H3亚型禽流感病毒二温式RT-PCR检测方法的建立及初步应用

为建立快速、准确检测H3亚型禽流感病毒（AIV）的方法,根据GenBank中H3亚型AIV HA基因序列,设计出1对特异性引物,通过优化反应条件建立了H3亚型AIV二温式RT-PCR检测方法。对该法进行特异性、敏感性检测,并对256份临床样品进行检测。结果表明,该法只能扩增H3亚型AIV,对其他亚型AIV及常见禽病病原体不扩增;对H3亚型AIV检测下限为1×10-4拷贝/μL;256份临床样品检测结果与病毒分离鉴定结果一致。与普通RT-PCR相比该法节省了30min,表明所建立的H3亚型AIV二温式RT-PCR方法是一种快速、简便和特异的检测方法。

H3N2亚型猫流感病毒抑制Ⅰ型干扰素机制分析

家猫对高致病性和低致病性禽流感病毒(AIV)均易感,感染后可以导致肺炎的发生,而其易感机制无相关报道。本研究利用H3N2亚型AIV家猫分离株(FIV)为模型,分析了感染后对IFN-β应答的影响及机制。结果显示H3N2 FIV可以很好的在猫肾细胞(CRFK)上复制并导致明显的细胞病变(CPE),在感染48h后病毒滴度达104±0.25TCID50/mL;通过荧光素酶报告系统发现该病毒感染后不能激活IFN-β应答,反而能够抑制SeV介导的IFN-β通路激活。机制分析发现病毒能够抑制IRF3通路进而阻断IFN-β应答。本研究首次发现猫源H3N2亚型AIV能够抑制Ⅰ型干扰素应答。

2株鸡源H3N8亚型禽流感病毒HA和NA基因遗传进化分析

为了解近年在广东省家禽中流行的H3N8亚型禽流感病毒的遗传进化特征,采用RT-PCR技术扩增了2株鸡源H3N8亚型禽流感病毒A/chicken/Guangdong/1176/2022株和A/chicken/Guangdong/1212/2022株的HA基因和NA基因,并与GenBank中收录的其他毒株序列进行了遗传进化分析。结果表明2株鸡源H3N8亚型禽流感病毒的HA蛋白裂解位点氨基酸序列均为^(340)PEKQTR|GLF^(348),只有1个碱性氨基酸,符合低致病性禽流感病毒的分子特征。HA基因的受体结合位点为226(Q)和228(T),维持唾液酸α-2,3-半乳糖受体重要结构的关键位点为190(F)和225(S),均发生了变化。遗传进化分析表明,2株禽流感病毒的HA基因均属于欧亚分支,与A/chicken/Dongguan/868株亲缘关系最近,而NA基因属于北美分支,与A/chicken/Dongguan/879株的相似性最高。本研究通过对两株鸡源H3N8亚型AIV的遗传进化和流行情况进行分析,为研究H3N8亚型AIV提供参考依据。