传染性支气管炎病毒疫苗株H52的全基因组克隆与分析

采用RT-PCR方法克隆测定传染性支气管炎病毒（Infections Bronchitis Virus，IBV）疫苗株H52全基因组序列，并与其它已知全基因组序列的我国分离株进行比较分析，以分析我国IBV地方分离株与疫苗株的分子遗传关系。结果表明，H52基因组全长为27630bp（不包括polyA），A＋T含量为61．8％，它与我国IBV分离株全基因组同源性在83．9％～95．2％之间，其中与KQ6的同源性最高（95．2％），与其余株均在88％以下。在基因组内基因的同源性中，以S1、S2与E变异最大，除KQ6外，其余各株（含台湾株）与H52在S1蛋白上的同源性只有72．4％～80．7％，在S2蛋白上的同源性为85．5％～88．1％，E蛋白为82．9％～93．3％。系统进化分析表明，国内分离株，除KQ6外，在进化分支中已独立于H52和其它Massachusetts型衍生毒株。H52与我国地方分离株存在较大的分子遗传差异，这些差异可能导致单纯Massachusetts型疫苗（如H120，H52）不能有效地免疫保护我国的鸡群。

鸡传染性支气管炎病毒H52毒株S基因的克隆及序列分析

将含有鸡传染性支气管炎病毒 (IBV) H5 2毒株的尿囊液浓缩 ,用 TRIzol试剂抽提病毒 RNA作为反转录 -聚合酶链反应 (RT- PCR)的模板 ,参照已发表的 IBV- Beaudette株 S基因序列 ,设计并合成一对特异性引物 ,扩增得到长度约 3.6 kb的 S基因片段 ,利用引物设计中 Eco R I和 Bam H I酶切位点插入到克隆载体 p Blue Script SK的多克隆位点中 ,转化感受态 E.coli DH5 α。经酶切分析和 PCR等方法鉴定 ,筛选出阳性克隆 ,进行核苷酸序列测定 ,证实获得了 S基因的全长序列。利用 DNAstar等分析软件与 Gen Bank中其它 IBV毒株的核苷酸及其推导的氨基酸进行序列同源性比较分析 ,结果表明 ,H5 2毒株与已报道的核苷酸的同源性在 83.4 5 %～ 99.71%之间 ,氨基酸的同源性在 82 .10 %～ 99.2 6 %之间。

喘咳停抗鸡传染性支气管炎病毒H_(52)株和M_(41)株感染的疗效试验

本研究主要通过喘咳停抗传染性支气管炎病毒H52株（IBVH52）鸡胚感染抑制试验和传染性支气管炎病毒M41株（IBVM41）雏鸡感染治疗试验来了解其对病毒引起的鸡呼吸道感染的疗效。试验I分为A1（IBVH52）、A2（IBVH52+中药煎剂）、A3（中药煎剂）和A4（空白）4组,鸡胚接种后120小时,A2组（30％）鸡胚死亡率比A1组（80％）低50％,A3组、A4组全部存活;活胚平均重A2组（6克）明显大于A1组（3.3克）,与A3组（7.9克）和A4组（7.8克）接近。试验Ⅱ分B1（喘咳停）、B2（对照药）和B3（空白）3组,IBVM41株感染鸡治疗3天后,B1组鸡只痊愈,10天后剖检病变不明显;B2组鸡只呼吸道症状减轻,但个别鸡只有继发感染,剖检见呼吸道内有少量粘液,肺脏纹理清晰;B3组鸡死亡3只,呼吸道症状明显,剖检见呼吸道内有大量粘液,肺脏纹理极为明显。以上试验结果表明,喘咳停具有明显的抗呼吸道病毒IBVH52株和M41株感染的作用。

鸡传染性支气管炎耐热活疫苗的研究

应用鸡传染性支气管炎病毒(H52株)与不同耐热保护剂配方和冻干曲线进行筛选。结果表明:采用冻干曲线2和耐热保护剂WXS冻干鸡传染性支气管炎病毒H52弱毒疫苗效果最佳。试制耐热活疫苗3批,其各项检验均符合要求。耐老化试验表明:经过37℃放置10d的每羽份病毒含量下降0.6～0.8个滴度,每羽份病毒含量达104.7～105.1EID50。保存期试验表明:2～8℃保存24个月疫苗每羽份病毒含量下降0.4～0.6个滴度,每羽份病毒达104.1～104.3EID50。疫苗2～8℃保存24个月后效检抗体水平达到1∶16～1∶32。免疫持续期试验表明:免疫21日龄SPF鸡,6个月后血清中和抗体效价达到1∶32～1∶64。田间试验表明临床观察无不良反应,安全有效。特异性试验表明耐热活疫苗抗原性不变。耐热保护剂生物学和理化特性表明保护剂安全、稳定,室温保存期达3个月。