氧化苦参碱对H_2O_2诱导的L_6成肌细胞凋亡的影响

研究氧化苦参碱对L6大鼠成肌细胞H2O2凋亡的影响.采用过氧化氢损伤L6大鼠成肌细胞的方法,建立L6大鼠成肌细胞H2O2凋亡模型.使用剂量为0.3,0.15,0.75 g/L的氧化苦参碱处理细胞.应用MTT法统计存活率和流式细胞仪检测细胞周期及凋亡率,用DAPI荧光染色、HE染色以及Bax和Bcl-2抗体鉴定损伤程度,Western blot检测蛋白质差异.结果表明,H2O2损伤的成肌细胞存活率降低,凋亡率增加.各种剂量氧化苦参碱能提高成肌细胞的存活率,促使Bcl-2增高,Bax降低.对成肌细胞的保护程度随氧化苦参碱剂量增加而增强,在剂量为0.3 g/L时,效果显著,其次是0.15、0.75 g/L的氧化苦参碱.其生理生化机制是氧化苦参碱保护H2O2通过NFκB信号通路造成的大鼠成肌细胞凋亡模型.结果显示,氧化苦参碱具有作为新的抗氧化药物的潜力.

珠子参总皂苷对H_2O_2诱导新生大鼠心肌细胞凋亡的抑制作用

目的:观察珠子参总皂苷对H2O2诱导新生大鼠心肌细胞凋亡的抑制作用,并探讨其作用机制。方法:Wistar乳鼠心肌细胞原代培养,用H2O2建立氧化应激损伤模型,然后用珠子参总皂苷(100,200μg/mL)孵育24h后,MTT法检测珠子参总皂苷对细胞活力的影响,流式细胞仪和Hoechst33258染色检测珠子参总皂苷对氧化应激诱导细胞凋亡及胞内ROS含量的影响,比色法测定心肌细胞Caspase-3、Caspase-9的活性,荧光定量PCR测定心肌细胞Bcl-2和Bax mRNA表达,并计算Bcl-2与Bax的比值。结果:珠子参总皂苷(100,200μg/mL)能显著改善心肌细胞活性,有效保护线粒体膜电位的稳定,抑制心肌细胞凋亡和改善细胞形态,降低细胞内活性氧(ROS)含量;下调Bax mRNA表达,上调Bcl-2mRNA表达及Bcl-2与Bax的比值;降低H2O2所致新生大鼠心肌细胞中Caspase-3、Caspase-9的活性。结论:珠子参总皂苷对H2O2诱导心肌细胞凋亡有显著的抑制作用,其机制可能与其稳定心肌细胞膜、清除ROS及调节心肌细胞Bcl-2、Bax和Caspase-3、Caspase-9表达有关。

应用Ca^(2+)荧光探针fluo-3和fluo-4测定H_2O_2诱导的A549细胞凋亡过程中的[Ca^(2+)]_i变化

背景与目的肺癌是世界范围内常见的恶性肿瘤,Ca2+对于肿瘤细胞凋亡有重要的调控作用。实时监测肺癌细胞内Ca2+水平,有助于深入研究Ca2+介导肺癌细胞凋亡的分子机制。本研究旨在观察Ca2+荧光探针fluo-3和fluo-4在H2O2诱导的A549细胞凋亡过程中的应用,实时测定胞浆Ca2+浓度([Ca2+]i),探讨[Ca2+]i与细胞凋亡的关系,并比较两种Ca2+探针在荧光强度及[Ca2+]i测定值方面的差异。方法采用Ca2+荧光探针fluo-3和fluo-4负载细胞,1 h后用不同浓度的H2O2刺激细胞,激光扫描共聚焦显微镜实时测定选取细胞的[Ca2+]i变化。采用DAPI染色试剂盒观察H2O2刺激后细胞凋亡情况。结果在相同的探针浓度、负载时间和相同的图像采集参数的条件下,选定细胞内fluo-4平均荧光强度高于fluo-3。50 mM H2O2刺激后,A549细胞胞浆内[Ca2+]i迅速升高,通过公式计算发现采用fluo-3探针负载的选定细胞中[Ca2+]i变化范围是112.2 nM-1,069.6 nM,采用fluo-4探针负载的选定细胞中[Ca2+]i变化范围是7.6nM-505.4 nM。同时发现经H2O2刺激后,凋亡细胞百分比明显增加(P<0.01)。结论 H2O2促进A549细胞内Ca2+释放,诱导细胞凋亡。Ca2+探针fluo-4可能更适合于监测含量较低的细胞中[Ca2+]i变化。

化瘀祛痰方药及其拆方对H_2O_2诱导EA.hy926细胞凋亡的影响及机制研究

目的探讨化瘀祛痰方药及其拆方含药血清对过氧化氢(H2O2)诱导人脐静脉内皮细胞EA.hy926凋亡的影响及其机制。方法 40只SD大鼠随机分为5组,即全方组、补气组、化瘀组、祛痰组、空白血清对照组。各组大鼠分别以相应中药煎剂或生理盐水连续灌胃9 d,末次灌胃给药2 h后,腹主动脉采血,离心后分离血清。体外培养EA.hy926细胞,随机分为7组,即①正常对照组、②H2O2刺激组、③全方组、④补气组、⑤化瘀组、⑥祛痰组、⑦空白血清对照组。其中②组加入终浓度为300μmol.L-1H2O2,③～⑦组用各组含药血清(浓度为10%)预处理24 h后加入终浓度为300μmol.L-1H2O2,各组细胞培养24 h后进行各项指标测定。采用流式细胞术检测EA.hy926细胞凋亡;实时定量反转录—聚合酶链反应(Real-time PCR)定量分析bcl-2、bax、caspase-3 mRNA表达;比色法检测caspase-3活性;蛋白质免疫印记技术(Western-blot)检测bcl-2、bax蛋白表达。结果与正常对照组相比,H2O2刺激后EA.hy926细胞凋亡率、bax、caspase-3表达显著增加,而bcl-2表达显著减少。全方组细胞凋亡率、bax、caspase-3水平较H2O2刺激组相比显著降低,而bcl-2水平显著升高,且全方组干预作用强于各拆方组。拆方各组中,化瘀组、祛痰组细胞凋亡率显著降低,化瘀组bax、cas-pase-3表达显著减少,而bcl-2表达显著增加。结论化瘀祛痰方药全方及化瘀拆方可显著抑制内皮细胞凋亡,影响凋亡相关基因bcl-2、bax、caspase-3的表达,这可能是其抗AS的作用机制之一。

山楂叶总黄酮对H_2O_2诱导PC12细胞凋亡的保护作用

目的探讨山楂叶总黄酮(FMCL)对H2O2诱导的PC12细胞凋亡的保护作用及机制。方法用H2O2刺激PC12细胞使其发生凋亡,MTT法检测PC12细胞活性,倒置显微镜观察细胞生长状况和形态变化,琼脂糖凝胶电泳观察DNA梯状图谱,流式细胞仪检测PC12细胞亚二倍体比率及线粒体膜电位的变化。结果与模型组比较FMCL 100、30mg.L-1两组PC12细胞活性增强,贴壁生长数量增多,而圆缩脱落者减少,未见典型DNA梯状图谱,凋亡比率下降,线粒体膜电位回升,且在一定范围内存在剂量依赖关系。结论山楂叶总黄酮可抑制H2O2诱导的PC12细胞凋亡,其机制可能与抑制线粒体途径的细胞凋亡有关。

ClC-3氯通道对H_2O_2诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞凋亡的影响

目的研究C lC-3氯通道蛋白过表达对H2O2诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞凋亡的影响。方法蛋白免疫印迹法检测C lC-3蛋白表达;形态学方法、DNA琼脂糖电泳、MTT法和流式细胞仪观察和分析H2O2诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞形态学改变、DNA断裂、细胞存活率、凋亡率及C lC-3蛋白过表达对其影响。结果C lC-3蛋白过表达减轻H2O2诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞形态学改变、DNA断裂及细胞凋亡率,增加细胞存活。结论提示C lC-3氯通道蛋白过表达保护H2O2诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞凋亡。

BDNF对H_2O_2诱导人肺癌细胞YTMLC-90凋亡的抑制效应

背景与目的:已证实在神经系统内外多种细胞中均可合成神经营养因子,如神经生长因子(nervegrowthfactor,NGF)、脑源性神经营养因子(brainderivedneurotrophicfactor,BDNF)和神经营养素3/4(NT-3/4)。这些神经营养因子不仅能促进神经细胞的存活、增殖和凋亡,也与癌细胞侵犯神经组织的活性有关;但BDNF与肺癌细胞的生物学行为是否相关尚未见报道。本文旨在研究BDNF对过氧化氢(H2O2)诱导人肺癌细胞YTMLC-90凋亡的作用。方法:用含人I型胶原a1链(COLIA1)基因启动子和增强子元件及在其3'端接BDNFcDNA的微基因pSVCEPBFCAT,转染人肺癌细胞YTMLC-90并驱动BDNF异位表达,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)显色法检测细胞增殖,吖啶橙荧光染色显微镜和电镜观察细胞形态及其超微结构的改变,琼脂糖凝胶电泳检测染色质DNA断裂。结果:经200μmol/LH2O2作用24h,转染pSVCEPBFCAT的YTMLC-90细胞生长抑制率为30.0%,而未转染YTMLC-90和转染空载体pSVCEPCAT的YTMLC-90细胞生长抑制率分别为84.60%和80.00%,实验组与两个对照组之间的差异均有显著性(P<0.01);对照组YTMLC-90细胞可见凋亡特有的形态学及生物化学改变,如胞浆和核固缩、染色质断裂、DNA电泳呈梯状条带,而转染pSVCEPBFCAT的YTMLC-90细胞未发现上述凋亡特征。结论:BDNF促进YTMLC-90?

应用流式细胞术检测17β-雌二醇对H_2O_2诱导的视网膜神经细胞凋亡的保护作用

目的用流式细胞技术(FACS)检测H2O2诱导的视网膜神经细胞凋亡以及17β-雌二醇(βE2)对细胞的保护作用。方法取新生24 h内的SD大鼠进行视网膜神经细胞的原代培养,待细胞培养4-5 d,经不同因素处理后,用MTT法检测细胞存活率,用FACS法检测细胞凋亡率。结果200μmol/L的H2O2能有效诱导视网膜神经细胞凋亡;低浓度的H2O2不能诱导细胞凋亡,但高浓度的H2O2诱导细胞凋亡的同时也导致了正常细胞比率的锐减;10μmol/L的βE2能有效对抗H2O2诱导的视网膜神经细胞凋亡;低浓度的βE2对细胞未表现出保护作用,高浓度的βE2对细胞反而表现出毒性作用。结论一定浓度的βE2在一定范围内能对抗H2O2诱导的视网膜神经细胞凋亡,表现对神经细胞保护的作用。

葛根素对H_2O_2诱导的颈椎间盘纤维环细胞凋亡的影响及机制

目的探讨葛根素对过氧化氢(H_2O_2)诱导颈椎间盘纤维环细胞凋亡的影响及机制。方法分离培养大鼠颈椎间盘纤维环原代细胞,将细胞分为对照组、H_2O_2组和葛根素组,氯化锂(LiCl)为Wnt信号通路激活剂。噻唑蓝(MTT)及流式细胞术分别检测细胞活力和凋亡率,二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯(DCFH-DA)探针检测活性氧(ROS)水平。Western印迹检测Wnt1、β-catenin、糖原合成酶激酶(GSK)-3β和Bax蛋白表达。结果与对照组比较,H_2O_2组细胞活力降低,凋亡率升高,ROS水平升高,Wnt1、β-catenin和GSK-3β蛋白表达降低,Bax蛋白表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与H_2O_2组比较,葛根素组细胞活力升高,凋亡率降低,ROS水平降低,Wnt1、β-catenin和GSK-3β的蛋白表达升高,Bax蛋白表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。葛根素+LiCl组细胞活力显著高于葛根素组,凋亡率显著低于葛根素组(P<0.05)。结论葛根素可降低由H_2O_2诱导的颈椎间盘纤维环细胞凋亡,机制与细胞内ROS水平降低及激活Wnt信号通路有关。

丹参对H_2O_2诱导的大鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的 :探讨丹参对过氧化氢 (H2 O2 )诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞 (VSMCs)凋亡的影响及其可能机制。方法 :选用体外培养的第 3～ 5代大鼠VSMCs,以H2 O2 作为外源性活性氧 (ROS)诱导VSMC凋亡 ,用丹参进行干预 ,以MTT比色法测定细胞存活率 ,流式细胞术检测细胞凋亡率 ,同时用免疫细胞化学法检测VSMCs 中Bcl 2和Bax蛋白表达的变化。结果 :1mmol/LH2 O2 诱导VSMCs 凋亡 ,细胞存活率明显低于对照组 ,细胞凋亡率、Bax/Bcl 2蛋白表达的阳性指数 (PI)明显高于对照组 (P <0 0 1) ;丹参干预后 ,和H2 O2 组相比 ,细胞存活率明显升高 ,而细胞凋亡率、Bax/Bcl 2蛋白表达的PI显著降低 (P <0 0 5或P <0 0 1)。结论 :丹参可通过下调Bax/Bcl 2蛋白表达而对抗H2 O2 诱导的VSMCs 凋亡。

阿魏酸钠对H_2O_2诱导的PC12细胞凋亡的保护作用的探讨

目的 探讨阿魏酸钠 (sodiumferulate ,SF)对H2 O2 引起的PC12细胞凋亡保护作用的可能机制。方法 在H2 O2诱导PC12细胞凋亡模型的基础上 ,采用MTT比色分析测细胞存活率 ,RT PCR检测 par 4和caspase 3基因mRNA表达 ,Westernblot检测Par 4蛋白表达和Caspase 3P2 0活性片段 ,用比色法检测Caspase 3相对活性。 结果 不同剂量SF预处理 1h可提高PC12细胞的存活率 ,降低 par 4和cas pase 3的mRNA表达以及Par 4的蛋白表达 ,Caspase 3P2 0活性片段和Caspase 3相对活性减少 ,但变化不明显。结论 SF可剂量依赖性地对抗H2 O2 的神经毒性作用 ,其机制可能与凋亡基因 par 4表达有关 ,与Caspase

山楂叶总黄酮对H_2O_2诱导PC12细胞凋亡的保护作用及机制的研究

目的探讨山楂叶总黄酮(flavone mixture of crataegus leaves,FMCL)对H2O2诱导的PC12细胞凋亡的保护作用及其分子机制。方法用H2O2刺激PC12细胞使其发生凋亡,用流式细胞仪检测PC12细胞凋亡率,用Westernblot法检测Bcl-2、Bax、Caspase-3P20蛋白及用RT-PCR法检测Bcl-2、Bax mRNA表达量的变化。结果与模型组比较FMCL 100μg/ml剂量组PC12细胞凋亡率下降,Bcl-2蛋白及mRNA表达量明显升高,而Bax、Caspase-3P20蛋白及BaxmRNA表达量明显降低(P<0.05或P<0.01),且在一定范围内存在剂量依赖关系。结论山楂叶总黄酮可抑制H2O2诱导的PC12细胞凋亡,其机制可能与调节凋亡相关基因及蛋白的表达从而抑制Caspase-3活化有关。

H_2O_2诱导烟草悬浮细胞的凋亡

烟草悬浮细胞经不同浓度的过氧化氢处理发现 ,当用 6mmol L的H2 O2 处理时从形态学上可观察到明显的染色质凝聚 ,细胞质皱缩和细胞核解体等现象 ;DNA电泳结果显示发生凋亡的细胞基因组DNA被降解形成明显的DNA梯状条带 ,从而表现出典型的细胞凋亡特征 .其他高浓度的处理也有以上特征 ,但细胞坏死数目也相对增多 ,因此本研究认为 6mmol L的H2 O2 处理 2 4h能够非常有效地诱导烟草悬浮细胞的凋亡 .

木犀草素预处理减轻H_2O_2诱导的乳鼠心肌细胞凋亡

目的 探讨木犀草素预处理对H2O2诱导的乳鼠心肌细胞抗凋亡及抗氧化作用。方法 取1-3d乳鼠的心肌细胞,常规培养，分为对照组、模型组、1、10、50、100和200μmol/L浓度的木犀草素预处理组，预处理2h后，用1mmol/LH2O2氧化损伤2h，检测各组MTT值，进而选择100μmol/L浓度的木犀草素作为预处理组。观察不同组别细胞形态学、细胞搏动频率、Hoechest33342-PI双染和Rhodamine 123染色检测MMP，检测培养液中LDH、MDA及SOD活性等。结果 与模型组相比，用木犀草素预处理后的心肌细胞活力良好（P〈0.01），形态学及搏动情况良好（P〈0.01），细胞凋亡下降，细胞线粒体损伤程度减少（P〈0.01），SOD活性提高（P〈0.01）,LDH及MDA的产生受到抑制（P〈0.01）。结论 木犀草素预处理对H2O2诱导的心肌细胞损伤具有一定的保护作用,木犀草素抗凋亡作用可能与其抗氧化作用有关。

蒺藜皂苷对H_2O_2诱导PC12细胞凋亡保护作用及其机制研究

目的探讨蒺藜皂苷(gross saponin of Tribulus terrestris,GSTT)对H2O2诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(pheochromocytoma cells,PC12)凋亡的保护作用及其机制。方法实验分为对照组、模型组及蒺藜皂苷高(GSTT1)、低(GSTT2)剂量组。用H2O2刺激PC12细胞使其发生凋亡,MTT法检测PC12细胞活性,流式细胞仪检测细胞凋亡率及线粒体膜电位的变化,Western blotting检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax。结果与模型组比较蒺藜皂苷组随着剂量的增加PC12细胞存活率提高(P<0.001),凋亡比率下降(P<0.01),线粒体膜电位回升(P<0.01),Bcl-2表达增加(P<0.05),而Bax的表达降低(P<0.05)。结论蒺藜皂苷可抑制H2O2诱导的PC12细胞凋亡,其机制可能与抑制线粒体途径的细胞凋亡有关。

异丙酚对H_2O_2增强肿瘤坏死因子-α诱导血管内皮细胞凋亡效应的抑制作用

目的:探索H2O2对TNF-α诱导血管内皮细胞凋亡的作用及异丙酚(propofol)对细胞凋亡的保护作用和可能的机制。方法:将体外培养的ECV304细胞分为5组:①对照组(Control);②10μmol/L H2O2组(H);③40 nmol/L TNF-α组(T);④TNF-α+H2O2组(T+H);⑤TNF-α+H2O2+propofol组(T+H+P)。观察:①流式细胞仪检测细胞凋亡率;②丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量。结果:10μmol/L的H2O2仅造成少量细胞凋亡,MDA含量变化不显著(P>0.05);与TNF-α共同作用后细胞凋亡率显著增加,且高于二者分别作用之和,细胞内MDA含量也明显增加,SOD和GSH-Px含量明显减少,与TNF-α组相比差异具有显著性(P<0.05);加入异丙酚预处理可使TNF-α和H2O2组凋亡率明显降低,同时伴随细胞内MDA含量降低,SOD和GSH-Px含量增加。结论:H2O2能显著增强TNF-α诱导细胞凋亡的效应,异丙酚通过降低细胞氧化损伤的机制,有效逆转H2O2增强TNF-α诱导细胞凋亡的效应。

罗布麻总黄酮通过PI3K/Akt/GSK3β抑制H_2O_2诱导的EA.hy926凋亡机制研究

心血管疾病严重危害人类健康,其致病机制主要是氧化应激诱导的内皮细胞凋亡,保护内皮细胞免受氧化应激损伤是防治心血管疾病的关键。为了探讨罗布麻总黄酮(total flavonoids of Folium Apocyni Veneti,TFF)抑制过氧化氢(hydrogen peroxide,H_2O_2)诱导的EA.hy926细胞凋亡的机制,采用不同浓度TFF处理EA.hy926细胞,一定浓度的H_2O_2造模,通过MTT法、Hoechst33342/PI荧光双染、流式细胞术检测各组的细胞凋亡情况,并用Western-blot和荧光定量PCR检测相关蛋白及m RNA的表达水平。研究发现,H_2O_2能明显诱导EA.hy926细胞凋亡,而TFF可降低H_2O_2引起的内皮细胞凋亡,表现为凋亡率降低、线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)增加、裂解的半胱天冬酶-3,-9(cleaved caspase-3,-9)表达减少、髓细胞白血病因子-1(myeloid cell leukemia-1,Mcl-1)表达增加、磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B/糖原合成酶激酶-3β(phosphatidylinositol-3-kinase/protein kinase B/glycogen synthase kinase-3β,PI3K/Akt/GSK3β)通路中Akt、GSK3β蛋白的磷酸化水平升高。上述结果表明,TFF主要是通过激活PI3K/Akt/GSK3β通路,调节Mcl-1的表达,保护MMP,进而抑制caspase蛋白的剪切活化,抑制H_2O_2诱导的EA.hy926凋亡。

ATP对大鼠成肌细胞抗H_2O_2凋亡模型分析

为了探讨解决L6大鼠成肌细胞被H2O2损伤的问题,分别用1.210 48、2.420 96、4.841 92 g/L ATP溶液对成肌细胞处理后,利用MTT法、流式细胞仪和荧光凋亡抗体检测了细胞损伤程度.结果表明,经H2O2损伤后L6成肌细胞存活率明显降低,凋亡率增加.各种剂量ATP溶液均能提高L6成肌细胞的存活率,促使抗凋亡因子bcl-2表达增加,促凋亡因子bax表达降低,减少凋亡的发生.其保护程度随ATP溶液剂量的减少而增强,在1.210 48 g/L剂量时效果最为显著.ATP溶液对H2O2诱导损伤的L6大鼠成肌细胞具有明显保护作用,其机制是通过mTOR/STAT3信号通路增强凋亡抑制因子bcl-2表达、抑制凋亡促进因子bax表达,从而与抑制细胞凋亡有关.

野蔷薇根总黄酮对H_(2)O_(2)诱导损伤的HUVEC线粒体功能及凋亡通路的影响

目的探讨野蔷薇根总黄酮(TF-RM)对H_(2)O_(2)诱导损伤的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)线粒体功能及凋亡通路的影响。方法将SD雄性大鼠随机分正常对照组、维生素C组(0.08 g·kg^(-1))、TF-RM组(2.5 g·kg^(-1)),每组10只。灌胃给药,每天1次,连续7 d,制备含药血清。采用H_(2)O_(2)(950μmol·L^(-1))诱导HUVEC损伤,并分别与维生素C及TF-RM低、中、高剂量(5%、10%、15%)含药血清共培养24 h。采用DCFH-DA荧光定量法检测HUVEC中活性氧(ROS)的含量;JC-1染色法检测细胞线粒体膜电位的变化;Fluo-4染色法检测细胞内Ca^(2+)浓度;Western Blot法检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-9、Caspase-3蛋白的表达情况。结果与正常对照组比较,模型组HUVEC内的ROS水平、线粒体膜电位下降率、Ca^(2+)浓度以及Bax蛋白表达量显著升高,差异均有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,TF-RM各剂量组细胞内的ROS水平、Ca^(2+)浓度及Bax蛋白表达量均明显降低(P<0.05,P<0.01),Bcl-2蛋白表达量升高(P<0.05);TF-RM高剂量组的线粒体膜电位下降率明显降低(P<0.05);TF-RM中剂量组的Caspase 9蛋白表达量明显降低(P<0.05)。结论TF-RM能够改善H_(2)O_(2)诱导的HUVEC线粒体功能损伤,发挥对细胞凋亡的保护作用。

线粒体凋亡途径在H_2O_2诱导耐阿霉素人乳腺癌细胞凋亡中的作用

目的探索耐阿霉素的乳腺癌细胞株MCF-7/Adr凋亡的可能途径。方法采用耐药株MCF-7/Adr和野生株MCF-7/wt2种细胞株进行对比,以噻唑蓝分析(MTT)法探索H2O2导致其线粒体功能下降的浓度,观察细胞形态学和线粒体超微结构的改变。应用DNA凝胶电泳、AnnexinⅤ和PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡发生,Rh123共聚焦显微镜检测线粒体膜电位和P-gp功能,Western blot检测细胞色素C(Cyto C)的释放状况。结果4mmol/L H2O2引起MCF-7/Adr线粒体整体功能不可逆的进行性下降,线粒体空化,嵴肿胀。MCF-7/Adr凋亡率(96.52%)显著高于MCF-7/wt(18.57%,P<0.01)。凋亡DNA电泳仅见800、1600bp2个分子片段。MCF-7/Adr线粒体数量较MCF-7/wt减少,MCF-7/Adr膜电位下降。4mmol/L H2O2处理使MCF-7/Adr线粒体Cyto C释放至细胞质,MCF-7/wt仅少量Cyto C释放。结论P-gp阳性细胞因其线粒体的结构和功能改变的特点,较其野生株细胞更易经线粒体途径凋亡。提示以线粒体为靶点的药物有助于克服与P-gp表达有关的多药耐药。