2022—2023年北京市通州区甲型H3N2亚型流感病毒血凝素基因特征分析

目的分析2022—2023年北京市通州区流感病原学监测中甲型H3N2亚型流感病毒的血凝素(hemagglutinin,HA)基因特性,为流感防控提供科学依据。方法对通州区2022—2023年流感病原学监测结果进行统计分析,选取不同时间分离到的34株甲型H3N2亚型流感毒株,进行HA基因扩增和测序,应用MEGA11进行HA基因的核苷酸和氨基酸变异分析,采用邻接法构建HA基因遗传进化树,在线预测N-糖基化位点,分析其基因变异和进化特征。结果2022—2023年共检测流感病原学监测样本3660件,流感病毒核酸阳性率为21.50%,其中甲型H3N2亚型流感病毒占比为57.81%。发热疫情样本共计4855件,流感病毒核酸阳性率为54.25%,其中甲型H3N2亚型流感病毒占比为61.50%。34株甲型H3N2亚型流感病毒的HA基因序列与疫苗株A/Darwin/9/2021相比,核苷酸相似度为97.00%~98.50%,氨基酸相似度为97.40%~98.10%。基因进化分析显示,2022—2023均分布在3c.2a1b.2a分支,2022年8—11月分离的14株毒株分布在1a.1亚分支,2023年2—3月分离的20株毒株则分布在2a.3a.1亚分支。与疫苗株相比,2022—2023年的34株毒株在4个抗原决定簇上(B、C、D和E)发生了多位点氨基酸变异,且在186和225位点上均发生了替换。2022年的14株毒株,增加了158NYTY位点,存在13个潜在糖基化位点,2023年的20株分离株122NESF糖基化位点丢失,共有12个潜在糖基化位点存在。结论2022—2023年,北京市通州区人群中流行的甲型H3N2亚型流感病毒分布在2个进化分支上,2023年3C.2a1b.2a.2a.3a.1分支取代了2022年3C.2a1b.2a.1a.1分支,成为流行株。及时分析流感病毒基因特性和进化趋势,对流感的防控有重要意义。

7例儿童甲型H3N2流感病毒相关的致命性急性坏死性脑病

目的探讨H3N2流感病毒相关急性坏死性脑病的疾病特点,总结诊治经验。方法整理江西省儿童医院2022年6月1日至2022年6月30日收治的7例儿童急性坏死性脑病患儿的病例资料,分析此次流行季节甲型H3N2流感病毒相关急性坏死性脑病的临床表现、辅助检查、治疗方案及预后。结果7例患儿均有高热乃至超高热,其中4例患儿发热48 h内出现抽搐、意识障碍,随后迅速恶化出现脑干反射消失;3例患儿入院时即有DIC、休克、出血表现;其中5例患儿入院时流感快速抗原检测均阴性,行核酸检测甲型流感病毒呈阳性,7例患儿省疾控预防中心(CDC)病原学分型为H3N2,2例发病早期头颅CT检查为正常;7例患儿1例抢救无效死亡,4例因脑死亡放弃治疗后死亡,2例痊愈出院,死亡率71.4%。结论本文夏季流行的流感病毒为H3N2,快速抗原检测可为阴性,接种流感疫苗不能完全避免感染;甲流H3N2流感病毒致坏死性脑病病情进展迅速,易出现中枢性循环衰竭、出血、休克、DIC,救治困难,死亡率高。

鸽H9N2亚型禽流感病毒的分离鉴定及致病性试验

H9N2亚型禽流感病毒属于A型流感病毒,目前H9N2亚型禽流感病毒不仅可以感染家禽,而且可以感染猪、猫等哺乳动物,甚至出现人类感染现象。因此,H9N2亚型流感病毒不仅影响畜禽的健康养殖,同时也具有一定的公共卫生学意义。近年来鸽群感染流感病毒时有报道,这其中包括H5N1、H7N9以及H9N2亚型禽流感病毒。虽然H9N2亚型禽流感毒株的致病性相对于H5和H7亚型较低,但是该亚型病毒在我国家禽中存在较为普遍,且目前从鸽子已分离到重组的H9N2毒株,该毒株不仅引起鸽子感染而且具有优先与人类呼吸道表面受体结合的能力,因此加强流感病毒在鸽群中流行情况具有重要的现实意义。

H3N2亚型犬流感病毒实验感染模型的建立

【目的】建立H3N2亚型犬流感病毒(canine influenza virus,CIV)实验感染模型,了解犬流感的发病特征,为疫苗效力评价奠定基础。【方法】6—13月龄CIV血凝抑制(haemagglutination inhibition,HI)抗体阴性(HI<1﹕10)比格犬26只,其中3只鼻腔喷雾PBS作为阴性对照,另23只分5组(10、103、105、106、107 EID50/只),分别为3、5、5、5、5只/组,每只犬各鼻腔喷雾H3N2亚型CIV(A/canine/China/Huabei-170607/2017(H3N2),简称HB株)病毒液1mL。观察临床症状、肺脏病变和肺脏组织病理学变化,计算肺实变率,检测病毒和HI抗体效价。【结果】10 EID50剂量感染组,3只犬均未出现明显临床症状,肺脏均无明显眼观病变,肺脏实变率0%,无组织病理学变化,病毒检测均为阴性,HI抗体效价几何平均值(geometric mean titer,GMT)为1﹕15.9;103 EID50剂量感染组,5只犬中有4只喘息、流鼻汁和咳嗽,1只犬未表现出临床症状,2只犬肺脏出现轻微实变,实变率平均为1.4%,4只犬病毒分离阳性,HI抗体效价GMT为1﹕320;105 EID50剂量感染组,5只犬在攻毒后5 d开始出现流鼻汁和咳嗽等临床症状,肺脏均有实变,实变率平均为4.2%,肺泡间隔增宽,病毒分离均为阳性,HI抗体效价GMT为1﹕2940.7;106 EID50剂量感染组,5只犬在攻毒后4 d体温升高、流鼻汁、咳嗽,临床症状出现较105 EID50剂量感染组早1 d,肺脏实变程度增加,实变率平均为17.9%,肺泡间隔增宽,病毒分离均为阳性,HI抗体效价GMT为1﹕2228.7;107 EID50剂量感染组,5只犬在攻毒后3 d表现出体温升高、流鼻汁、咳嗽等严重的临床症状,症状出现较106 EID50剂量感染组早1 d,肺脏严重实变,实变率平均为29.0%,肺泡间隔增宽,病毒分离均为阳性,HI抗体效价GMT为1﹕2940.7;对照犬均未出现明显临床症状,肺脏均无明显眼观病变,无组织病理学变化,病毒检测均为阴性,HI抗体效价均<1﹕10。【结论】106 EID50剂量病毒是能引起犬明显发病的最小病毒接种剂量,建立起H3N2亚型CIV实验感染模型。

杭州市2013～2014年流感暴发流行期甲型流感病毒H3N2亚型基因特性分析

目的分析杭州2013~2014年冬春季流感暴发期间流行的甲型流感病毒H3N2亚型的分子特性。方法选取H3N2阳性标本提取病毒RNA,PCR扩增全基因组并测序,构建血凝素（HA）及神经氨酸酶（NA）分子进化树,对H3N2亚型的病毒进化进行分析。结果 6个代表株中H3N2未发生片段间的重配。以WHO推荐流感疫苗株A/TEXAS/50/2012为参考,HA1蛋白主要抗原决定区发生N145S氨基酸替换,并有其他多个位点的突变。病毒基质蛋白（M2）的金刚烷胺耐药位点全为S31N,神经氨酸酶抑制剂耐药位点未发生突变。结论 H3N2亚型甲型流感病毒HA1蛋白的氨基酸变异与2013~2014年杭州地区暴发流行有关。另外,病毒已出现对金刚烷胺的耐药突变,而对神经氨酸酶未发生耐药突变。

2015年盐城市甲型H3N2亚型流感病毒HA1基因分子进化特征分析

目的了解盐城市2015年甲型H3N2流感病毒分离株表面血凝素HA1基因分子进化特征。方法对哨点医院流感样病例标本进行核酸检测、病毒分离;选取甲型H3N2毒株,采用一步法RT-PCR扩增其HA1区,并进行序列分析,采用DNAStar软件包中MegAlign进行核苷酸及氨基酸同源性分析,以MEGA6.0软件进行序列比对及基因种系进化特征分析。结果 2015年盐城市流感样病例(ILI)监测样本中流感病毒核酸阳性率为8.36%,乙型、甲型H3N2、新甲H1N1型交替流行。抽取的7株甲型H3N2分离株,其HA1基因核苷酸同源性为98.7%~100.0%,氨基酸同源性为97.9%~100.0%;其HA1区氨基酸位点变异呈散在性分布,均未发生氨基酸的丢失和插入,氨基酸突变主要位于抗原决定簇的A、B和C区。除A/JSYC/11025/2015外,其余6株新增2个糖基化位点,其中158aa位点位于抗原决定簇B区。结论 2015年盐城市流感流行以甲型H3N2和乙型Yamagata系为主,具有典型的冬、夏双高峰特点。病毒HA1区基因特性逐渐发生变异,可能导致抗原变化,应进一步加强流感病原学监测。

不同治法体内抗甲3(H_3N_2)亚型流感病毒作用的实验研究

目的:探讨辛凉解表、辛温解表及祛湿解表等不同治法在体内抗甲3(H3N2)亚型流感病毒的作用。方法:三种治法的代表方分别选择银翘散、桂枝麻黄各半汤和新加香薷饮,设正常对照组、阳性药物(病毒唑)组和三种治法组,分别观察不同治法对甲3(H3N2)亚型流感病毒小鼠肺炎的影响,对小鼠感染甲3(H3N2)亚型流感病毒的死亡保护作用和延长生命作用。结果:以肺指数为评价指标,三种不同治法组与模型对照组相比(P<0.01),差异有统计学意义;三种不同治法组之间比较以及三种不同治法组和阳性药物组之间比较,差异无统计学意义。不同处理组间死亡率比较和不同处理组间存活时间的比较,差异无统计学意义。结论:三种不同治法对甲3(H3N2)亚型流感病毒小鼠肺炎均有抑制作用,但三种不同治法之间以及三种不同治法和阳性药物之间作用并无差异性。三种治法对小鼠感染甲3(H3N2)亚型流感病毒的死亡保护作用和延长生命作用均不明显。

吉林省2018-2020年甲型H3N2亚型流感病毒耐药基因分析

目的掌握2018-2020年吉林省内H3N2亚型流感流行株对金刚烷胺类药物以及神经氨酸酶抑制剂类药物的耐药情况,为流感的临床治疗及预防控制提供参考依据。方法选取甲型H3N2亚型流感毒株34株,对M2和NA基因进行PCR扩增,测序后对耐药位点进行分析。结果2018-2020年吉林省分离到流感毒株981株,其中甲型流感病毒毒株934株,乙型流感毒株47株。在分离到的甲型流感病毒毒株中,57.49%为H1N1pdm亚型毒株,39.61%为H3N2亚型毒株。对34株H3N2亚型流感病毒测序结果显示M2基因S31N耐药位点上发生了突变;在NA耐药相关基因位点E119V、Q136K、D151A、I222V、H274Y、R292K、N294S均未发生突变。结论吉林省2018-2020年以甲型流感流行为主。34株甲型H3N2亚型流感病毒均对金刚烷胺类药物耐药,但仍对神经氨酸酶抑制剂敏感。

辽宁省2016～2017年甲型H3N2亚型流感病毒耐药性分析

目的分析辽宁省2016~2017流感年度H3N2亚型流感病毒M2蛋白和神经氨酸酶(NA)基因特点,了解并掌握该年度省内流感毒株对烷胺类药物及NA抑制剂类药物的耐药情况,为流感的治疗及防控提供科学依据。方法选取辽宁省内各市流感样病例,经病毒分离获得的甲型H3N2亚型流感毒株55株,对M2基因及NA基因进行扩增并测序后对耐药位点进行分析。结果 2016年4月~2017年3月,辽宁省共采集流感样病例标本13956份,分离流感毒株1528株。其中甲型流感毒株835株,H3N2亚型毒株378株,约占甲型流感毒株的45.3%。测序获得55株H3N2亚型流感毒株的M2基因片段(第572~1027核酸位点和NA基因片段(第1~914位核苷酸位点)核苷酸序列。经比对分析,全部检出S31N突变,对烷胺类药物均表现为耐药。此外,所有毒株的第51位均发生了异亮氨酸到缬氨酸的突变。NA基因耐药位点均未检出突变,未发现NA抑制剂类药物的耐药株。结论辽宁省2016~2017年流行的甲型H3N2亚型流感病毒普遍对烷胺类药物耐药,未发现NA抑制剂类药物的耐药株。因此,奥司他韦等NA抑制剂类药物是治疗H3N2型流感的敏感药物。但在实际工作中仍应对耐药性进行监测,实时关注耐药株的产生。

贵州省3株甲3(H3N2)亚型流感病毒的血凝素基因HA1区序列分析

目的对贵州省3株甲3(H3N2)亚型流感病毒的血凝素基因HA1区序列进行分析。方法提取核酸,PCR扩增,测序分析、比对。结果同源性分析和系统发育树都说明了相同(或相近)年份的毒株核苷酸序列同源性较高,亲缘关系较近;不同年份的毒株核苷酸序列的同源性较低,亲缘关系较远;3株H3N2毒株共有59各位点核苷酸替换。结论通过序列测定分析,结果表明1995-2005年纵向比较,贵州省甲3(H3N2)亚型流感病毒的血凝素基因HA1区序列发生了变异;通过与Genbank上相应年份标准株横向比较,贵州省3株甲3(H3N2)亚型流感病毒的血凝素基因HA1区序列未发生大的变异,仅有少数核苷酸的替换。

云南野鸟源H9N2亚型AIV的遗传进化分析

【目的】分析云南纳帕海国际重要湿地H9N2亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)的遗传进化和分子特征,掌握H9N2亚型AIV在野禽中的流行特点,为禽流感疫情防控提供数据支持。【方法】采集2022―2023年云南省香格里拉纳帕海国际重要湿地野禽粪样及其周边家禽喉头、泄殖腔和环境水样,经尿囊腔接种10日龄SPF鸡胚分离病毒,结合HA试验和RT-PCR扩增鉴定AIV亚型。利用MBTuni-12/13引物同时扩增H9N2亚型AIV毒株的8个基因(HA、NA、M、PB2、NS、NP、PA及PB1)节段,利用二代测序获取全基因组序列,并分析遗传进化关系及关键氨基酸突变位点。【结果】分离到的4株野鸟源H9N2亚型AIV的HA、NA基因源自Y280-like亚系,M、PB 2基因为G1-like亚系,NS、NP、PA、PB 1基因为F/98-like亚系,表明4株分离株为多种亚型的重组毒株,重组模式与2013年以后在中国流行的G57基因型一致。序列相似性分析结果显示,4株H9N2亚型AIV分离株内部基因与H7N9、H5N6、H5N2等亚型AIV相似性较高,遗传多样性特征突出。HA蛋白裂解位点均符合低致病性禽流感特征,获得了多个可增加跨种感染风险及与哺乳动物致病力增强相关的氨基酸突变位点,包括A198T、Q234L、N166D(HA),I292V、A558V(PB2),I368V、L13P(PB1),N30D、T215A(M1),以及P42S(NS1)等。4株野鸟源H9N2亚型AIV毒株具有家禽源同亚型毒株特征,野禽源AIV可能源于家禽。【结论】从云南纳帕海国际重要湿地分离到的4株野鸟源H9N2亚型AIV可能是由家禽传播的多源重配病毒,属于G57基因型,且具有多个适应哺乳动物宿主相关的氨基酸突变位点。

基于图卷积网络的甲型流感H3N2抗原性预测

流感病毒血凝素蛋白的持续和累积变化会产生新的抗原株,能够逃避人类免疫并引起季节性流感或流感大爆发。及时识别新的抗原变异体,对疫苗筛选和流感预防是至关重要的。图嵌入模型在部分数据缺失的情况下仍然可以实现有效的相互关系建模。针对甲型流感病毒H3N2,提出一种基于图卷积神经网络的抗原性预测方法,获取流感毒株低维稠密嵌入向量,同时对序列信息进行编码并作为补充特征,利用深度神经网络模型对特征进行融合并学习关键的抗原特征,完成抗原性预测。在两个数据集上的实验结果表明,该方法相比其他同类方法,显著提升了抗原相似性预测性能,具有良好的鲁棒性和可扩展性。此外,从实验中还可以看出,图卷积神经网络可以有效地获取抗原相似关系的抗原特征。

2株广西鸭源H6N2亚型禽流感病毒遗传进化以及对BALB/c小鼠的致病性分析

目的:探讨广西鸭源H6N2亚型禽流感病毒的分子遗传特征,评估其对哺乳动物BALB/c小鼠的致病性。方法:选择前期在广西分离的2株鸭源性H6N2禽流感病毒A/DK/GX/3101/2018(GX3101)、A/DK/GX/5220/2018(GX5220),基因测序和遗传进化分析病毒全基因组的核苷酸同源性及遗传进化,受体结合特异性法分析2株病毒的受体结合特性,应用BALB/c小鼠评估鸭源H6N2病毒的致病性。结果:2株H6N2病毒属于欧亚谱系,HA裂解位点处为PQIETG/GL,属低致病性禽流感病毒特征,HA蛋白氨基酸位点出现E190V位点的氨基酸突变,2株病毒均识别与结合禽型SAα-2,3 Gal受体。病毒接种小鼠后,肺组织病毒分离培养阳性,小鼠肺组织出现炎症细胞浸润、肺泡结构完整性破坏,免疫组化检测病毒抗原显示,GX3101病毒接种小鼠的肺组织出现流感病毒核蛋白(NP)阳性。结论:广西鸭源H6N2毒株具有禽流感病毒的特点,可不经适应直接跨种属间屏障感染哺乳动物小鼠,须密切监测家禽中流感病毒H6N2流行和进化演变。

人甲型流感病毒H3N2亚型中和表位串联基因原核表达载体的构建

目的构建人甲型流感病毒H3N2亚型中和表位串联基因原核表达载体,并在大肠杆菌中表达目的蛋白。方法合成人甲型流感病毒H3N2亚型中和表位的串联基因,克隆入pET-28a(+)载体中,构建重组表达载体pET-28a-H3,经酶切鉴定和DNA序列分析后,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,并进行ELISA和Westernblot鉴定。结果重组载体pET-28a-H3酶切片段大小和DNA序列分析与预期结果一致。表达的目的蛋白相对分子质量约9400,与相应的多克隆抗体反应性良好。结论已成功构建人甲型流感病毒H3N2亚型中和表位串联基因原核表达载体pET-28a-H3,并表达了目的蛋白,为制备单克隆和多克隆抗体奠定了基础。

2016-2017年我国甲型流感病毒H3N2亚型HA和NA基因的分子特征分析

目的探讨2016-2017年我国甲型流感病毒H3N2亚型血凝素(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶(neuraminidase,NA)基因的分子特征,为甲型流感病毒H3N2亚型的防控提供科学依据。方法从全球共享禽流感数据库(GISAID)中获得我国2016~2017年分离的525株甲型流感病毒H3N2亚型病毒和13株H3N2亚型参考株的HA和NA基因序列。应用MEGA 6.0软件分析HA和NA的分子进化特征、氨基酸位点和耐药位点的变异情况。结果进化树分析显示13株参考株之间HA和NA氨基酸的同源性均为96.9%~99.1%。2016-2017年我国甲型流感病毒H3N2亚型的病毒株HA和NA氨基酸序列之间同源性均为96.3%~100%,HA和NA的优势亚分支均为3C.2a.1,相当一部分毒株分型不够明确。HA氨基酸变异分析显示9株发生N121E突变,103株发生N121K的突变且主要来源于2017年的香港毒株;182株发生G/R142K突变;A/Hong_Kong/3079/2017-HA和A/Guangdong-Chengguan/1383/2017-HA均发生A128I突变;NA蛋白仅3株(A/Hunan-Suxian/1980/2016-NA、A/Hunan-Yuhua/11799/2016-NA和A/Ningxia-Yuanzhou/1657/2016-NA)发现H275Y耐药位点突变。结论 2016-2017年我国甲型流感病毒H3N2亚型的HA和NA蛋白与参考株间存在一定的差异,优势亚型均为3C.2a.1;与病毒的毒力及药物相关的部分关键氨基酸位点发生变异。应密切关注H3N2病毒的分子特征,为其防控提供参考。

鸡源性禽流感病毒H6N2在人源肺组织细胞中的复制

目的:评估鸡源性H6N2亚型禽流感病毒在MDCK、A549和离体人肺中的复制效率,探讨该病毒跨种间屏障感染人的潜能。方法:选取2株鸡源性H6N2禽流感病毒A/CK/HZ/260/2017、A/CK/DG/651/2019,基因测序并分析该2株病毒全基因组的核苷酸同源性及遗传进化,固相直接结合法分析分析病毒的受体结合特异性,应用MDCK、A549和人肺组织评估病毒的复制。结果:鸡源性H6N2病毒基因来源于欧亚谱系,HA、NA均属于GD-SZBJ-like分支,内部基因主要由两个H6N2病毒进化分支的重配进化而来,包括GD-SZBJ-like分支和G1291-like分支,属低致病性禽流感病毒,仅结合禽型受体SAα-2,3Gal,HA的受体结合域未发现向有利于结合人型受体突变。病毒均可在MDCK和A549细胞中复制,离体人肺组织病毒分离培养阳性,免疫组化检测病毒抗原显示,A/CK/HZ/260/2017病毒株在人肺组织和部分细支气管出现流感病毒核蛋白阳性,A/CK/DG/651/2019病毒株在在人肺组织出现流感病毒核蛋白阳性。结论:鸡源性H6N2亚型禽流感病毒仍属低致病性禽流感病毒,仅识别与结合禽型受体,但病毒可不经适应直接在哺乳动物和人下呼吸道进行有效复制,提示鸡源性H6N2禽流感病毒具有跨种属感染人的潜能。

H3N2亚型猪流感病毒中国分离株的克隆纯化及生物学特性

以有限稀释克隆法对 2 9株 H3N2亚型猪流感病毒 ( SIV)不同地区分离株进行纯化 ,并对其生物学特性进行了研究。结果 ,8株对鸡呈现中等致病力 ,2 1株对鸡呈现低致病力。不同地区 SIV分离株 (第 5代 )的 EID50 差异较大 ,以安徽分离株最高 ,为 10 - 1 0 .77/ 0 .2 m L,其他毒株在 10 - 5.5～ 10 - 1 0 .56 / 0 .2 m L 之间。黑龙江省分离株和浙江省分离株的L D50 高达 10 - 2 .84 / 0 .1m L ,其他分离株在 10 - 1 .1 7～ 10 - 2 .56 / 0 .1m L之间。经鸡胚分离传代后 ,SIV分离株均能凝集0 .7%人“O”型血、绵羊、兔、豚鼠、小鼠、大鼠及鸡的红细胞 ,其红细胞凝集谱的差异主要表现在对马、牛、驴、猪红细胞的凝集特性上。大部分 SIV分离株为热不稳定型 ,部分毒株表现为中等热稳定型和热稳定型。从其抗原特性看 ,大部分 SIV分离株表现为亲和相 ,对 AIV参考毒株 DKUK6 3和 SIV参考毒株 SWTN77表现出较高的 HI滴度 ;部分分离株经鸡胚传代后 ,出现了相别的变异。

禽流感病毒H1、H3、H5、N2亚型多重RT-PCR检测方法的初步研究

目的根据禽流感病毒H1、H3、H5亚型的HA基因和N2型NA基因的保守序列,设计出四对RT-PCR引物,建立一步法多重RT-PCR对禽流感H1、H3、H5、N2四亚型进行快速检测。方法利用所设计的四对引物,通过对该方法扩增条件的优化,成功建立快速检测禽流感病毒H1、H3、H5、N2四亚型的一步法多重RT-PCR。利用禽流感H1、H3、H5、N2四亚型毒株和其它相关标准毒株进行敏感性和特异性试验。结果与结论所建立的一步法多重RT-PCR具有较高的特异性和敏感性,与禽流感其它亚型和NDV、IBV、ARV?IBDV的核酸均无交叉反应。用该方法检测现场样品395份(4省20多个地区),结果与经典检测方法一致。

H3N2亚型猪流感病毒实时荧光定量PCR快速检测方法的建立

根据H3N2亚型猪流感病毒(SIV)血凝素(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶(neuraminidase,NA)基因保守序列,分别设计并合成了特异性引物和TaqMan MGB探针,利用实时荧光定量PCR技术检测SIV。使用含有选定检测序列的重组质粒pMD18-H3HA、pMD18-N2NA标准品绘制标准曲线,其相关系数分别为0.99015(H3HA)和0.99947(N2NA)。检测结果显示,该方法的敏感性可达100 copies/μL,除H3N2亚型SIV外,对H1亚型、H9亚型SIV以及猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、猪瘟病毒、猪生殖与呼吸综合征病毒和猪2型圆环病毒的检测均为阴性,应用该方法对实验室感染样品进行检测,其结果与病毒分离结果的符合率为95.83%。表明,该方法特异性强、重复性好,有望成为H3N2亚型SIV的一种特异、敏感、快速的定量检测方法。

2010-2012年福建省H3N2亚型流感病毒血凝素基因特征分析

目的通过对2010—2012年福建省分离的H3N2亚型流感毒株血凝素HA1基因进行分析，了解2010-2012年福建省H3N2亚型流感病毒的基因特征和变异规律。方法随机选择28株毒株，提取病毒RNA，采用RT-PCR扩增目的片段，纯化PCR产物后进行测序；利用DNAstar和Mega4．0等生物信患学软件进行核苷酸整理、拼接、校对、差异性比较以及基因进化树构建等分析研究。结果28株H3N2亚型流感病毒HAl区核苷酸同源性在96．4％～100％之间。基因系统进化分析显示，其进化规律都是沿着树枝主干随着时闻推移向，上延伸，序列的差异和年代成正比。2010—2012年间HAl区共出现43个氨基酸位点的变化，其中有10个氨基酸位点变异累计涉及4个抗原决定簇，2个变异位点发生在受体结合位点（RBS）及其附近，应予高度重视。结论相对于A／Perth／16／2009疫苗代表株，2012年的部分H3N2亚型流感出现了抗原漂移；部分毒株已出现氨基酸位点的改变，并涉及抗原决定簇及受体结合位点，提示2010—2012年福建省人群中流行的H3N2亚型流感正逐渐发生变异，应加强流感病原学监测，以及时发现新的流感变异株，为福建省流感防控提供科学依据。