禽流感H5和H9亚型基因探针的制备

参照GeneBank数据库上H5N1和H9N2 AIV的HA基因序列,选取保守区域,设计了两对引物,分别用于扩增HA基因,产物纯化回收得到180bp和285bp cDNA片段,采用随机引物法Digxigenin-11-dUTP标记得到探针H5PR和H9PR,通过斑点杂交检测,结果表明探针的灵敏度高和特异性好,可以进行相关性试验。

H5亚型血凝素基因的插入对重组LaSota毒株在组织中病毒分布的影响

为了研究外源基因H5亚型血凝素基因插入到NDV后对重组LaSota毒株在组织中对NDV病毒分布的影响,用构建的rL-F(M)-FHA和rL-FHA与亲本毒株重组LaSota野毒株(rLaSota)经滴鼻、点眼免疫SPF雏鸡,分别在免疫后1 d、3 d、5 d、10 d、15 d和18 d后采集病料(气管、肝脏,肺脏、肾脏、大脑、脾脏、腺胃、十二指肠),利用免疫组化染色方法检测病毒在机体内的分布。H5亚型血凝素基因的插入对NDV病毒分布、病毒在组织中出现时间有很大影响,而F基因突变株的变化也是影响病毒分布、病毒在组织中出现时间的主要因素。