柴胡皂苷-d对大鼠肝癌细胞H4-ⅡE细胞内Ca^(2+)的影响研究

目的探讨柴胡皂苷-d(saikosaponin-D,SS-D)诱导大鼠肝癌细胞H4-ⅡE细胞内钙离子浓度([Ca2+]cyt)变化的影响研究。方法通过噻唑蓝(MTT)比色实验选择合适的药物浓度、荧光指示剂Fluo-3/AM检测[Ca2+]cyt及钙库中Ca2+的变化。结果 MTT比色结果显示,10、30、50、70、100μmol/L SS-D对细胞的存活率都在90%以上。第一大组中阴性对照组可引起细胞内钙离子浓度升高,其平均荧光强度(MFI)为35.76±1.37;阳性对照组可使其大幅度升高,其MFI值为74.74±1.26。不同浓度的SS-D也可使其不同程度升高,并且与SS-D呈浓度依赖性,其平均荧光强度(MFI)分别为59.95±1.02、73.89±1.35、80.30±0.04、93.30±0.83。阳性对照组及处理组的MFI值明显高于阴性对照组(P<0.05);处理组1、处理组3及处理组4 MFI值与阳性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);石胆酸(LCA)及SS-D、熊脱氧胆酸(UDCA)都能诱导细胞钙库中Ca2+释放。结论 SS-D能诱导细胞内Ca2+内流,增加[Ca2+]cyt,调控细胞内Ca2+的生理活动。

大鼠肝癌细胞系H4-Ⅱ E钙内流的检测方法

目的 利用大鼠肝癌细胞系Ｈ４－ⅡＥ建立一种适用于贴壁生长的细胞检测细胞内游离钙离子（［Ｃａ２＋ ］ｉ）浓度的方法。 原理 用荧光染料ｆｌｕｏ－３ 在细胞内能与游离Ｃａ２＋ 结合。在一定波长的光激发下，可发出荧光，根据荧光的强度来检测细胞内游离Ｃａ２＋ 浓度及钙内流的方法。 方法 以Ｈ４－ⅡＥ细胞系为材料，通过Ｃａ２＋ 回加技术、荧光显微镜技术和ＵＭＡＮＳ计算机软件或Ａｘｏｎ 计算机成像系统来记录图像和处理数据。 结果 可检测、定量细胞内游离Ｃａ２＋ 的浓度，并可用以研究细胞钙信号的传递和传导机制。 结论 该方法较为简便、易行，相对费用较低，适用于国内实验室。