三种夏枯草对结核分枝杆菌的药物敏感性研究

目的:探讨夏枯草对结核分枝杆菌的药物敏感性。方法:对结核分枝杆菌H37Rv菌株,用三种夏枯草水煎剂作药物敏感试验。结果:“硬毛夏枯草水煎剂”对H37Rv菌株敏感性最好,而“山菠菜夏枯草水煎剂”与“夏枯草水煎剂”相对依次较差。结论:中药夏枯草对结核分枝杆菌具有较好的抑菌作用。

结核分枝杆菌H_(37)Rv株Rv0341编码基因iniB的克隆与表达

目的克隆并表达编码结核分枝杆菌H37Rv株Rv0341蛋白的iniB基因。方法利用PCR从结核分枝杆菌H37Rv株中扩增iniB基因,克隆于pET-22b(+)原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,镍离子亲和层析柱纯化后,通过SDS-PAGE和Western-blot鉴定目的蛋白的表达及反应原性。结果克隆并表达了iniB基因,表达的蛋白相对分子质量约43000,诱导2h表达量较高,约为25%。目的蛋白主要以包涵体形式存在于超声沉淀中,纯化后蛋白纯度可达98%以上。经Western blot检测,纯化蛋白与依赖利福平结核分枝杆菌(依R菌)肺结核患者血清呈现强阳性反应,而与非依R菌肺结核患者血清不反应。结论已成功克隆并表达了编码结核分枝杆菌H37Rv株Rv0341蛋白的iniB基因,表达的重组蛋白具有反应原性及特异性,为依R菌结核病临床血清学快速诊断方法的建立及试剂盒的研发奠定了基础。

pup/mpa/dop/pafA基因过表达结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv和无毒株H37Ra的构建

目的构建pup/mpa/dop/pafA基因过表达结核杆菌国际标准强毒株H37Rv和无毒株H37Ra。方法提取已构建的结核杆菌-大肠埃希菌重组穿梭质粒PMV361pup,PMV361mpa,PMV361dop和PMV361pafA,利用电转化方法分别转入H37Rv和H37Ra感受态细胞,构建pup/mpa/dop/pafA基因过表达H37Rv和H37Ra,同时优化电转化脉冲电压,并应用QRT-PCR进行检测及鉴定。结果成功构建了pup/mpa/dop/pafA基因过表达H37Rv和H37Ra,重组菌均能表达目的基因,在2 100~2 300V脉冲电压范围内构建的菌株目的基因相对表达量与电压呈正相关。结论构建的pup/mpa/dop/pafA基因过表达H37Rv和H37Ra均能表达相应目的基因,以电压为2 300V电转化构建的菌株表达量较高。