SOX2-OT/SOX2轴通过Gli1介导的上皮间质转化调控肺鳞癌H520细胞的迁移

目的 探讨SOX2-OT在肺鳞癌细胞H520迁移能力调控中的作用并阐明其机制。方法 选用肺癌细胞株中SOX2-OT高表达的肺鳞癌细胞H520,敲低其SOX2-OT转录水平,通过细胞划痕实验和穿膜实验对细胞迁移能力进行检测,qRT-PCR和免疫印迹方法检测上皮间质转化(EMT)相关因子的表达。通过过表达Gli1进一步分析SOX2-OT的作用机制;用miR-200c抑制剂或类似物转染细胞,分析SOX2-OT对Gli的正向调控机制。结果 敲低SOX2-OT抑制了H520细胞的侵袭和迁移能力,同时伴随着细胞EMT表型的变化。SOX2-OT能够正向调控转录因子Gli1,Gli1过表达可逆转SOX2-OT敲低对细胞迁移能力的抑制作用。miR-200c抑制剂可有效逆转SOX2-OT敲低导致的SOX2下调。结论 SOX2-OT/SOX2轴通过Gli1介导的EMT过程来调控肺鳞癌细胞H520的迁移和侵袭能力。

重组GSTP1真核表达质粒的构建及稳定转染NCI-H520细胞系的建立

目的构建pcD N A3.1(+)/G STP1真核表达载体并将其稳定转染到肺鳞癌细胞N C I-H 520中,建立稳定转染的N C I-H 520细胞系,为后续研究奠定基础。方法以pD N R-LIB-G STP1为模板,用PC R扩增G STP1 cD N A的编码区,并将扩增的cD N A片段与载体连接后亚克隆到真核表达载体pcD N A3.1(+)中。重组子经酶切分析及测序鉴定后,用脂质体转染技术将其导入到人肺鳞癌细胞系N C I-H 520,经G 418筛选并建立稳定的转染细胞株,应用W estern blotting检测转染前后该细胞株G STP1基因在蛋白水平的表达。结果 pcD N A3.1(+)/G STP1经酶切鉴定及D N A测序证实序列完全正确,真核表达载体构建成功;经W estern blotting检测,重组质粒转染株中G STP1基因的蛋白表达水平明显高于对照组,证实G STP1基因已稳定转染到N C I-H 520细胞中并得到表达。结论成功构建了pcD N A3.1(+)/G STP1真核表达质粒,建立了稳定表达G STP1的N C I-H 520细胞系,为进一步研究G STP1的生物学功能奠定了基础。

芹菜素对人肺鳞癌细胞NCI-H520增殖、转移、凋亡及自噬的影响

目的研究芹菜素对人肺鳞癌细胞NCI-H520增殖、转移、凋亡及自噬的影响。方法体外培养人肺鳞癌细胞NCI-H520,采用CCK-8法检测不同浓度芹菜素(2.5、5、10、20μmol/L)或顺铂(2.5、5、10、20μmol/L)对细胞活力的影响;采用细胞增殖示踪荧光探针(CFDA SE)检测芹菜素或顺铂对细胞分裂能力的影响;采用划痕实验和Transwell实验检测芹菜素对细胞迁移和侵袭能力的影响;采用Annexin V/PI双染法、Hoechst 33258核染色法检测芹菜素对细胞凋亡的影响;透射电镜观察细胞内自噬嚢泡的产生情况;吖啶橙(AO)染色观察细胞内酸性细胞器的变化;Western blot检测微管相关蛋白1轻链3B-Ⅱ(LC3B-Ⅱ)和p62蛋白表达情况。结果与对照组相比,CCK-8法和CFDA SE结果显示芹菜素或顺铂使NCI-H520细胞的增殖水平下降(P<0.05);划痕实验和Transwell实验表明芹菜素使细胞的迁移和侵袭水平下降(P<0.01);Annexin V/PI双染结果显示芹菜素可使细胞凋亡率增加(P<0.05);Hoechst 33258核染色显示芹菜素可促进细胞出现细胞核聚缩和浓染;AO染色荧光值增大、电镜下细胞出现自噬双分子结构、Western blot中LC3B-Ⅱ和p62蛋白表达水平上升的结果表明芹菜素增加了细胞NCI-H520的自噬水平(P<0.05);加入氯喹(CQ)后,未能增加芹菜素作用细胞中LC3B-Ⅱ和p62的蛋白水平。结论不同浓度芹菜素能抑制人肺鳞癌细胞NCI-H520增殖、迁移、侵袭,其抑制细胞的生长转移可能与诱导细胞凋亡和自噬有关,且自噬水平的升高可能是阻断自噬体的降解所致。

照射时间延长对肺鳞癌细胞株H520放射生物效应的影响

目的观察常规剂量分割照射模式下单次照射时间延长对肺癌细胞系H520放射生物效应的影响。方法（1）肺鳞癌细胞株H520离体培养，分组进行照射，利用克隆形成实验计算细胞存活比率（SS）；（2）细胞给予总剂量为2Gy、4Gy、6Gy、8Gy的照射，并按照每日单次照射时间的不同分为A组（照射2分钟组）、B1组（照射10分钟组）、B2组（照射30分钟组）。观察延长照射时问对肺鳞癌细胞株H520存活比率的影响。结果伴随单次照射总时间的延长，实验细胞的存活比率逐渐提高，接受照射总剂量为8Gy的H520细胞株，A组细胞存活比率为1．9％；B1组和B2组存活比率分别为2．35％和3．42％。A组与B2组之间的差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论常规剂量分割模式下延长单次照射时间，显著降低了放射治疗对I-1520细胞的生物效应。

EGCG和顺铂合用抑制人肺腺癌NCI-H1975细胞和人肺鳞状上皮癌NCI-H520细胞增殖及对EGFR表达的影响

目的研究EGCG和顺铂合用对人肺腺癌NCI-H1975和鳞癌NCI-H520细胞增殖及EGFR的影响。方法 CCK-8法检测细胞增殖;Hoechst33258染色检测细胞凋亡;Western blot检测Phospho-EGFR和EGFR表达;q-PCR检测细胞EGFR mRNA。结果 EGCG和顺铂合用明显抑制细胞增殖,呈时间和剂量依赖性。EGCG增加DNA-顺铂加合物;促进细胞核固缩;同时下调Phospho-EGFR和EGFR mRNA表达。结论 EGCG和顺铂合用抑制NCI-H1975和NCI-H520细胞增殖,促进凋亡,该作用可能通过增加细胞DNA-顺铂加合物和破坏DNA实现,且与抑制EGFR mRNA和Phospho-EGFR有关。

FTY720联合吉西他滨对人非小细胞肺癌细胞株A549及H520的影响

目的探讨FTY720联合吉西他滨对人非小细胞肺癌(NSCLC)细胞株A549及H520增殖和凋亡的影响。方法采用不同浓度的FTY720(0、2、4、6、8、10μmol/L)分别对体外培养的人NSCLC细胞株A549及H520进行处理,分别于培养后第24、48、72h检测吸光度值,观察不同浓度的FTY720对A549及H520细胞株的增殖抑制作用;分别对A549及H520细胞株加以FTY720(7μmol/L)联合吉西他滨(0.2μmol/L)和FTY720(5μmol/L)联合吉西他滨(0.1μmol/L)进行处理,观察两组细胞培养48h后的抑制作用及凋亡作用差异。结果不同浓度的FTY270对体外培养的人NSCLC细胞株A549、H520的抑制作用不同(P<0.05),同一种浓度FTY720体外培养的人NSCLC细胞株A549、H520不同培养时间的抑制率不同(P<0.05),FTY720对体外培养的人NSCLC细胞株A549、H520的增殖抑制作用具有浓度、时间依赖关系。FTY720联合吉西他滨对A549、H520细胞的抑制作用明显强于两种药品的单独应用(P<0.05)。FTY720联合吉西他滨对A549、H520细胞的凋亡率用明显高于两种药品的单独应用(P<0.05)。结论 FTY720联合吉西他滨对人NSCLC细胞株A549及H520的增殖具有显著的抑制和促进细胞凋亡的作用,强于两者单独应用的效果。

左卡尼汀对多西他赛在NCI-H520细胞中抗肿瘤作用影响的研究

目的:探究左卡尼汀对多西他赛抑制肺癌细胞NCI-H520增殖的影响,并初步探索其机制。方法:实验将NCI-H520细胞分为阴性对照组,左卡尼汀组,多西他赛组以及联合用药组。四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期,蛋白质免疫印迹法检测目标蛋白P21,P53,BAX和BCL-2的表达情况。结果:与不同单药组(左卡尼汀组和多西他赛组)相比,联合用药组对细胞增殖的抑制作用均增强,细胞增殖率分别由(95.5±3.97)%和(65.73±2.22)%下降到(54.4±1.67)%,P<0.01,镜下细胞密度下降。联合用药使G1/G0期细胞分别由(67.21±6.0)%和(11.52±0.89)%下降到(3.98±0.42)%,P<0.05。G2/M期细胞分别由(11.84±5.05)%和(54.91±2.38)%上升到(64.56±0.9)%,P<0.05。周期相关蛋白P21,P53的表达量增加,且差异均具有统计学意义。所有实验组之间的细胞凋亡率和凋亡相关蛋白BAX,BCL-2的表达量没有明显差异。结论:24 h时,联合用药组中,左卡尼汀可能通过上调P21,P53的蛋白表达来增强细胞的G2/M期阻滞,进而增强多西他赛对NCI-H520细胞增殖的抑制作用。

5′-氮杂-2′-脱氧胞苷对人肺鳞状细胞癌细胞株NCI-H226和NCI-H520中CNRIP1基因甲基化及蛋白表达的影响

目的探讨5′-氮杂-2′-脱氧胞苷对人肺鳞状细胞癌细胞株NCI-H226和NCI-H520中大麻素受体相互作用蛋白-1(CNRIP1)基因甲基化和蛋白表达的影响。方法取对数生长期NCI-H226和NCI-H520细胞株分为实验组和对照组,对照组细胞使用不含5′-氮杂-2′-脱氧胞苷的培养基继续培养;将实验组细胞分为0.5、1.0、1.5μmol·L^-1组,分别使用含不同浓度(0.5、1.0、1.5μmol·L^-1)5′-氮杂-2′-脱氧胞苷的培养基继续培养。取各组培养72 h后的细胞进行DNA提取及蛋白提取,采用甲基化特异性聚合酶链反应法检测各组细胞中CNRIP1基因的甲基化状态,采用Western blot检测各组细胞中CNRIP1蛋白表达。结果对照组和0.5μmol·L^-1组NCI-H226、NCI-H520细胞株均显示为甲基化,1.0、1.5μmol·L^-1组中2种细胞株均显示为非甲基化。0.5、1.0、1.5μmol·L^-1组2种细胞株中CNRIP1蛋白表达量均高于对照组(P<0.05);0.5、1.0、1.5μmol·L^-1组2种细胞株中CNRIP1蛋白表达量随浓度的增加而升高,两两比较差异均有统计学意(P<0.05)。结论人肺鳞状细胞癌细胞株NCI-H226和NCI-H520中CNRIP1基因发生甲基化可能是导致基因表达下调甚至失活的主要原因,5′-氮杂-2′-脱氧胞苷可以逆转CNRIP1基因甲基化状态,促进CNRIPI蛋白表达。

抑制Pokemon蛋白表达对人肺癌细胞株NCI-H520的作用

目的利用RNA干扰（RNAi）技术将针对性构建的重组质粒转染人人肺癌细胞株NCI-H520，观察下调Pokemon基因对人肺癌细胞生物学行为的影响。方法利用Ambion公司设计软件设计针对Pokemon基因的2条小干扰RNA（siRNA）序列，并合成2对互补的siRNA编码DNA片段，定向克隆至RNAi-ReadypSIREN-RetroQ载体的BamHI和EcoRI位点，构建重组体质粒，分别命名为pSIREN-Pokemon-1和pSIREN-Pokemon-2，同时设立转染空载体对照组。Westernblot检测人肺癌细胞中Pokemon蛋白表达，噻唑蓝（M1vr）比色实验检测转染后细胞的增殖抑制结果，流式细胞分析技术检测转染后细胞周期的分布。结果利用RNAi-Ready pSIRENR RetroQ载体构建的重组质粒可以成功抑制人肺癌细胞NCI-H520中Pokemon蛋白的表达。Westernblot检测发现人肺癌细胞NCI-H520中Pokemon蛋白高水平表达，转染后其表达水平明显下降。转染后第3天，M1Tr比色实验显示pSIREN-Pokemon-1组（0．0015±0．0030）和pSIREN-Pokemon-2组（0．0086±0．0015）与pSIREN-Pokemon.0组（0．0230±0．0010）比较差异有统计学意义（P〈0．05），而pSIREN-Pokemon-1与pSIREN-Pokemon-2组之间差异无统计学意义（P〉0．05）。流式细胞分析检测发现转染siRNA细胞与转染空载体细胞的细胞周期差异无统计学意义（P〉0．05）。pSIREN-Pokemon-1转染组及pSIREN-Pokemon-2转染组形成克隆的数量（18．0±0．3、16．0±0．4）明显低于pSIREN-Pokemon-O组（52．0±0．4，P〈0．05）。结论使用pSIREN载体成功构建的重组质粒转染人肺癌细胞可有效抑制原癌基因Pokemon的表达。转染后细胞增殖受到抑制，生长速度减慢。抑制Pokemon蛋白表达对细胞周期无明显影响。靶向siRNA可以存人肺癌细胞中抑制Pokemon蛋白表达，负调节肺癌细胞生长。

ERCC1对H520细胞Mdr1及SP细胞的影响分析

目的:分析ERCC1对H520细胞中Mdr1及SP细胞比例的影响。方法:利用RNA干扰技术构建ERCC1-shRNA重组质粒表达载体,转染并筛选出阳性稳定转染的H520细胞;采用RT-PCR和WesternBlot的方法检测ERCC1对H520细胞多药耐药1(Mdr1)的影响;采用流式细胞仪检测ERCC1对H520细胞SP细胞比例的影响。结果:RT-PCR检测出Mdr1 mRNA在含有ERCC1-shRNA的H520细胞和含有空载体的细胞中和内参的A比值分别为0.423±0.147和0.468±0.02(n=5),两者有显著性差异;Western-Blot检测出Mdr1蛋白浓度在含有ERCC1-shRNA的H520细胞较含有空载体的细胞中明显降低。含有ERCC1-shRNA的H520细胞SP细胞比例达到0.8%,而含有空载体的H520细胞的SP细胞比例则达到2.2%。结论:RNA干扰技术可以构建重组质粒,稳定转染的H520细胞能被筛选出,当ERCC1基因被抑制时,Mdr1基因也会收到抑制,同时使H520细胞SP细胞比例明显降低。

EGCG对人肺癌细胞NCI-H1975和NCI-H520细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系增殖凋亡、周期的作用机制。方法对数生长期NSCLC细胞系NCI-H1975和NCI-H520,分为空白对照组(0 mol/L EGCG)和不同剂量(20、40、80、160、320mol/L)EGCG组,分别处理作用24、48、72h,CCK-8法检测细胞凋亡率;细胞流式细胞术检测细胞凋亡和周期;Western blot检测细胞周期、凋亡相关蛋白表达及NF-kB/Bcl2和EGFR/ERK/AKT信号通路变化;细胞分为:Control siRNA组、EGFR siRNA组和EGFR siRNA+EGCG组,采用siRNA转染技术,分析下调EGFR对NF-kB/Bcl2和EGFR/ERK/AKT信号通路的影响。结果分组的相应浓度EGCG组NCI-H1975和NCI-H520细胞的增殖显著降低(P<0.05),同时G1/G0细胞比例增高,G1/S期细胞比例下降(P<0.05),CyclinD1、CyclinE、CDK6蛋白表达降低(P<0.05),但对CDK4无明显影响(P>0.05),同时细胞凋亡增多,Cleaved caspase 3和Cleaved caspase 9蛋白表达上调(P<0.05)。P-P65、Bcl2、P-EGFR、P-AKT蛋白表达下调,Bax蛋白表达上调,但对P-ERK没有明显的影响。而EGCG+EGFR siRNA组,相比于EGFR siRNA组,明显降低各蛋白的表达,升高Bax蛋白(P<0.05)。结论 EGCG下调NF-kB/Bcl2和EGFR/ERK/AKT信号通路抑制NCI-H1975和NCI-H520细胞增殖、促进凋亡,并阻断细胞周期。

FTY720与吉西他滨对非小细胞肺癌A549和H520细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨FTY720、吉西他滨以及两种联合应用对非小细胞肺癌(NSCLC)肿瘤细胞株A549和H520增殖和凋亡的影响。方法培养NSCLC肿瘤细胞株A549和H520,采集对数生长周期的A549、H520,接种于培养板中,分别向培养孔加入不同浓度的FTY720以及两种药物的联合,培养48h后计算细胞存活率,应用双染流式细胞检测技术检测细胞凋亡情况。结果 FTY720不同浓度下培养24h、48h、72h,A549细胞、H520细胞的存活率均呈浓度依赖性,药物浓度越高,细胞存活率越低。联合用药的细胞存活率明显低于单独用药(P<0.05),细胞凋亡率明显高于单独用药(P<0.05)。结论 FTY720与吉西他滨联合应用有效提高吉西他滨对NSCLC肿瘤细胞株A549、H520的敏感性,抑制肿瘤细胞增殖,促进肿瘤细胞凋亡。

S100A6对肺鳞癌细胞株H520生物学行为的影响研究

目的 分析S100A6对肺鳞癌细胞株H520生物学行为的影响。方法 本实验时间为2021年11月至2022年11月。取对数生长期的H520,将其随机分为H520组、H520+空载体组、H520+S100A6组,其中H520组不进行干预,H520+空载体组转染空载体质粒,H520+S100A6组转染过表达S100A6的载体质粒。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测各组细胞增殖率,采用细胞划痕试验检测各组细胞迁移距离,采用Transwell实验检测各组细胞侵袭数,采用流式细胞术检测各组细胞周期。结果 H520+S100A6组48、72 h时细胞增殖率高于H520组、H520+空载体组(P<0.05)。H520+S100A6组细胞迁移距离长于H520组、H520+空载体组(P<0.05)。H520+S100A6组细胞侵袭数多于H520组、H520+空载体组(P<0.05)。H520+S100A6组G1期细胞占比高于H520组、H520+空载体组,G2期细胞占比低于H520组、H520+空载体组(P<0.05)。结论 S100A6可促进肺鳞癌细胞株H520增殖、迁移、侵袭,促使细胞进入分裂周期。

防盗有新招 方正佳和H520笔记本电脑

在9000元这一价位提供14．1英寸宽屏的笔记本屈指可数，这类产品基本上都采用Celeron M处理器，或者省略无线网卡，通过降低其它配置来压缩成本。方正近期推出的佳和H520则保留了．正统的Sonoma血统，拥有主流的系统配置。性价比不错，虽然256MB的内存偏低，但用户可自行对内存进行升级。

瑞香狼毒水提取物对人肺鳞状细胞癌Survivin表达的影响

目的研究瑞香狼毒水提取物对人肺鳞状细胞癌NCI-H520细胞株的抑制作用及对Survivin表达的影响。方法用不同浓度的瑞香狼毒水提取物处理NCI-H520细胞,分别用MTT法检测肺癌细胞抑制率、半定量RT-PCR检测Sur-vivin mRNA水平以及用Western-blotting检测蛋白水平的表达。结果瑞香狼毒水提取物可显著抑制NCI-H520细胞的生长,随着药物浓度的升高抑制作用逐渐增强。瑞香狼毒作用4 h后细胞内Survivin蛋白的表达水平降低,而SurvivinmRNA的表达变化不明显。结论①瑞香狼毒水提取物可抑制NCI-H520细胞的生长,并具有浓度和时间依赖性;②瑞香狼毒水提取物可降低NCI-H520细胞的Survivin蛋白表达水平,而对mRNA水平无明显影响。

血清miR-503、miR-520h对妊娠期糖尿病患者并发子痫前期的诊断价值

目的探讨血清微小核糖核酸-503(miR-503)和微小核糖核酸-520h(miR-520h)对妊娠期糖尿病(GDM)患者并发子痫前期(PE)的诊断价值。方法选取2019年12月至2021年12月于唐山中心医院产科定期产检并建档的GDM患者102例作为研究对象,根据疾病类型分为GDM+PE组(53例)、GDM组(49例)。另选取同期于唐山中心医院进行定期产检并分娩的57例健康孕妇作为正常妊娠组。比较3组糖脂代谢相关指标[甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、游离脂肪酸(FFA)、空腹胰岛素(FINS)、空腹血糖(FBG)、餐后2 h血糖(2 h PG)]水平及血清miR-503、miR-520h表达水平、血清胱抑素C(CysC)、同型半胱氨酸(Hcy)水平;比较3组不良妊娠结局。采用多因素Logistic回归分析GDM患者并发PE的危险因素;绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-503、miR-520h单独及2项指标联合检测对GDM并发PE的诊断价值。结果3组孕周、年龄、孕前体质量指数、LDL-C水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。GDM+PE组TC、TG、FFA水平均明显高于GDM组和正常妊娠组,HDL-C水平明显低于GDM组和正常妊娠组,差异均有统计学意义(P<0.05)。GDM组TC、FFA水平均明显高于正常妊娠组,差异均有统计学意义(P<0.05)。GDM+PE组和GDM组FINS、FBG、2 h PG、HbA1c水平均明显高于正常妊娠组,差异均有统计学意义(P<0.05)。GDM+PE组血清miR-503、miR-520h表达水平、CysC和Hcy水平均明显高于GDM组和正常妊娠组,差异均有统计学意义(P<0.05),GDM组血清miR-503、miR-520h表达水平及CysC和Hcy水平均明显高于正常妊娠组,差异均有统计学意义(P<0.05)。GDM+PE组不良妊娠结局总发生率为62.26%(33/53),GDM组为40.82%(20/49),正常妊娠组为10.53%(6/57),GDM+PE组不良妊娠结局总发生率明显高于GDM组和正常妊娠组,差异均有统计学意义(χ^(2)=4.692、32.125,P<0.05),GDM组不良妊娠结局总发生率明显高于正常妊娠组,差异有统计学意义(χ^(2)=13.059,P<0.05)。3组孕妇不良妊娠结局中产后出血、早产或过期产、胎盘早剥、新生儿窒息、宫内生长受限的发生率比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,CysC水平升高、Hcy水平升高、miR-503表达水平升高和miR-520h表达水平升高均为GDM并发PE的危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清miR-503、miR-520h单独及2项指标联合检测诊断GDM并发PE的曲线下面积(AUC)分别为0.755、0.847、0.935,2项指标联合检测的AUC大于miR-503、miR-520h单独检测(Z_(2项联合-miR-503)=4.210、Z_(2项联合-miR-520h)=2.708,P<0.001、0.007)。结论GDM并发PE患者血清miR-503、miR-520h表达水平升高,与妊娠不良结局呈正相关,二者联合检测对诊断GDM并发PE具有重要意义。

Keap1/Nrf2信号通路对人肺鳞癌细胞生长、转移和耐药的影响

目的探讨Keap1/Nrf2信号通路对人肺鳞癌细胞株H520生长、转移和耐药的影响。方法使用慢病毒转染体系建立稳定高表达Keap1的H520细胞株模型(H520-Keap1),同时以Keap1失活的细胞株(H520-GFP)为阴性对照组;采用Western印迹法检测各组细胞中Keap1、Nrf2蛋白表达,RT-PCR检测Keap和Nrf2下游靶基因mRNA表达;通过SRB比色法、细胞划痕实验、Transwell侵袭实验、体外细胞药敏实验分别检测各组细胞生长、转移和耐药情况。结果 H520-Keap1细胞中Keap1蛋白表达量明显高于H520-GFP细胞,Nrf2蛋白表达量明显低于H520-GFP细胞(P<0.01)。H520-Keap1细胞中Keap1 mRNA表达量明显高于H520-GFP细胞,H520-Keap1细胞中Nrf2下游靶基因Akr1c1、Nqo1、Gclc、Gclm mRNA相对表达量明显高于H520-GFP细胞(P<0.01)。SRB比色法检测显示,第1~3天,H520-GFP与H520-Keap1细胞增殖率差异无统计学意义(P>0.05);第4天起H520-Keap1细胞增殖率明显低于H520-GFP(P<0.05)。H520-GFP细胞迁移率明显高于H520-Keap1细胞(P<0.01);H520-GFP细胞的侵袭数明显高于H520-Keap1细胞(P<0.01)。H520-Keap1细胞对卡铂、吉西他滨的敏感性增加。结论 Keap1过表达可影响人肺鳞癌H520细胞中Nrf2及其下游靶基因表达,抑制癌细胞生长和转移,提升对卡铂和吉西他滨的敏感性。

lncRNA LOC440173在非小细胞肺癌组织中的表达及其对癌细胞恶性生物学行为的影响

目的:检测lncRNA LOC440173在NSCLC组织和细胞中的表达及探讨其对癌细胞恶性生物学行为的影响。方法:选取河北医科大学第四医院生物标本库中2014至2017年手术切除的72例NSCLC患者的癌及癌旁组织标本,应用qPCR法检测NSCLC组织和癌旁组织中,以及6种NSCLC细胞株(H520、H358、A549、HCC827、H1703和H1299)中LOC440173的表达水平;构建LOC440173的敲低及过表达载体,分别转染H520和H1703细胞,应用MTS、克隆形成及Transwell小室迁移和侵袭实验分别检测敲低及过表达LOC440173对NSCLC细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响,qPCR法检测LOC440173对于EMT过程相关标志物(E-cadherin、N-cadherin及vimentin)mRNA表达水平的影响,WB法检测其对E-cadherin、N-cadherin蛋白表达的影响。结果:LOC440173在NSCLC组织中的表达明显高于癌旁组织(P<0.01),并与淋巴结转移、组织学分化程度、TNM分期和肿瘤大小有关联(P<0.05或P<0.01)。敲低LOC440173可以抑制H520细胞的体外增殖、迁移和侵袭(P<0.05或P<0.01),过表达LOC440173可显著促进H1703细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.05或P<0.01)。在转录水平上,敲低LOC440173后,E-cadherin的表达水平升高,间充质相关标志物N-cadherin、vimentin的表达水平降低(P<0.05或P<0.01);而过表达LOC440173后,E-cadherin的表达水平降低,间充质相关标志物N-cadherin、vimentin的表达水平升高(P<0.05或P<0.01)。在转录后水平上,LOC440173负向调节E-cadherin蛋白的表达、正向调节N-cadherin的蛋白表达(均P<0.05)。结论:LOC440173在NSCLC组织中的异常高表达可能与NSCLC的发生发展有关,LOC440173可显著提高NCSCL细胞的体外增殖、迁移、侵袭能力,且其作用机制可能与调控EMT相关基因表达有关。

BSN-AS2竞争性结合miR-219a-5p影响NSCLC细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡

目的:探讨BSN-AS2竞争性结合miR-219a-5p调控非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的机制。方法:qRT-PCR检测BSN-AS2和miR-219a-5p在NSCLC组织和细胞系中的表达;原位杂交FISH检测BSN-AS2和miR-219a-5p的信号强度;双荧光素酶报告基因检验miR-219a-5p靶向调控BSN-AS2;Transwell、CCK8和Tunel细胞凋亡分别检测BSN-AS2-miR-219a-5p轴对侵袭、迁移、增殖和凋亡的影响;构建NSCLC裸鼠皮下移植瘤模型进行验证BSN-AS2-miR-219a-5p轴的调控作用。结果:BSN-AS2在NSCLC组织和细胞系中高表达,miR-219a-5p为低表达,BSN-AS2竞争性结合miR-219a-5p;siBSN-AS2组抑制NCI-H520细胞侵袭、迁移和增殖,且促进细胞凋亡,而In-miR-219a-5p组促进NCI-H520细胞侵袭、迁移和增殖,抑制细胞凋亡,siBSN-AS2+In-miR-219a-5p组相比siBSN-AS2组促进了NCI-H520细胞侵袭、迁移和增殖,抑制细胞凋亡;BSN-AS2增加体内肿瘤细胞增殖和肿瘤生长,miR-219a-5p则能抑制。结论:BSN-AS2竞争性结合miR-219a-5p促进NSCLC细胞侵袭、迁移和增殖,且抑制凋亡,而干扰BSN-AS2-miR-219a-5p轴可能作为抗NSCLC的新靶点。