贵州省正安县不同养殖模式下鸡H5、H7和H9亚型禽流感血清学调查

为了监测并评价贵州省正安县各养殖模式禽流感的免疫效果,采用血凝试验与血凝抑制试验检测血清中H5、H7、H9亚型禽流感病毒(AIV)的抗体情况,2020—2022年累计采集贵州省正安县鸡血样660份,为做好禽流感监测预警与防控工作奠定基础。结果表明,2020—2022年,鸡H5抗体阳性率分别为81.00%、79.20%、76.30%,H7抗体阳性率分别为74.00%、77.90%、82.00%,H9抗体阳性率分别为78.64%、70.00%、84.00%。禽流感H5、H7、H9免疫抗体合格率均达到国家标准。

H_5、H_9亚型禽流感病毒和新城疫病毒的多重RT-PCR检测

根据Genbank注册发表的H5、H9亚型禽流感病毒(AIV)的HA基因和新城疫病毒(NDV)的HA基因序列,设计多对引物,每种病毒各筛选出一对特异性好、灵敏度高的引物,其中FP1/FP2扩增H5亚型AIVHA基因片断长为545bp;P3/P4扩增H9亚型AIVHA基因片断长为321bp;P11/P22扩增NDVHA基因片断长为672bp。用RT-PCR方法,通过特异性试验、灵敏度试验,H5、H9亚型AIV和NDV引物的灵敏度分别达到了1:104、1:108、1:104稀释度,与传染性支气管炎(IB)、传染性法氏囊病(IBD)、传染性喉气管炎(ILTV)、传染性鼻炎(IC)、霉形体(MS)、H1N1猪流感等抗原无交叉反应。实验结果表明,本研究建立了检测H5、H9亚型AIV和NDV的多重RT-PCR方法,混合引物的最佳退火温度为50℃,鉴定检测仅需4小时。

肉鸡与蛋鸡H5、H7、H9亚型禽流感病毒抗体水平调查

为了解养殖场家禽中H5、H7、H9亚型禽流感病毒抗体水平,通过血清学调查,应用血凝抑制试验(HI)的方法,对四川内江、山东济南、河南鹤壁、江苏扬州4个定点实验观测站负责的养殖场的鸡血液样本进行禽流感病毒抗体分析,其中包含2个肉鸡场和3个蛋鸡场。研究发现蛋鸡场通常免疫了H5、H7、H9(或H5与H9)亚型禽流感疫苗,而肉鸡场只免疫了H9亚型禽流感疫苗;蛋鸡场和肉鸡场都存在免疫禽流感疫苗后抗体水平低和无抗体产生的情况,从而导致免疫不合格或免疫失败。以上结果表明,应加强家禽养殖场对不同亚型禽流感疫苗的免疫以及免疫后的禽流感病毒抗体水平监测,以防免疫失败,从而预防禽流感的发生和流行。

蛋鸡H5、H9亚型禽流感和新城疫免疫血清抗体与卵黄抗体检测比较分析

为分析蛋鸡免疫后卵黄抗体与血清抗体的相关性,试验采集经H5、H9亚型禽流感和新城疫疫苗免疫的黔东南小香鸡、乌蒙乌骨鸡、威宁鸡血清样本和卵黄样本,采用血凝抑制试验进行相关免疫抗体检测。结果:3个地方品种鸡的血清样本和卵黄样本中均可检测出H5、H9亚型禽流感和新城疫免疫抗体,且几何平均效价均大于24以上,达到免疫合格标准,不同地方品种鸡群间差异不显著(P>0.05);免疫后30d,卵黄样本免疫抗体几何平均效价低于血清样本,但差异不显著(P>0.05);免疫后60d,卵黄样本免疫抗体几何平均效价低于血清样本,差异显著(P<0.05)。结果表明:卵黄抗体与血清抗体呈正相关性,卵黄抗体几何平均效价均低于血清抗体。在临床上可用卵黄抗体替代血清抗体进行H5、H9亚型禽流感和新城疫疫苗免疫效果的评价,但应选择在免疫后30d以内。

种鸡禽流感(H5+H9)二价灭活疫苗免疫程序的研究

本研究设计不同的免疫程序,用禽流感(H5+H9)二价灭活疫苗(H5N1Re-1+H9N2Re-2株)免疫黄羽种鸡,通过对H5亚型和H9亚型禽流感HI抗体滴度监测,探讨H5亚型和H9亚型禽流感HI抗体消长规律及禽流感(H5+H9)二价灭活疫苗的免疫程序。结果表明,用禽流感二价灭活疫苗免疫黄羽种鸡后,H5亚型和H9亚型禽流感HI抗体的消长规律基本同步,其抗体滴度阶段性峰值出现在免疫后的第21～28天。根据试验结果,建议用禽流感二价灭活疫苗免疫黄羽种鸡的免疫程序设为:首免(14d),0.3mL/只;二免(56d),0.5mL/只;三免(119d或开产前4周),0.5mL/只。

2015—2021年云南省禽流感环境监测分析

目的了解2015—2021年云南省涉禽环境中禽流感病毒的污染状况。方法从云南省16个地区选择5类涉禽场所,并采集6种环境样本(笼具表面擦拭样本、案板表面擦拭样本、禽类粪便样本、清洗禽类的污水样本和禽类饮水样本),采用Real-time PCR法开展禽流感病毒A型核酸检测,核酸阳性样本进一步开展H5、H7和H9亚型检测。结果2015—2021年云南省共检测环境样本11033份,禽流感病毒A型核酸阳性样本2951份,阳性率为26.75%,以H9亚型为主(2164份)。城乡活禽市场和活禽批发市场的样本阳性率均较高,分别为36.08%和35.06%。6种环境样本中清洗禽类污水阳性率最高(45.50%),其次为案板表面样本(35.06%)。保山、文山和怒江为云南省禽流感病毒核酸阳性率前3位的地区。结论云南省涉禽环境中禽流感病毒污染较为严重。

2013-2017年河南省涉禽环境中禽流感病毒污染状况监测

目的监测河南省范围内涉禽环境中禽流感病毒污染状况。方法2013-2017年每月从全省7个监测点采集涉禽环境标本，采用荧光RT-PCR法检测禽流感病毒A型（FluA）核酸，FluA核酸阳性标本进一步检测H5、H7和H9亚型禽流感病毒核酸。结果2013-2017年从全省7个监测点共采集外环境标本2538份，禽流感病毒FluA核酸阳性标本202份，阳性率为7．96％：H5核酸阳性标本16份，阳性率为0．63％；H7核酸阳性标本8份，阳性率为0．32％；H9阳性标本161份，阳性率为6．34％。连续5年，FluA的检出率除在2015年有小幅波动外，整体趋势是大幅上升的，其中H7亚型禽流感病毒仅在2015年和2017年有检出。2月份是一年当中禽流感病毒检出率最高的月份，其次是1月份。不同环境类型中，城乡活禽市场FluA的检出率最高，为13．69％，其次是家禽屠宰加工厂（2．58％）和家禽规模养殖户（0．58％）。不同标本类型中，脱毛机拭子、案板表面拭子、粪便标本和禽类饮用水的FluA检出率依次为28．57％、13．76％、5．70％和5．26％。结论河南省涉禽环境中存在H5／H7／H9亚型禽流感病毒的污染。且污染状况越来越复杂。逐渐复杂的活禽进货销售渠道是禽流感病毒污染严重化的主要原因。封锁疫情发生地区的禽，避免其销往外地将是禽流感防控的有效措施。

不同日龄肉鸡和油乳剂疫苗的SPF鸡免疫禽流感抗体分析

矮脚黄肉鸡和SPF鸡按不同程序免疫禽流感H5、H9亚型油乳剂灭活疫苗,用HI方法测定H5和H9抗体,分析不同免疫程序下肉鸡和SFP鸡的抗体水平。结果表明,SPF鸡在1日龄时首免抗体产生较早,而矮脚黄肉鸡在5或10日龄时首免抗体产生更快;单次免疫、2次免疫和3次免疫在低剂量疫苗进行免疫时均可产生较高水平的抗体,且高水平抗体维持的时间较长。本实验为肉鸡生产中简化免疫程序、提高免疫效果提供了科学参考。