川芎嗪对人小细胞肺癌H446细胞的增殖抑制作用

目的 观察中药川芎的提取物川芎嗪对人小细胞肺癌H4 4 6细胞的增殖抑制作用。方法 用MTT法、吖啶橙 /溴乙啶 (AO/EB)双荧光染色法、流式细胞术及扫描电镜观察川芎嗪对体外培养的人小细胞肺癌H4 4 6细胞存活率的影响、检测凋亡、分析其对细胞形态学及细胞周期的影响。结果 川芎嗪对小细胞肺癌H4 4 6细胞有增殖抑制作用 ,细胞形态学发生变化 ,如细胞体积缩小、细胞质空泡化、细胞核碎裂 ;川芎嗪可诱导H4 4 6细胞凋亡并使细胞生长停滞在S期 ,抑制细胞有丝分裂及DNA合成。结论川芎嗪对小细胞肺癌H4 4 6细胞具有增殖抑制作用 ,呈浓度相关性 ,川芎嗪可诱导H4 4 6细胞凋亡 ,其机制可能与其导致细胞S期阻滞有关。

槲皮素对人小细胞肺癌H446细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察槲皮素(Quercetin)对人小细胞肺癌H446细胞凋亡的影响,并初步探讨其可能的作用机制。方法:MTT法检测20、40、80、160、200μmol/L槲皮素对H446细胞增殖的抑制作用,共聚焦显微镜观察100、200μmol/L槲皮素处理48 h对H446细胞增殖的影响,流式细胞术检测槲皮素对H446细胞凋亡和细胞周期的影响,Western blotting检测槲皮素对H446细胞内P53、Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。结果:槲皮素对H446细胞的增殖抑制具有显著的剂量和时间依赖性(P<0.05),在12、24、48及72 h四个时间点,槲皮素作用于H446细胞的IC50值分别为(172.2±2.6)、(102.4±5.3)、(68.6±2.7)及(48.8±1.9)μmol/L。槲皮素处理后,随着H446细胞密度的降低,细胞核部分皱缩并裂解为凋亡小体,其对H446细胞的促凋亡作用呈现出显著的剂量依赖性,40μmol/L组H446细胞的凋亡率即显著高于对照组[(8.3±0.4)%vs(4.0±0.5)%;P<0.01],当药物浓度达到200μmol/L时凋亡率达到最高。槲皮素能将H446细胞周期特异性地阻滞于G2/M期。与对照组相比,200μmol/L槲皮素处理组P53[(4.98±0.91)vs(0.68±0.26),P<0.01]和Bax蛋白[(4.26±0.23)vs(0.89±0.29),P<0.01]表达显著升高,Bcl-2蛋白表达[(0.36±0.06)vs(8.23±1.65),P<0.01]显著下降。结论:槲皮素能够抑制H446细胞的增殖并促进其凋亡,其机制可能与调控Bax、p53和Bcl-2等细胞凋亡相关蛋白有关。

葛根粗提物、葛根素对肺癌H446细胞增殖的抑制作用及其机制

目的观察葛根粗提物(CP)和葛根素纯品(SP)对小细胞肺癌H446细胞增殖的影响,并探讨其机制。方法用含不同浓度的SP和CP培养H446细胞,用MTT法检测细胞生长抑制率。用流式细胞术检测细胞周期和凋亡率、细胞免疫化学技术检测Bcl-2和Bax蛋白。另设空白对照组和溶剂对照组。结果CP作用72h的半数抑制浓度(IC50)为435μg/ml,SP为1403μg/ml。此浓度作用72h,细胞凋亡率分别为14.71%和2.61%,两组相比P<0.05;G0/G1期细胞构成比分别为79.20%和72.20%,G2/M期细胞构成比分别为8.94%和10.50%,与对照组相比P均<0.05;CP作用于H446细胞后,细胞内Bcl-2蛋白表达量降低,Bax的蛋白表达量增加,与对照组相比P均<0.05。结论SP和CP对小细胞肺癌H446细胞具有增殖抑制作用,呈浓度相关性;SP和CP可诱导细胞凋亡且CP强于SP,其机制可能与阻滞细胞周期于G0/G1期、上调Bax表达、下调Bcl-2表达有关。

葛根素对人小细胞肺癌H446细胞周期和相关周期蛋白表达的影响

目的观察葛根素诱导人小细胞肺癌H446细胞周期的阻滞作用,进一步探讨其作用机制。方法采用MTT法测定葛根素对H446细胞生长的影响;采用流式细胞术检测处理后H446细胞周期分布和周期蛋白cyclinD1、CDK4和P27表达水平。结果MTT法表明葛根素对H446细胞生长有较强的抑制作用;流式细胞仪检测结果发现细胞周期阻滞在G0/G1期,量效关系良好,并检测到细胞周期蛋白cyclin D1、CDK4表达减弱,P27表达增强。结论葛根素可通过诱导细胞周期阻滞而发挥体外抗肺癌作用,其机制可能涉及细胞周期相关蛋白cyclin D1、CDK4和P27表达的调控。

刺五加多糖诱导人小细胞肺癌H446细胞凋亡

研究刺五加多糖(Acanthopanax senticosus polysaccharide,ASPS)诱导H446细胞凋亡及其可能的作用机制。采用MTT法检测ASPS对小细胞肺癌H446细胞增殖的抑制作用;Hoechst33258染色和流式细胞技术检测经ASPS处理后H446细胞凋亡的形态特征及凋亡率的变化;Western印迹方法检测凋亡相关基因bax、bcl-2、p53表达的变化。MTT分析表明,ASPS作用48h后可明显抑制H446细胞的增殖,半数抑制浓度(IC50值)为476.36μg/ml;Hoechst染色结果:H446细胞在ASPS诱导下出现典型的凋亡形态;流式细胞术检测结果显示:对照组及浓度为240、480、960μg/ml药物处理组凋亡率分别是(5.02±0.4)%、(11.12±1.8)%、(19.89±2.5)%、(22.54±1.8)%;Western印迹显示:在ASPS的诱导下bax、p53的表达量提高,而bcl-2的表达量下降。研究表明,ASPS对H446细胞增殖有抑制作用,并能促进其凋亡;ASPS通过上调bax、p53表达,下调bcl-2表达促进H446细胞凋亡。

刺五加多糖通过ERK信号转导途径诱导H446细胞G_2/M期阻滞

目的研究刺五加多糖(ASPS)对人小细胞肺癌H446细胞G2/M期阻滞的诱导作用及对ERK信号传导途径的影响。方法流式细胞技术(FCM)检测H446细胞周期;Western blot分析检测ASPS对ERK、p-ERK蛋白的影响。结果与对照组相比,各ASPS处理组G2/M期细胞所占的比例明显增高(P<0.01),G0/G1期细胞所占的比例没有差异;加入ERK抑制剂PD98059后,G2/M期和G0/G1期细胞所占的比例与对照组没有差异;p-ERK的量显著高于对照组(P<0.01),而对ERK蛋白表达没有明显影响。结论ASPS可能通过激活ERK信号转导途径诱导H446细胞发生G2/M期阻滞。

MDR相关新基因CA916798真核表达载体的构建及其对H446细胞增殖的影响

目的构建新基因CA916798真核表达载体,并观察其对H446增殖的影响。方法以人A549细胞总RNA为模板,用RT-PCR技术扩增获得CA916798开放阅读框序列,连接入pBluescriptⅡSK克隆载体上,将重组质粒转化入大肠杆菌DH5α内并提取质粒,酶切与DNA测序鉴定准确,再用双酶切方法将CA916798开放阅读框序列定向连接到真核表达载体pQE-Trisystem中,构成pQE-Tri-CA916798,将pQE-Tri-CA916798转化入大肠杆菌DH5α内并提取质粒,双酶切鉴定、DNA测序鉴定准确,脂质体转染人小细胞肺癌细胞系H446细胞,选取稳定转染不同质粒的H446细胞,采用MTT绘制细胞增殖曲线,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡率。结果扩增出CA916798开放阅读框序列,大小约为350bp,重组质粒的酶切鉴定结果与预期一致,测序结果完全正确。转染了pQE-Tri-CA916798的H446细胞顺铂作用后增殖速度加快,凋亡率下降。结论成功构建了pQE-Tri-CA916798真核表达质粒,并初步证实了其与顺铂诱导的肺癌多药耐药相关。

Notch3信号通路介导SAHA诱导的小细胞肺癌H446细胞凋亡

目的:观察辛二酰苯胺异羟肟酸(suberoylanilide hydroxamic acid,SAHA)对人小细胞肺癌H446细胞凋亡的影响,并探讨其分子机制。方法:选取人小细胞肺癌H446细胞作为研究对象,采用CCK-8法检测SAHA的细胞毒作用并测定IC50,采用流式细胞术检测细胞凋亡,转染N3ICD真核表达质粒构建高表达N3ICD的H446细胞系,采用RT-PCR法检测Notch3的mRNA水平,采用Western blot法检测Notch3、N3ICD、Puma和cleaved caspase-3的蛋白水平。结果:SAHA可显著降低H446细胞存活率且呈剂量依赖性(P<0.05),SAHA作用48 h的IC50为1.91μmol/L;SAHA可诱导H446细胞凋亡且具有剂量依赖性(P<0.05);H446细胞中Notch3基因表达呈阴性,SAHA可使H446细胞Notch3基因恢复表达并激活Notch3信号通路(P<0.05);沉默Notch3基因可抑制SAHA对H446细胞的促凋亡作用(P<0.05);N3ICD高表达使H446细胞中Puma和cleaved caspase-3蛋白水平升高(P<0.01)。结论:在体外SAHA可激活人小细胞肺癌H446细胞Notch3信号通路,上调Puma蛋白表达水平,诱导H446细胞凋亡。

葛根素对人小细胞肺癌H446细胞增殖与凋亡的影响及其作用机制研究

目的观察葛根素对人小细胞肺癌H446细胞增殖与凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法采用MTT比色法和流式细胞术检测葛根素对H446细胞增殖抑制和诱导凋亡的作用;免疫组化法检测葛根素对PCNA、Bax和Bcl-2蛋白表达的影响。结果40、80μg/ml浓度的葛根素体外作用24、48h,对H446细胞有促增殖作用,在160～640μg/ml浓度范围内,葛根素能够抑制H446细胞的生长,并呈现良好的剂量依赖和时间依赖关系。435μg/ml的葛根素可以诱导H446细胞凋亡。检测葛根素对PCNA、Bax和Bcl-2蛋白表达的影响显示葛根素能够下调PCNA和Bcl-2蛋白的表达,上调Bax蛋白的表达。结论在一定浓度范围内,葛根素可能通过下调PCNA和Bcl-2蛋白的表达,上调Bax蛋白的表达而诱导H446细胞凋亡。

Notch3诱导人小细胞肺癌H446细胞G_0/G_1期阻滞及其机制

目的探究Notch3对人小细胞肺癌H446细胞增殖和细胞周期的影响及其分子机制。方法将人Notch3真核表达质粒、人HES1真核表达质粒、人鼠双微基因2(MDM2)基因沉默表达质粒及其空质粒分别转染H446细胞,采用流式细胞术检测细胞周期,采用RT-PCR法检测Notch3和MDM2的mRNA水平,采用Western blotting方法检测Notch3、HES1、MDM2、Rb和P21蛋白表达水平。结果 Notch3可抑制H446细胞增殖并导致G_0/G_1期阻滞(P<0.05),上调HES1蛋白表达水平和下调MDM2蛋白表达水平(P<0.05);HES1高表达也能使MDM2蛋白表达水平下降(P<0.05),但对其mRNA水平无影响;沉默MDM2基因可抑制H446细胞增殖(P<0.05),并使H446细胞中Rb和P21蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论 Notch3可通过HES1抑制MDM2蛋白表达,进而上调Rb和P21蛋白表达水平,抑制H446细胞增殖并阻滞H446细胞于G_0/G_1期。

热化疗对H446细胞增殖的影响

目的:研究热化疗对人小细胞肺癌H446细胞增殖的影响及其可能机制。方法:H446细胞分为单纯化疗组(单纯使用120μg/L紫杉醇处理细胞)、热化联合组(采用43℃加热联合120μg/L紫杉醇处理细胞)、抑制剂组(采用43℃加热联合120μg/L紫杉醇及1μmol/LAkt特异抑制剂wortmannin处理细胞),以未处理的H446细胞作对照。应用MTT法检测各组细胞增殖率的变化,采用WesternBlot检测各组细胞磷酸化Akt水平。结果:对照组、单纯化疗组、热化联合组和抑制剂组细胞增殖率分别为(100.00±0.00)%、(69.16±2.95)%,(59.83±3.36)%和(40.65±0.14)%,磷酸化AKt水平分别为(1.52±0.01),(1.04±0.42),(0.69±0.03)和(0.00±0.00),4组细胞增殖率及磷酸化Akt水平相比,差异均有统计学意义(F=68.231和6.232,P均<0.05)。与对照组和单纯化疗组相比,热化联合组细胞增殖率及磷酸化Akt水平均降低(P<0.05),wortmannin可进一步抑制H446细胞的磷酸化,且降低细胞的增殖率(P<0.05)。结论:热化疗联合应用可抑制H446细胞增殖,其作用可能是通过抑制Akt信号转导通路实现的。

热疗与紫杉醇联合应用对H446细胞生长和MMP-2mRNA表达的影响

目的:探讨单纯热疗、单纯化疗以及热化疗联合应用对H446细胞生长及MMP-2mRNA表达的影响。方法:以不同温度(39℃、40℃、41℃、42℃、43℃和44℃)、不同剂量紫杉醇(30μg/L、60μg/L、120μg/L、240μg/L和480μg/L)及热化疗联合的方法处理H446细胞,同时设对照组(0μg/L紫杉醇,37℃),每组又分为3个热疗时间(30min、60min和90min),观察热疗、化疗和热化疗联合对H446细胞生长抑制率的影响;另取H446细胞,分为单纯热疗组(43℃,90min),单纯紫杉醇化疗组(60μg/L、120μg/L和240μg/L),43℃热疗90min联合紫杉醇组(60μg/L、120μg/L和240μg/L),对照组(0μg/L、37℃),采用RT-PCR检测各组细胞MMP-2mRNA的表达。结果与结论:单纯热疗与紫杉醇均可抑制H446细胞的生长,热疗不同程度地增强了紫杉醇对H446细胞的增殖抑制率,热化疗联合对H446细胞生长抑制的最优组合是43℃热疗90min联合120μg/L紫杉醇化疗,在此条件下,H446细胞MMP-2mRNA的表达明显降低,提示热化疗联合对H446细胞增殖的抑制作用可能是通过降低MMP-2mRNA的表达,从而抑制肿瘤细胞的侵袭和转移而实现。

葛根素和葛根粗提物对H446细胞生长及对PCNA基因表达的影响

目的:比较葛根素(standard of purepuerarin,SP)和葛根粗提物(pueraria crude extract,CP)对小细胞肺癌H446生长的影响.方法:运用MTT法、流式细胞术、细胞免疫化学方法观察SP和CP对H446细胞生长、凋亡、细胞周期分布以及对PCNA基因表达的影响.结果:CP组和SP组细胞凋亡率分别为14.71%和2.61%,差异具有统计学意义(P<0.05);G0/G1期细胞构成比分别为79.20%和72.20%,G2/M期细胞构成比分别为8.94%和10.50%,与对照组相比,差异均具有统计学意义(P<0.05);CP作用于H446细胞后,PCNA蛋白表达量减少,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05).结论:CP和SP均可抑制H446细胞增殖,且CP强于SP;SP和CP可诱导细胞凋亡,其机制可能与其导致细胞G0/G1期阻滞、PCNA表达下调有关.

NCI-H446细胞的^(125)Ⅰ-[Tyr^3]octreotide受体分析

目的 :探讨小细胞肺癌与 [Tyr3 ]octreotide (TOC)的亲和力。方法 :用氯胺T方法标记的12 5I-TOC作为配基 ,检测小细胞肺癌细胞株NCl-H4 4 6与其结合的受体位点数及亲和常数。结果 :氯胺T法标记的12 5I-TOC经SephadexG - 10纯化后放化纯大于 95 % ;受体分析显示NCI-H4 4 6表达的生长抑素受体多 (Bmax =1 17× 10 5受体位点 /细胞 ) ,与12 5I-TOC亲和力强 (Kd =0 5 8nM)。结论 :TOC的标记物可用于小细胞肺癌肿瘤的受体显像及放射治疗。

甲基汞对人类小细胞肺癌NCI-H446细胞周期的影响

目的研究氯化甲基汞(MMC)对小细胞肺癌NCI-H446细胞周期的影响。方法采用流式细胞仪检测了MMC对NCI-H446细胞细胞周期的作用,并与目前最常用的化疗药顺铂(DDP)和同样具有剧毒的三氧化二砷(As2O3)做比较。结果MMC、DDP能使NCI-H446细胞表现为G0/G1期细胞数剂量依赖性明显增加,S期细胞数呈剂量依赖性明显减少;As2O3组细胞表现为明显的G2/M期剂量依赖性增加,S期细胞数剂量依赖性减少。结论MMC、As2O3、DDP均能诱导小细胞肺癌细胞株的细胞周期阻滞,但阻滞作用发生在细胞周期的不同时相。

抑癌汤对人肺癌NCI-H446细胞增殖抑制作用的体外实验研究

目的通过自拟方抑制癌汤对人肺癌NCI-H446细胞株进行干扰研究,探讨其增殖抑制作用。希望从苗药中药组方中找到抑制肺癌细胞增殖的新方法。方法将NCI-H446细胞进行培养,绘制NCI-H446细胞生长曲线,取处在对数生长期的NCI-H446细胞进行实验。首先确定抑癌汤的作用浓度范围。取细胞的存活率为50%时的药物浓度范围作为抑癌汤的给药浓度参考。再将抑癌汤在该浓度范围内分为5个浓度组;实验分抑癌汤组、西药组、抑癌汤加西药组、空白组四组、每一组各4个复孔,进行对照研究。结果抑癌汤对NCI-H446细胞毒实验得到细胞存活率50%时的药物浓度范围在1～100μg/ml之间。抑癌汤加西药组优于抑癌汤组;抑癌汤加西药组优于西药组;西药组优于抑癌汤组;抑癌汤组优于空白组;抑癌汤加西药组优于空白组;西药组优于空白组。结论抑癌汤在体外对人肺小细胞肺癌NCI-H446细胞具有抑制作用,具有潜在药用价值,值得进一步深入研究。

山奈酚对人小细胞肺癌H446细胞凋亡的影响

研究山奈酚诱导人小细胞肺癌H446细胞凋亡的作用及可能的作用机制.采用MTT法检测山奈酚对小细胞肺癌H446细胞增殖的抑制作用;采用DAPI染色检测经山奈酚处理后细胞凋亡的形态变化;采用RT-PCR和Western-blot技术检测山奈酚处理前后H446细胞p53,bax,bcl-2 mRNA和蛋白的表达.结果显示,不同浓度的山奈酚能抑制人小细胞肺癌H446细胞生长,且随浓度增加抑制作用增强;H446细胞在山奈酚诱导下出现典型的凋亡形态;20μmol/L以上浓度的山奈酚处理后,p53,bax mRNA和相应蛋白表达均升高,而bcl-2 mRNA和蛋白表达降低.研究表明,山奈酚对H446细胞增殖有抑制作用,并能促进其凋亡.p53,bax和bcl-2在山奈酚诱导人小细胞肺癌H446细胞凋亡中起重要作用.

千金苇茎汤调控人肺小细胞癌H446细胞凋亡的分子机制研究

目的:研究千金苇茎汤对人肺小细胞癌H446增殖与凋亡的影响。方法:将千金苇茎汤通过化学分离法制得水提部位;分为不同药物浓度,与H446共同培养,流式细胞仪细胞周期检测以及荧光显微镜线检测凋亡结果;AgNOR染色观察以及免疫组织化学检测PCNA、caspase-3蛋白的变化。结果:不同浓度的千金苇茎汤水提部位与H446培养后,细胞凋亡率明显升高、AgNOR数目减少以及PCNA、caspase-3蛋白明显的改变(P<0.01),并有一定的浓度依赖性。结论:千金苇茎汤水提部位可以有效抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。

替莫唑胺对小细胞肺癌H446细胞的凋亡诱导作用

目的探讨替莫唑胺对小细胞肺癌(SCLC)细胞H446的凋亡诱导作用及具体分子生物学机制。方法通过MTT法检测替莫唑胺对H446细胞活力的影响;流式细胞术检测替莫唑胺对H446细胞周期的影响;Western blot分析磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/AKT通路的激活状况及其下游靶基因细胞周期蛋白B1(Cyclin B1),细胞分裂周期基因2(Cdc2),Bax,Bcl-2和生存素(Survivin)的表达。结果替莫唑胺(50,100,200μmol/L)可显著抑制细胞的活力,并且在48h抑制程度最高,并使细胞周期阻滞在G2/M期。Western blot结果显示替莫唑胺能抑制PI3K表达及Akt磷酸化,进而下调Cyclin B1,Cdc2,Bcl-2和Survivin的表达,上调Bax的表达。结论替莫唑胺可通过阻断PI3K/AKT信号通路来诱导SCLC细胞H446凋亡。

姜黄素对PC3和H446细胞中Id1mRNA表达的影响

目的观察姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌PC3和小细胞肺癌H446细胞Id1mRNA表达的影响。方法分别采用MTT法检测细胞生长活性;划痕实验检测细胞迁移能力;Hoechst染色检测细胞凋亡;实时荧光RT-PCR法检测PC3和H446中Id1mRNA的表达。结果姜黄素明显抑制PC3和H446细胞中Id1mRNA的表达,其相对定量随姜黄素浓度增大而减少;同时PC3和H446细胞的生长抑制率和凋亡率增加,细胞迁移距离减少。结论在PC3和H446细胞中,姜黄素可能通过抑制Id1基因表达发挥其抑制细胞生长、迁移和诱导细胞凋亡的作用。