H3K4m3和H3K9m3修饰对胰岛组织特异性基因表达的影响

目的通过比较不同细胞类型之间胰腺十二指肠同源盒1（Pdx-1）、配对盒基因4（Pax4）、MafA（mast cell function associated antigen）和Nkx6．1等胰岛组织特异性基因其转录起始区的H3K4m3和H3K9m3修饰的差异，探讨H3K4nd和H3K9m3修饰对胰岛组织特异性基因表达的作用。方法采用染色质免疫共沉淀．实时定量聚合酶链反应（PCR）法检测小鼠胚胎干细胞（mES，1×10^7）、小鼠成纤维细胞株NIH3T3细胞（1×10^7）和小鼠B细胞株NIT-1细胞（1×10^7）三者中的胰岛组织特异性基因、Oct4基因和MLH1基因转录起始区H3K4rrd和H3K9m3修饰的状况。同时采用实时定量逆转录（RT）-PCR检测上述3种细胞各基因mRNA表达水平。分析H3K4m3和H3K9m3修饰改变与基因表达之间的关系。结果NIT-1细胞中Pdx-1、Pax4、MafA、Nkx6．1等胰岛组织特异性基因转录起始区的H3K4m的修饰水平分别为：（4．84±0．05）％、（9．91±1．33）％、（10．64±0．87）％、（0．23±0．03）％，与mES细胞比较明显增高（P〈0．05），基因表达；NIH3T3细胞中Pdx-1、Pax4、MafA、Nkx6．1等胰岛组织特异性基因转录起始区的H3Kgm3的修饰水平分别为：（0．64±0．21）％、（7．04±1．29）％、（0．39±0．10）％、（2．35±0．81）％，与mES细胞比较明显增高（P〈0．05），基因不表达。结论mK4n13与H3K9m3修饰能相互协调，共同调控胰岛组织特异性基因的表达。

小鼠不同细胞间组蛋白修饰变化对MafA基因转录表达的影响

目的通过比较不同细胞类型之间MafA基因转录起始区的组蛋白修饰差异,探讨组蛋白修饰对MafA基因转录表达的作用。方法采用染色质免疫共沉淀-实时定量PCR法检测小鼠胰岛素瘤β细胞(NIT-1)、NIH小鼠成纤维细胞(NIH3T3)及小鼠胚胎干细胞(mES)三者中的MafA和MLH1基因转录起始区组蛋白修饰(H3K4m3、H3K9m3和H3乙酰化)的状况。同时采用实时定量RT-PCR检测上述三种细胞各基因mRNA表达水平。分析基因的H3K4m3、H3K9m3和H3乙酰化修饰与基因表达之间的相互关系。结果 (1)以mES细胞为参照,NIT-1细胞MafA基因的转录起始区的H3K4m3修饰水平明显增高(P<0.05),H3K9m3修饰水平明显降低(P<0.05);NIH 3T3细胞MafA基因的转录起始区的H3K9m3修饰水平明显增高(P<0.05),H3K4m3修饰水平明显降低(P<0.05);(2)MafA基因的仅在NIT-1细胞表达,其表达与H3K4m3修饰存在直线相关(相关系数0.995);与H3K9m3修饰存在直线负相关(相关系数-0.751);(3)管家基因MLH1的表达与所检测组蛋白修饰无相关性。结论 H3K9m3与H3K4m3修饰能相互协调,共同调控MafA基因的表达,对胚胎干细胞向β细胞分化具有重要的意义。