肿瘤作用。

龙葵碱对H_(22)荷瘤小鼠细胞膜流动性和膜蛋白水平的影响

目的观察龙葵碱对H22荷瘤小鼠肿瘤细胞膜流动性和膜蛋白水平的影响。方法采用荧光探针DPH标记法测定肿瘤细胞膜流动性,考马斯亮蓝法测定肿瘤细胞膜蛋白水平。结果龙葵碱可显著降低H22荷瘤小鼠肿瘤细胞膜流动性,降低H22小鼠肿瘤细胞膜蛋白水平。结论龙葵碱是通过影响肿瘤细胞膜的流动性和肿瘤细胞膜上的蛋白水平恢复细胞的正常生理活性而达到抗肿瘤作用。

石见穿多糖对H22荷瘤小鼠的抗肿瘤免疫调节作用

前期研究发现石见穿多糖(polysaccharides from Salvia chinensis Benth.,PSSC)能有效抑制H22肝癌细胞在昆明小鼠体内的生长。在此基础上,本研究进一步探讨了PSSC对H22荷瘤小鼠免疫器官和免疫细胞的影响。通过在昆明小鼠右腋皮下注射H22肝癌细胞构建荷瘤小鼠模型。采用流式细胞术、免疫组织化学染色、酶联免疫法等实验方法评价PSSC对CD4+T细胞、CD8+T细胞、自然杀伤细胞(NK细胞)抗肿瘤免疫能力的影响。结果表明PSSC可以有效增加小鼠的脾脏/胸腺指数并促进Con A/LPS刺激的脾细胞增殖。同时,PSSC剂量依赖性地增加了荷瘤小鼠外周血单核细胞、脾脏及淋巴结中CD8+T细胞比例并提高CD8+T细胞与NK细胞在肿瘤组织中的组分含量。注射PSSC后,CD4+T细胞分泌免疫促进因子IFN-γ和IL-2的量增加,而分泌免疫抑制因子IL-4和IL-10的量减少。这一系列实验研究结果表明PSSC具有显著的抗肿瘤免疫增强活性。

当归贝母苦参丸对顺铂化疗H22荷瘤小鼠肿瘤及肝脏、肾脏和胸腺组织病理形态的影响

目的观察当归贝母苦参丸对顺铂化疗H22荷瘤小鼠肿瘤及肝脏、肾脏和胸腺组织病理形态的影响,探讨其对顺铂化疗的增效减毒作用。方法建立小鼠H22肝癌皮下移植瘤模型,随机分为模型组、顺铂组、当归贝母苦参丸组、当归贝母苦参丸联合顺铂组,另设空白组作对照。造模后第8日开始给药,连续14 d,动态监测荷瘤小鼠肿瘤体积;第15日处死小鼠,镜下观察各组小鼠肿瘤、肝脏、肾脏和胸腺组织的病理形态变化。结果给药第10日,与模型组比较,各给药组肿瘤体积明显减小(P<0.01),当归贝母苦参丸联合顺铂组最为明显;各给药组肿瘤细胞密度、异型性和病理性核分裂像均明显降低(P<0.01),其中当归贝母苦参丸联合顺铂组效果优于顺铂组,还伴有明显的淋巴细胞浸润和纤维组织增生(P<0.01)。顺铂组肝脏、肾脏和胸腺病理变化较空白组、模型组加重(P<0.01),而当归贝母苦参丸联合顺铂组病变较顺铂组减轻(P<0.05)。结论当归贝母苦参丸可以增强顺铂对H22荷瘤小鼠肿瘤的抑制作用,减轻顺铂化疗H22荷瘤小鼠的肝脏、肾脏和胸腺毒性。

独角莲醇提液对H22荷瘤鼠的抑瘤及抗氧化作用

目的探讨独角莲醇提物对H22肝癌荷瘤鼠动物模型的抑瘤作用及其抗氧化机制。方法以H22荷瘤鼠为研究对象,独角莲醇提物灌胃给药,观察其对小鼠肿瘤的抑瘤率、体重增长率的影响。采用分光光度法检测血清中总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。结果腹腔注射5-Fu和经胃灌服独角莲醇提液对H22荷瘤鼠肿瘤组织均有抑制作用(P<0.05),体重增长率、SOD活性和T-AOC水平较对照组明显增高(P<0.05),而MDA含量则显著下降(P<0.05),独角莲醇提液与对照组比较有显著差异。结论独角莲醇提液对H22荷瘤鼠肝癌组织生长具有抑制作用,其作用机制可能与提高H22荷瘤鼠抗氧化能力有关。