2024年美国奶牛H5N1亚型高致病性禽流感疫情分析

2024年3月以来,美国报告了多例奶牛H5N1亚型高致病性禽流感病例,引发全球广泛关注。本文对本次疫情进行了系统梳理,分析了疫情流行情况和分布规律,提出了风险防范建议。现有数据表明,引发奶牛感染的H5N1亚型高致病性禽流感病毒属于2.3.4.4b分支,与美国同期在家禽和野禽中流行的毒株高度同源。初步分析表明,感染奶牛的病毒可能来源于野生候鸟。疫情发生后,美国采取了限制移动、调运检测等综合防控措施。本次疫情可能对美国奶牛产业造成一定程度的负面影响,但从目前来看对我国影响较小。建议持续进行国外疫情监视,国内加强野禽风险监测,强化家禽强制免疫,积极宣传引导,做好应急储备等,降低本次疫情对我国的影响。

H5N1亚型高致病性禽流感病毒A/goose/Guangdong/1/96株反向基因操作系统的建立

A/goose/Guangdong/1/96(GSGD/1/96)是中国分离的第1株H5N1亚型禽流感病毒,它不仅是97香港感染并致人死亡的H5N1亚型流感病毒HA基因供体株,而且是中国目前已报到的H5亚型流感病毒分离株的共同祖先。本研究建立了该病毒的8质粒反向基因操作系统,并通过细胞转染成功拯救了该病毒(R-GSGD/1/96)。R-GSGD/1/96在对SPF鸡和Balb/c小鼠的致病性方面保持了与亲本野毒(W-GSGD/1/96)一致的生物学特性,即对鸡都是高致病性毒株,R-GSGD/1/96与W-GSGD/1/96的静脉致病指数分别为2.01和2.10;救获病毒与野生病毒一样,尽管106EID50经鼻腔感染小鼠后1～2d内能从肺脏检测到低滴度的病毒,但不能在小鼠体内成功复制。GSGD/1/96反向基因操作系统的成功建立为进一步开展中国高致病性禽流感病毒分离株的生物学特性、遗传衍化及结构与其功能关系研究奠定了基础。

2012年宁夏H5N1亚型高致病性禽流感疫情回顾性调查

[目的 ]2012年4月,宁夏当地报告蛋鸡发生疑似H5N1亚型高致病性禽流感(HPAI)疫情。为解本次疫情的流行病学特征、分析导致疫情发生的风险因素,在疫情发生后我们与当地兽医有关部门联合开展了回顾性暴发调查。[方法 ]以发生疫情的固原市头营镇所有的87个蛋鸡养殖场作为研究对象,采用问卷调查和抽样检测相结合的方式。对发病场采集病鸡的病料样品采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)或病毒分离来检测H5N1亚型禽流感病毒。采用多元回顾分析对疫情发生的风险因素进行研究,通过半方差图分析来证实发病场的聚集性分布。[结果 ]调查表明:H5N1疫情在头营镇分布广泛,其中有45户养殖场H5N1病毒RT-PCR呈阳性,其中4个养殖场病毒分离呈阳性。多变量模型分析表明:对废弃物不进行无害化处理(调整后的比值比OR为2.7,95%置信区间=1.20-8.30)和在疫情发生前一个月内有外来人员来访(调整后的比值比=5.5,95%置信区间=1.97-15.64)等两个因素可能与本次高致病性禽流感疫情有关。[结论 ]因此,频繁的人员流动和没有对废弃物进行无害化处理可增加感染发生的风险。为预防H5N1亚型HPAI感染的发生,应加强生物安全管理措施,包括限制外来人员来访和强化废弃物无害化处理等。

从近期发表的论文分析我国H5N1亚型高致病性禽流感流行态势

自2006年以来，有关我国H5N1亚型高致病性禽流感研究报道较少。但是最近一段时间，一些科研单位陆续报道这种病毒在我国的流行情况和基因特征。我们先对相关论文逐一介绍，然后综合其中信息，分析我国H5N1亚型高致病性禽流感流行态势。

鸽子传播H5N1亚型高致病性禽流感病毒的风险较低

最近日本国立动物卫生研究所的科学家采用鸽子进行了clade2.2和clade2.3.2H5N1亚型高致病性禽流感病毒（HPAIV）感染试验,以了解鸽子在HPAIV传播中的作用。试验1,20只鼻内接种高或低剂量病毒的试验鸽14d内没有出现临床症状。接种后第2～4天,2只鸽的3份口腔拭子呈阳性,但病毒滴度非常低。

H5N1亚型高致病性禽流感病毒研究获得重大进展

2012年1月12日，国际著名病毒学杂志《Joumal of Virology》在线刊登了上海巴斯德研究所周保罗研究组的最新研究成果‘A Human Antibody Recognizing a Conserved Epitope of H5 Hemagglutinin Broadly Neutralizes Highly Pathogenic Avian Influenza H5N1 Viruses”，

内蒙古发生一起H5N1亚型高致病性禽流感疫情

7月28日，内蒙古自治区通辽市科尔沁区兽医部门在监测中发现一养殖场饲养的蛋鸡出现疑似禽流感症状，发病35000只，死亡15000只。7月29日，自治区动物疫病预防控制中心诊断为疑似禽流感疫情。8月1日，经国家禽流感参考实验室确诊，该起疫情为H5N1亚型高致病性禽流感疫情。疫情发生后，当地按照有关预案和防治技术规范要求，坚持依法防控、科学防控，切实做好疫情处置工作，已扑杀和无害化处理66500只家禽。目前，该起疫情已得到有效控制。

2013—2020年中国家禽H5亚型高致病性禽流感监测数据分析

为评价我国家禽H5亚型高致病性禽流感(HPAI)的免疫效果和分布,整理分析2013—2020年《兽医公报》公布的家禽H5亚型HPAI监测数据。结果显示:时间上,2013-2020年家禽H5亚型HPAI血清免疫合格率呈上升趋势,ARIMA模型预测2021年家禽血清免疫合格率将上升至94.89%(95CI,94.06%~95.73%)。家禽H5亚型HPAI病原阳性率在2014年和2019年出现2个高峰,12月和3月的病原阳性率最高。空间上,病原学监测阳性疫区主要分布在中国南方。种间上,血清免疫合格率鸡最高,鸭其次,鹅最低;病原阳性率鸭最高,鹅次之,鸡最低(P<0.05)。研究结果提示,我国家禽免疫效果逐年增强,但要及时更新与流行毒株匹配的疫苗,完善水禽的免疫接种,重点加强我国南方地区冬春交替季节禽流感的监测工作和防控措施。

鸽H9N2亚型禽流感病毒的分离鉴定及致病性试验

H9N2亚型禽流感病毒属于A型流感病毒,目前H9N2亚型禽流感病毒不仅可以感染家禽,而且可以感染猪、猫等哺乳动物,甚至出现人类感染现象。因此,H9N2亚型流感病毒不仅影响畜禽的健康养殖,同时也具有一定的公共卫生学意义。近年来鸽群感染流感病毒时有报道,这其中包括H5N1、H7N9以及H9N2亚型禽流感病毒。虽然H9N2亚型禽流感毒株的致病性相对于H5和H7亚型较低,但是该亚型病毒在我国家禽中存在较为普遍,且目前从鸽子已分离到重组的H9N2毒株,该毒株不仅引起鸽子感染而且具有优先与人类呼吸道表面受体结合的能力,因此加强流感病毒在鸽群中流行情况具有重要的现实意义。

HA和NA匹配度对H5亚型高致病性禽流感假病毒影响的研究

为研究不同H5亚型高致病性禽流感病毒(H5 HPAIV)的HA和NA匹配度对流感假病毒组装和功能的影响,本研究将5株H5 HPAIV的HA和NA基因节段分别克隆于pCMV/R载体,构建3个HA和5个NA重组质粒,两两随机组合后将HA、NA质粒与pCMV/RΔ8.9质粒、p HR-CMV-Luc质粒构成4质粒系统,利用磷酸钙法将4个质粒转染HEK293T细胞,检测各细胞培养上清液血凝效价,结果显示:有3个上清液无血凝效价,其余12个上清液的血凝效价在100 HAU/m L~400 HAU/m L,表明获得12株具有血凝效价的流感假病毒。超速离心后获得浓缩假病毒,通过western blot检测假病毒HA蛋白的表达,结果显示各假病毒均在75 ku、50 ku和25 ku有特异性条带。利用各假病毒分别感染MDCK.1细胞60 h后裂解细胞,采用荧光素酶试验检测假病毒的相对荧光素酶活性(RLA),结果显示各假病毒RLA在5.0×10~1~4.5×10~5不等。上述结果首次表明不同H5 HPAIV的HA和NA相互匹配会对假病毒的血凝效价和相对荧光酶活性(RLA)造成影响。本研究为后续流感病毒灭活疫苗制备及抗病毒药物的研发奠定基础。

高致病性H5N1亚型人禽流感病毒性肺炎的影像学表现特点

目的探讨高致病性H5N1亚型人禽流感病毒性肺炎的影像学检查方法及胸部X线与CT影像表现特点。方法回顾性分析2006年6月深圳接诊的首例由卫生部确诊,并经过抢救治疗痊愈的高致病性H5N1亚型人禽流感病毒性肺炎患者的相关临床及影像学资料。结果胸部影像学特点是:①磨玻璃样影、大小片状影及肺实变影是人禽流感病毒性肺炎较早出现的影像表现;②病灶侵犯肺组织广泛,表现为多叶多段的两肺广泛受累;③病灶蔓延变化迅速;④肺实质、肺间质及胸膜受累可同时存在;⑤病灶吸收慢、迁延时间长,恢复期有肺纤维化的影像表现。结论影像学检查与诊断仍然是人禽流感病毒性肺炎的临床诊断、鉴别诊断、疗效评价及预后分析的重要手段。动态观察人禽流感病毒性肺炎的影像学变化及影像学表现特点,监测ARDS和肺部继发感染等并发症的发生,利于指导临床及时有效地进行治疗。

高致病性禽流感病毒H5N1亚型核蛋白NP真核表达载体的构建、表达与鉴定

目的构建高致病性禽流感病毒H5N1亚型核蛋白(NP)的真核表达载体,并在哺乳动物细胞中表达、鉴定其编码重组蛋白NP。方法采用RT-PCR法扩增NP基因,T-A克隆到pMD18-T载体中构建pMD18-T-NP质粒。经PCR、双酶切鉴定后,双酶切阳性质粒与pXJ40-HA载体,电泳后胶回收,连接目的片段,构建pXJ40-HA-NP质粒,经PCR、双酶切、测序分析鉴定为阳性的质粒即为NP蛋白的真核表达载体。转染293T细胞后,采用免疫印迹法(Western blot)鉴定重组NP蛋白的表达。结果成功构建了高致病性禽流感病毒H5N1亚型NP基因的真核表达载体,并在293T细胞中成功表达出分子量为56kD的重组蛋白。结论成功构建的NP蛋白真核表达载体为进一步研究其功能,研发高致病性禽流感病毒H5N1亚型的诊断、治疗方法和疫苗奠定了基础。

中国H5N1亚型高致病性禽流感空间、时间和遗传动态变化分析

H5N1亚型高致病禽流感病毒的空间传播、持续变异和长期存在已经给家禽养殖业带来了巨大的经济损失，极大的威胁着公众健康。北京师范大学研究团队综合运用系统发生学分析、地理空间技术和时间序列模型等方法对中国H5N1禽流感暴发的时空模式和疫苗对病毒进化的影响进行了研究。结果表明，

一株野鸟源H5N8高致病性禽流感病毒的遗传演化分析及生物学特性研究

2021年本实验室从发病野鸟组织样品中分离到一株H5N8亚型禽流感病毒(AIV),命名为A/black-headed gull/Tibet/1-2/2021(H5N8),简称为BH Gull/TB/1-2/2021(H5N8)。为进一步了解该病毒的生物学特性,本研究对其基因组测序并经遗传演化分析,结果显示,该病毒HA蛋白的裂解位点为PLREKRRKR↓GLF,符合高致病性AIV(HPAIV)的分子特征。在遗传进化上HA基因属于2.3.4.4b分支,外部基因与部分内部基因(PB1、PA、NP、NS)均与2020年~2021年分离到的H5N8亚型AIV相应基因的同源性最高,且处于同一分支;PB2基因与一株H9N2亚型AIV PB2基因同源性最高,为99.25%;M基因与近两年流行的2.3.4.4b分支H5N1亚型AIV同源性最高,且处于同一分支,推测该病毒为一株重组病毒。抗原性分析结果显示,该病毒与2.3.4.4分支H5-Re8、2.3.4.4b分支H5-Re14疫苗株抗原性相近。不同哺乳动物细胞系生长曲线结果显示,该病毒可在哺乳动物细胞系中有效复制,但其在A549中的复制效率高于其在MDCK及293T细胞中的复制效率。BALB/c小鼠感染实验结果显示,该病毒不经提前适应即可在小鼠的多脏器中有效复制,对小鼠的半数致死量(MLD50)为0.98log10EID50,对小鼠呈高致病性。本研究结果对H5亚型HPAI的综合防控和公共安全预警具有借鉴意义。

H5N1亚型高致病性禽流感全球传播的时空格局及系统发生学分析

自1997年在广东首次发现H5N1亚型高致病性禽流感以米，其已经在欧亚大陆、非洲肆虐多年，威胁性已被列为WHO的六期流行病疫情警成系统的第二期，但是其全球扩散模式日前尚存在争论。本研究基于全球2003年11月至2006年12月的H5N1暴发时间及地点信息，使用地理信息系统方法探索其全球传播规律，发现其传播过程中存在空间聚集与时间聚集特征，结果表明H5N1亚型高敛病性禽流感的伞球传播存住两种不同的模式：野鸟迁徙与家禽贸易。

H5N2亚型禽流感病毒分离鉴定与鸡致病性研究

禽流感是由A型禽流感病毒引起的,多种家禽及野生禽类发病的一种高度接触性传染病,又称为“真性鸡瘟”或“亚洲鸡瘟”,其表现形式是多种多样的,有的只能通过检出抗体和分离病毒才能确诊感染疾病。在本研究中,从患有禽流感病史的鸡中,分离出了一株H5N2亚型禽流感病毒,导致鸡胚半数感染量以及致死量居高不下,因此研究H5N2亚型禽流感病毒的分离和鉴定,以及其对鸡的致病性,这对于我国禽类养殖中能有效防控禽流感具有重大的意义。

2.3.2.1分支H5N1亚型禽流感病毒的遗传演化和生物学特性研究

H5N1亚型禽流感病毒(AIV)引发的高致病性禽流感造成了全世界范围内家禽生产的巨大经济损失。其中,2.3.2.1分支H5亚型AIV已经在多个国家和地区的野鸟及家禽中被分离到,是重要的病毒进化分支之一。流行病学调查结果显示通过野鸟携带的该分支病毒在我国传播,我国内地家禽中也存在2.3.2.1分支的病毒。所以开展该分支病毒的进化监测研究,对我国H5亚型AI的综合防控具有重要意义。