2022-2023年江苏省H3N2流感病毒分子特征及耐药性分析

目的根据2022-2023年江苏省监测年度流感病毒实验室检测结果,对H3N2流感病毒的基因特征和耐药性进行深度分析,评估疫苗和药物的有效性。方法对全省流感网络实验室分离的29株H3N2分离株进行全基因组扩增与测序,构建HA和NA基因进化树。分析抗原表位、糖基化位点以及耐药位点的突变特性,并采用荧光发光法对流感病毒神经氨酸酶进行检测。结果江苏省29株H3N2分离株的同源性较高,与国内参考株和2021-2022年度疫苗株位于同一进化分支,与国外参考株和2022-2023年度疫苗株则处于不同进化分支。与2021-2022年度疫苗株A/Cambodia/e0826360/2020相比,江苏省2022-2023年度分离的H3N2流感病毒HA蛋白发生了4个氨基酸位点的替换,NA蛋白发生了2个氨基酸位点的替换,糖基化位点、受体结合位点以及氨基酸残基保守区域未发生改变。IC_(50)结果表明,29株H3N2分离株对奥司他韦和扎那米韦两种抗病毒药物均未产生耐药。结论江苏省2022-2023年监测年度的流感病毒主要为甲型H3N2流感病毒。通过对流感病毒的HA和NA基因变异位点以及耐药性监测,及时了解病毒基因的变异情况,为选择有效的疫苗株提供科学依据,从而有助于预防和控制流感病毒的暴发和流行。

2022—2023年北京市通州区甲型H3N2亚型流感病毒血凝素基因特征分析

目的分析2022—2023年北京市通州区流感病原学监测中甲型H3N2亚型流感病毒的血凝素(hemagglutinin,HA)基因特性,为流感防控提供科学依据。方法对通州区2022—2023年流感病原学监测结果进行统计分析,选取不同时间分离到的34株甲型H3N2亚型流感毒株,进行HA基因扩增和测序,应用MEGA11进行HA基因的核苷酸和氨基酸变异分析,采用邻接法构建HA基因遗传进化树,在线预测N-糖基化位点,分析其基因变异和进化特征。结果2022—2023年共检测流感病原学监测样本3660件,流感病毒核酸阳性率为21.50%,其中甲型H3N2亚型流感病毒占比为57.81%。发热疫情样本共计4855件,流感病毒核酸阳性率为54.25%,其中甲型H3N2亚型流感病毒占比为61.50%。34株甲型H3N2亚型流感病毒的HA基因序列与疫苗株A/Darwin/9/2021相比,核苷酸相似度为97.00%~98.50%,氨基酸相似度为97.40%~98.10%。基因进化分析显示,2022—2023均分布在3c.2a1b.2a分支,2022年8—11月分离的14株毒株分布在1a.1亚分支,2023年2—3月分离的20株毒株则分布在2a.3a.1亚分支。与疫苗株相比,2022—2023年的34株毒株在4个抗原决定簇上(B、C、D和E)发生了多位点氨基酸变异,且在186和225位点上均发生了替换。2022年的14株毒株,增加了158NYTY位点,存在13个潜在糖基化位点,2023年的20株分离株122NESF糖基化位点丢失,共有12个潜在糖基化位点存在。结论2022—2023年,北京市通州区人群中流行的甲型H3N2亚型流感病毒分布在2个进化分支上,2023年3C.2a1b.2a.2a.3a.1分支取代了2022年3C.2a1b.2a.1a.1分支,成为流行株。及时分析流感病毒基因特性和进化趋势,对流感的防控有重要意义。

2015年盐城市甲型H3N2亚型流感病毒HA1基因分子进化特征分析

目的了解盐城市2015年甲型H3N2流感病毒分离株表面血凝素HA1基因分子进化特征。方法对哨点医院流感样病例标本进行核酸检测、病毒分离;选取甲型H3N2毒株,采用一步法RT-PCR扩增其HA1区,并进行序列分析,采用DNAStar软件包中MegAlign进行核苷酸及氨基酸同源性分析,以MEGA6.0软件进行序列比对及基因种系进化特征分析。结果 2015年盐城市流感样病例(ILI)监测样本中流感病毒核酸阳性率为8.36%,乙型、甲型H3N2、新甲H1N1型交替流行。抽取的7株甲型H3N2分离株,其HA1基因核苷酸同源性为98.7%~100.0%,氨基酸同源性为97.9%~100.0%;其HA1区氨基酸位点变异呈散在性分布,均未发生氨基酸的丢失和插入,氨基酸突变主要位于抗原决定簇的A、B和C区。除A/JSYC/11025/2015外,其余6株新增2个糖基化位点,其中158aa位点位于抗原决定簇B区。结论 2015年盐城市流感流行以甲型H3N2和乙型Yamagata系为主,具有典型的冬、夏双高峰特点。病毒HA1区基因特性逐渐发生变异,可能导致抗原变化,应进一步加强流感病原学监测。

2017—2018年广州市H3N2流感病毒流行及血凝素基因分子特征分析

目的对广州市H3N2流感病毒进行基因变异和进化分析,为H3N2流感科学防控提供科学依据。方法对广州市2017年1月-2018年9月流感监测标本进行H3N2病毒检测和分离,并对HA基因进行测序,通过生物信息学软件分析病毒变异和进化特点。结果所监测的8 535份标本中,检出H3N2流感阳性标本386份,阳性率为4.52%。对其中16株分离株HA基因测序结果显示,与同年度疫苗推荐株A/Hong Kong/4801/2014相比,2017年广州H3N2病毒A 区抗原位点变异频率较高,多发生于140位、144位和150位,其中有7株病毒发生新抗原漂移,变异毒株占比43.75%。受体结合位点变异主要发生在前壁,位于T131K位和T135K(N)位。糖基化位点变异同样多发生于A区抗原位点和受体结合位点前壁。2017年广州H3N2流感病毒均位于3C.2a分支,但分支内又进一步进化形成3个不同的小流行分支,包括3C.2a1分支,以及与2016年北京、2017年美国分离株亲缘相近的另外两个小分支。结论 2017年广州H3N2流感病毒HA蛋白重要氨基酸位点的变异表现遗传多态性,特别是在抗原性上可能发生了较大变异。在基因进化上表现为多样性和复杂性,呈现多分支进化特点。因此有必要密切监测流行毒株的进化趋势,以期及时对疫苗株的匹配性进行有效评估。

2019-2020年山东省H3N2流感病毒抗原性及血凝素基因特征分析

目的了解2019-2020年流感监测年度山东省分离的H3N2亚型流感病毒抗原性及血凝素(hemagglutinin,HA)基因遗传进化规律与氨基酸变异情况。方法用免疫雪貂后的抗血清进行红细胞凝集抑制试验,对2019年4月至2020年3月山东省分离的40株H3N2亚型流感毒株进行抗原性分析,并对其中19株待检病毒的HA基因进行序列测定及分析。结果抗原性分析结果显示检测的H3N2亚型流感病毒中仅仅35%(14/40)与疫苗株A/Kansas/14/2017抗原性类似。系统进化树显示,19株H3N2亚型流感病毒分离株血凝素基因在进化树上全部属于3C.2a分支,与处于3C.3a分支的疫苗株A/Kansas/14/2017亲缘关系较远;与疫苗株相比,所有待检毒株A抗原决定簇有3个位点,B抗原决定簇有2个位点发生改变;受体结合位点均发生T135K位和S137F位变异;19株分离株全部发生133位糖基化位点缺失。结论抗原性分析及HA基因序列分析结果显示,WHO推荐的2019—2020年疫苗株保护效果有可能不理想。应继续密切关注H3N2亚型流感病毒的流行与基因变异情况,为流感病毒疫苗株推荐及防控提供科学依据。

H3N2猪流感病毒诱导的小鼠急性肺损伤与SOD、NO、MDA和OH·变化的相关性

目的:探讨超氧化物歧化酶(SOD)活性以及一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)和羟自由基(OH·)含量的变化与H3N2猪流感病毒诱导的小鼠肺损伤的关系。方法:选用6-8周龄、SPF级BALB/c小鼠80只,随机分为H3N2病毒感染急性肺损伤组和模拟感染对照组,每组各40只。在感染后的第3、5、7、10和14d,每组处死小鼠6只,做如下处理:其中2只小鼠取肺组织进行HE染色,观察肺组织的病理学变化;剩余4只小鼠处死,收集血液分离血清;然后进行支气管肺泡灌洗,收集支气管肺泡灌洗液(BALF)。测BALF和血清内SOD活性以及NO、MDA和OH·含量。结果:病毒感染小鼠肺脏组织学变化表现为以严重的肺泡间质水肿、炎性细胞渗出、出血为特征的弥漫性肺泡损伤;与模拟感染对照组相比,感染组BALF与血清内的NO、MDA和OH·的含量均明显增加,差异显著;感染组SOD活性与对照组相比显著下降。BALF内SOD、NO、MDA和OH·的变化幅度明显大于血清的变化。结论:感染小鼠血清和BALF内NO、MDA和OH·显著升高,表明在H3N2猪流感病毒诱导的小鼠肺损伤过程中上述自由基可能发挥重要作用。

空心莲子草有效部位提取物抗甲型H3N2流感病毒作用

[目的]以空心莲子草有效部位提取物为研究对象,进一步验证其抗甲型H3N2流感病毒的生物活性,为其开发应用提供依据。[方法]以利巴韦林注射液作为空心莲子草有效部位提取物抗病毒实验的阳性对照药物,观察甲型H3N2流感病毒感染幼犬肾(MDCK)细胞后引起的细胞病变效应(CPE),通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活性,采用治疗指数(TI)作为药物抗病毒效果的评价指标,评价空心莲子草有效部位提取物抗甲型H3N2流感病毒的生物活性。[结果]空心莲子草有效部位提取物对流感病毒有明显抗病毒生物合成作用,其TI为(2.43±0.01),但其阻止流感病毒吸附与直接杀伤流感病毒的作用不明显。[结论]空心莲子草有效部位提取物有较强的抗流感病毒作用,其作用方式为抗病毒生物合成,且呈剂量依赖性。

1996～2005年中国H3N2亚型人流感病毒神经氨酸酶基因特性分析

测定了1996～2005年间在中国分离并保存的395株H3N2亚型人流感病毒神经氨酸酶（NA）基因序列，应用生物信息学工具进行了分析。结果表明：NA基因序列的进化树表现为一主要进化主干伴随多侧分支进化，同一年份的毒株可以分为几个分支存在；疫苗株在NA基因序列进化树上存在明显的滞后现象；NA没有氨基酸的丢失与插入；抗原决定簇大部分位点保守且各抗原决定簇之间的变异情况各有特点，其中197～199位、431～434位和339～347位点的变异频率最高，而153位、328～336位、367～370位、400～403位抗原决定簇的氨基酸变异频率相对比较小；除了抗原决定簇外还有些氨基酸位点的变异频率很高，它们分别是18、23、30、93、143、208、216、221、249、265、267、307、385、437位氨基酸，其中143位和267位这两个位点的变异频率高于抗原决定簇位点，具体生物学意义还需要进一步研究；NA蛋白的酶活性中心位点高度保守；二硫键和糖基化位点保守。NA基因的这些特点为流感的预防、控制以及NA抑制剂药物的应用提供了一定的参考依据。

岭南甲型H3N2流感病毒感染病例中医证候研究

目的:旨在探讨岭南地区甲型H3N2流感病毒感染病例中医证候分型,为中医诊治提供依据。方法:收集病源学诊断的甲型H3N2流感病毒感染病例患者的中医证候要素资料,并将所有中医四诊信息进行聚类分析,提炼出其基本证候,参照中医辨证分型标准赋予适当证型名称,分析其中医证候分布情况。结果:共纳入岭南地区221例甲型H3N2流感病毒感染的患者,经聚类分析,其中医证型分别是:外感风寒化热挟湿证42例,外感风热挟湿证92例,外感风热证87例。结论:岭南地区H3N2流感病毒感染病例多兼挟湿邪为患,与岭南多湿的特点一致。

深圳市2007年H3N2亚型流感病毒基因特性分析

目的了解深圳市2007年H3N2亚型流感病毒流行情况及血凝素基因特性。方法用狗肾传代细胞(MDCK)和鸡胚进行流感病毒分离。收获病毒后提取病毒RNA,进行逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR),扩增产物经琼脂糖凝胶电泳鉴定后送大连宝生物公司纯化及测序。测序结果用Simmonic软件和Mega3.1软件进行序列分析。结果H3N2亚型流感毒株为深圳市2007年流感流行的优势株,与2006年的深圳株比较未发生明显变异,但与2007年的疫苗株相比,有多个位点的氨基酸发生了替换,造成了其间的抗原性发生了一定的变化。结论深圳市2007年H3N2亚型流行株,并未形成一个新的变种。推测是由于与疫苗株之间的抗原性的变异导致了2007年深圳市H3N2亚型流感的流行。

H3N2亚型猪流感病毒血凝素基因的原核表达及间接ELISA诊断方法的建立

采用RT-PCR扩增H3N2亚型猪流感病毒HA1基因。将该片段插入到原核表达载体pET-30a(+)中,构建原核表达载体pET-HA1。阳性质粒转化宿主菌BL21,经IPTG诱导,HA1基因获得表达,其重组蛋白以包涵体的形式存在。通过改变IPTG的浓度和诱导时间,确定表达HA1基因的最佳诱导条件。Western blot分析表明表达产物具有良好的抗原活性。用纯化的表达产物作为包被抗原建立了检测H3亚型猪流感病毒抗体的间接ELISA方法,确定抗原最佳包被浓度为4μg/mL,血清最佳稀释度为1∶100,阳性标准初步判定为:待检血清OD值>0.4,而且待检血清OD值/阴性血清OD值>2。应用此方法对309份临床血清样品进行了检测,并与HI方法进行了比较,结果表明基于重组HA蛋白的间接ELISA方法可用于H3N2亚型猪流感病毒感染的初步诊断。

金翘片体内抗甲型H3N2流感病毒及禽流感病毒H9N2作用研究

【目的】探讨金翘片体内抗甲型H3N2流感病毒及禽流感病毒H9N2的作用。【方法】分别以甲型H3N2流感病毒与禽流感病毒H9N2感染小鼠为模型,以小鼠肺指数及肺指数抑制率为评价指标,考察金翘片抗甲型H3N2流感病毒及抗禽流感病毒H9N2的作用,并观察金翘片的解热、镇痛、抗炎作用。【结果】金翘片具有明显的抑制甲型H3N2流感病毒致肺病变作用(P <0.05或P <0.01),抑制率随剂量增大而增大,呈量效关系;同时也对禽流感病毒H9N2感染鼠肺病变表现出明显的抑制作用(P<0.01)。并具有显著的解热、镇痛、抗炎作用。【结论】金翘片在体内具有显著的抗甲型H3N2流感病毒、抗禽流感病毒H9N2及解热、镇痛、抗炎作用。

十五种中药体外抗H3N2亚型猪流感病毒效果的研究

为了观察15种中药抗H3N2亚型猪流感病毒的效果,试验通过先加中药再加病毒、先加病毒再加中药及中药和病毒混合后一起加这3种加药方式,采用鸡胚培养法和血凝(HA)试验研究了赤芍药等15种中药在体外抗猪流感病毒的效果;然后,将有显著效果的中药筛选出来,测定其治疗指数(TI)和半数有效量(ED50)。结果表明:在3种加药方式中,赤芍药和贯众抗猪流感病毒的效果最显著。

贵州省2010年H3N2亚型流感病毒HA1基因序列分析

目的了解2010年贵州省H3N2亚型流感病毒HA1基因变异特征。方法用MD-CK细胞分离流感病毒,采用血凝抑制试验分型鉴定,随机选取8株H3N2亚型流感毒株进行RNA提取,逆转录扩增获得HA1基因产物,将其进行基因产物测序,测定的序列用相关的生物信息软件进行分析。结果贵州省各代表株在同一分支。该分支与2008-2009年疫苗推荐株A/Brisbane/10/2007(H3N2)接近,与WHO 2010年疫苗推荐株A/Perth/16/2009(H3N2)相距较远。结论2010年根据WHO疫苗推荐株生产的疫苗对该年我市H3N2亚型流感预防效果不好,以至于H3亚型在我省成为优势株,引起广泛流行。

广西医科大学2007年新生H3N2亚型流感病毒抗体调查

目的:调查广西医科大学2007年新生H3N2亚型流感病毒抗体,了解健康青年人群血清中H3N2亚型流感病毒抗体的水平,从而预测广西H3N2流感病毒引起的流感流行的趋势。方法:抽取广西医科大学2007年新生血清168份,通过血凝抑制实验进行抗体检测。结果:以血凝抑制抗体滴度≥1:10为H3N2亚型流感病毒抗体阳性,H3N2亚型流感病毒抗体阳性率为26.19%,抗体滴度≥1:40的占阳性的22.73%。结论:H3N2亚型流感病毒引起的流感在广西有流行,但流行强度不高,抗体滴度水平对人群的保护能力较低。

四种消毒剂对H3N2猪流感病毒杀灭效果的研究

为了比较4种常用消毒剂对猪流感病毒的杀灭效果,试验采用鸡胚感染试验和Klein-De-fors悬浮灭活试验,研究了不同浓度复合酚、二氯异氰尿酸钠、过氧乙酸、苯扎溴铵与H3N2猪流感病毒作用5,10 min的杀灭率。结果表明:复合酚1∶2 000的稀释液、二氯异氰尿酸钠1∶800的稀释液、过氧乙酸1∶10 000的稀释液、苯扎溴铵1∶300的稀释液能将病毒100%杀灭。说明过氧乙酸的杀灭效果较显著,其他依次是复合酚、二氯异氰尿酸钠、苯扎溴铵。

不同治法体内抗甲3(H_3N_2)亚型流感病毒作用的实验研究

目的:探讨辛凉解表、辛温解表及祛湿解表等不同治法在体内抗甲3(H3N2)亚型流感病毒的作用。方法:三种治法的代表方分别选择银翘散、桂枝麻黄各半汤和新加香薷饮,设正常对照组、阳性药物(病毒唑)组和三种治法组,分别观察不同治法对甲3(H3N2)亚型流感病毒小鼠肺炎的影响,对小鼠感染甲3(H3N2)亚型流感病毒的死亡保护作用和延长生命作用。结果:以肺指数为评价指标,三种不同治法组与模型对照组相比(P<0.01),差异有统计学意义;三种不同治法组之间比较以及三种不同治法组和阳性药物组之间比较,差异无统计学意义。不同处理组间死亡率比较和不同处理组间存活时间的比较,差异无统计学意义。结论:三种不同治法对甲3(H3N2)亚型流感病毒小鼠肺炎均有抑制作用,但三种不同治法之间以及三种不同治法和阳性药物之间作用并无差异性。三种治法对小鼠感染甲3(H3N2)亚型流感病毒的死亡保护作用和延长生命作用均不明显。

流感病毒H3N2血凝素基因和神经氨酸酶基因在大肠杆菌中的表达

克隆、表达和鉴定流感病毒H3N2 HA,NA基因序列,为制备抗体和基因工程疫苗打下基础。在成功克隆流感病毒H3N2全长HA、NA基因并测序的基础上,将部分基因序列克隆到表达载体pET32a(+)上,全基因序列克隆到表达载体pGEX4T-1上,构建了重组表达质粒pET32a(+)/HA(截短),pET32a(+)/NA(截短),pGEX4T-1/HA,转化大肠杆菌BL21/Rosetta,IPTG诱导表达,利用Ni2+亲和层析柱和GSTrap 4B亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,并用Western blotting和ELISA方法检测其抗原性。结果显示,重组蛋白在大肠杆菌中可以高效表达,SDS-PAGE显示其相对分子质量与预计大小一致。ELISA和Western blotting试验证实,重组蛋白具有良好的抗原性。成功克隆和表达了流感病毒H3N2 HA、NA基因序列,可为流感病毒H3N2诊断试剂和疫苗的开发等进一步的研究提供参考。

2013—2014年南京市流感病毒H3N2亚型血凝素分子遗传特性分析

2013-2014年南京市流感病原监测系统分离到31株流感病毒H3N2亚型毒株,通过提取病毒RNA,反转录―聚合酶链反应（reverse transcriptase―polymerase chain reaction,RT―PCR）扩增血凝素（hemagglutinin,HA）基因片段,进行PCR产物纯化、测序并分析其遗传进化特征.结果显示,31株分离株与疫苗株A/Texas/50/2012之间的核苷酸和氨基酸进化距离分别为0.0102和0.0121,核苷酸和氨基酸的同源性分别为97.9%~99.6%和97.2%~99.3%.遗传进化分析表明,分离株的HA基因分属不同的进化分支,3株2013年分离株属3B基因型,3株2014年分离株属3C.1基因型,2株2014年分离株属3C.2b基因型,其余23株属3C.3a基因型.与疫苗株相比,分离株的分子特征表现为发生N128A/T和P198S/A（去信号肽排列）氨基酸位点变异,均位于抗原决定簇B;分离株抗原决定簇上发生变异的位点共计24个;7株分离株出现126 NWT糖基化位点,3株分离株糖基化位点45NSS和144NNS消失.结果提示,2013-2014年南京市流感病毒H3N2亚型的HA基因较疫苗株发生了较大变异,疫苗对病毒的预防效果需重新评估.

吉林省2018-2020年甲型H3N2亚型流感病毒耐药基因分析

目的掌握2018-2020年吉林省内H3N2亚型流感流行株对金刚烷胺类药物以及神经氨酸酶抑制剂类药物的耐药情况,为流感的临床治疗及预防控制提供参考依据。方法选取甲型H3N2亚型流感毒株34株,对M2和NA基因进行PCR扩增,测序后对耐药位点进行分析。结果2018-2020年吉林省分离到流感毒株981株,其中甲型流感病毒毒株934株,乙型流感毒株47株。在分离到的甲型流感病毒毒株中,57.49%为H1N1pdm亚型毒株,39.61%为H3N2亚型毒株。对34株H3N2亚型流感病毒测序结果显示M2基因S31N耐药位点上发生了突变;在NA耐药相关基因位点E119V、Q136K、D151A、I222V、H274Y、R292K、N294S均未发生突变。结论吉林省2018-2020年以甲型流感流行为主。34株甲型H3N2亚型流感病毒均对金刚烷胺类药物耐药,但仍对神经氨酸酶抑制剂敏感。