H5N1高致病性禽流感病毒HA基因在昆虫细胞中的表达及免疫原性

用昆虫杆状病毒表达系统表达了高致病性禽流感H5N1 HA蛋白,经SDS-PAGE和Western blot检测,HA蛋白表达分子量约为70 ku;将HA蛋白制成油乳液,免疫BALB/c小鼠,免疫3次后,收集血清,以血凝抑制试验(HI)和血清IgG抗体酶联免疫吸附试验(ELISA)评估体液免疫,酶联免疫斑点试验(ELISPOT)评估细胞免疫。试验结果表明:重组HA蛋白组和全病毒灭活疫苗组免疫小鼠后,血清中和抗体效价及ELISA IgG效价均显著高于PBS组,重组HA蛋白组和全病毒灭活疫苗组之间差异不显著。ELISPOT试验数据显示,重组HA蛋白组和全病毒灭活疫苗组小鼠脾单个核细胞分泌IFN-γ和IL-4细胞数量显著高于PBS组,而重组HA蛋白组和全病毒灭活疫苗组之间差异不显著。用昆虫杆状病毒表达系统表达H5N1 HA蛋白制成油乳液能诱导体液免疫和细胞免疫,能为预防高致病性禽流感H5N1候选疫苗的筛选提供依据。

两株H5N1高致病性禽流感病毒对小鼠的致病力研究

为比较2株H5N1亚型高致病性禽流感病毒(HPAIV)对哺乳动物的致病力,本研究选取了A/Anhui/2/05(AH/2/05)和A/Sichuan/81/05(SC/81/05)两株病毒,采用低剂量(10 EID50)感染小鼠模型,并就两株病毒对小鼠的致病力差异进行检测。结果表明AH/2/05感染后小鼠出现体重下降和神经症状,并可致死部分小鼠;SC/81/05感染小鼠后,小鼠无任何明显的症状,体重、食欲、精神状态均不受影响。AH/2/05感染后病毒可在小鼠的全身复制,病毒在小鼠体内的存活时间可以长达14 d。SC/81/05感染后病毒仅在小鼠的肺脏中复制,并且仅能够在感染后的3 d和5 d分离到病毒。病理学检测显示,AH/2/05感染后病毒存在于小鼠的各脏器细胞并且引起小鼠脏器组织的严重病理变化,而SC/81/05感染后并未对小鼠组织脏器造成明显的病理变化。本研究结果揭示了人源和禽源H5N1禽流感病毒低剂量感染对小鼠的致病差异,同时为进一步研究H5N1亚型HPAIV在哺乳动物中的感染和致病能力提供了相关的实验依据。

山鸡H5N1高致病性禽流感免疫效价评估试验

长期以来,山鸡H5N1高致病性禽流感的免疫一直引用了家禽的免疫程序,也未能开展系统的免疫抗体消长规律的研究,给山鸡规模化养殖带来了较大的隐患。为此,于近期组织开展了一次针对种山鸡全周期(一个世代、56周)H5N1高致病性禽流感免疫抗体的跟踪检测和免疫效价评估试验,并分析提出了山鸡专用的H5N1高致病性禽流感推荐免疫程序。

湖南省一起H5N1高致病性禽流感疫情的初步调查及应急处置

2020年1月,湖南省发生一起鸡H5N1亚型高致病性禽流感疫情。疫情发生后,当地政府及时开展了区划、封锁、扑杀、消毒和紧急免疫等处置工作。同时,为掌握疫情发生情况,分析疫情发生原因,通过现场调查、实验室检测等方式,邵阳市动物疾病预防控制中心联合相关部门对该起疫情进行了流行病学调查。由于采取的应急处置措施及时得当,疫情得到有效控制,未发生扩散。调查分析认为:养殖户将未售完的100多羽鸡从家禽交易市场运回养殖场饲养,可能是导致疫情暴发的主要原因;也不排除因该场生物安全条件较差,通过其他途径传入的可能。建议进一步加强家禽市场管理,做好防疫物资储备;加强宣传培训,提高基层人员的技术水平,增强养殖户的生物安全意识,有效防范疫情发生。

H5N1高致病性禽流感病毒可在家禽羽毛中持续存在

日本国家动物卫生研究所的研究人员在近期《应用与环境微生物学》杂志上撰文指出，H5N1高致病禽流感病毒有可能长期存在于被感染家禽脱落的羽毛中。

各国对H5N1高致病性禽流感所采取的对策

当一个国家决定采用疫苗免疫的方法来防控H5N1高致病性禽流感的时候，就意味着绝大多数的国家会对该国出口的家禽制品设限。因此，欧洲和亚洲的国家在决定是否使用疫苗之前．都不得不先认真考虑这一政策会对其出口贸易产生的影响。

今年秋冬季节全球有可能再现大规模H5N1高致病性禽流感疫情

联合国粮农组织（FAO）官员前不久警告说，今年秋冬季节全球有可能再度出现大规模H5N1高致病性禽流感疫情，并称禽流感病毒在中国和越南出现变异。9月初，就禽流感防控有关问题，国家首席兽医师于康震接受了采访。

新疆和田县发生一起H5N1高致病性禽流感疫情

记者6月7日从农业部新闻办公室获悉．6月4日．新疆动物防疫监督总站在疫情监测过程中发现．和田县布扎克乡塔尔什力克农场一养殖户饲养的家禽出现不明原因死亡．经采集病料送国家禽流感参考实验室检测．6月7日确诊为H5N1亚型禽流感。

2024年美国奶牛H5N1亚型高致病性禽流感疫情分析

2024年3月以来,美国报告了多例奶牛H5N1亚型高致病性禽流感病例,引发全球广泛关注。本文对本次疫情进行了系统梳理,分析了疫情流行情况和分布规律,提出了风险防范建议。现有数据表明,引发奶牛感染的H5N1亚型高致病性禽流感病毒属于2.3.4.4b分支,与美国同期在家禽和野禽中流行的毒株高度同源。初步分析表明,感染奶牛的病毒可能来源于野生候鸟。疫情发生后,美国采取了限制移动、调运检测等综合防控措施。本次疫情可能对美国奶牛产业造成一定程度的负面影响,但从目前来看对我国影响较小。建议持续进行国外疫情监视,国内加强野禽风险监测,强化家禽强制免疫,积极宣传引导,做好应急储备等,降低本次疫情对我国的影响。

2020-2022年我国H5亚型高致病性禽流感的流行特点分析

2020年以来,H5亚型高致病性禽流感(包括H5N1、H5N6、H5N8亚型)疫情在我国持续发生,威胁着禽类养殖业的健康发展和人类公共卫生安全。本文总结了2020年1月~2022年7月我国H5亚型高致病性禽流感在禽类中的流行情况,分析了其流行特点,并提出了其防控措施,以期为禽流感的科学防控提供理论参考。

2020—2022年全球H5亚型高致病性禽流感疫情简况及分析

为了解近年全球H5亚型高致病性禽流感(HPAI)疫情具体情况,本文通过对农业农村部畜牧兽医局发布的“一周国际动物疫情动态”和“疫情发布”中的HPAI疫情信息进行统计和分析,对2020—2022年全球H5亚型HPAI疫情的发生和流行情况,空间、时间和群间分布,以及给养禽业造成的危害进行较为全面的了解。结果显示,2020年全球H5亚型HPAI疫情以H5N8亚型为主;自2021年5月份,呈现H5N1亚型疫情逐渐增多、H5N8亚型疫情逐渐减少的趋势,至11月份,形成以H5N1亚型疫情为主、H5N8亚型疫情零星发生的局面。H5N1亚型HPAI疫情逐渐演变为全球大流行,在欧洲形成“重灾区”,非洲和亚洲疫情也较为严重。2022年存在2次明显的H5亚型HPAI跨洲际传播,分别是2月份从欧洲传播到北美洲和10月份从北美洲传播到南美洲,经分析认为这2次跨洲际传播与候鸟迁徙有密切联系。结果表明,本轮H5N1亚型HPAI疫情全球大流行持续时间长、传播范围广,给世界养禽业造成巨大危害和深远影响。

2013—2020年中国家禽H5亚型高致病性禽流感监测数据分析

为评价我国家禽H5亚型高致病性禽流感(HPAI)的免疫效果和分布,整理分析2013—2020年《兽医公报》公布的家禽H5亚型HPAI监测数据。结果显示:时间上,2013-2020年家禽H5亚型HPAI血清免疫合格率呈上升趋势,ARIMA模型预测2021年家禽血清免疫合格率将上升至94.89%(95CI,94.06%~95.73%)。家禽H5亚型HPAI病原阳性率在2014年和2019年出现2个高峰,12月和3月的病原阳性率最高。空间上,病原学监测阳性疫区主要分布在中国南方。种间上,血清免疫合格率鸡最高,鸭其次,鹅最低;病原阳性率鸭最高,鹅次之,鸡最低(P<0.05)。研究结果提示,我国家禽免疫效果逐年增强,但要及时更新与流行毒株匹配的疫苗,完善水禽的免疫接种,重点加强我国南方地区冬春交替季节禽流感的监测工作和防控措施。

一株野鸟源H5N8高致病性禽流感病毒的遗传演化分析及生物学特性研究

2021年本实验室从发病野鸟组织样品中分离到一株H5N8亚型禽流感病毒(AIV),命名为A/black-headed gull/Tibet/1-2/2021(H5N8),简称为BH Gull/TB/1-2/2021(H5N8)。为进一步了解该病毒的生物学特性,本研究对其基因组测序并经遗传演化分析,结果显示,该病毒HA蛋白的裂解位点为PLREKRRKR↓GLF,符合高致病性AIV(HPAIV)的分子特征。在遗传进化上HA基因属于2.3.4.4b分支,外部基因与部分内部基因(PB1、PA、NP、NS)均与2020年~2021年分离到的H5N8亚型AIV相应基因的同源性最高,且处于同一分支;PB2基因与一株H9N2亚型AIV PB2基因同源性最高,为99.25%;M基因与近两年流行的2.3.4.4b分支H5N1亚型AIV同源性最高,且处于同一分支,推测该病毒为一株重组病毒。抗原性分析结果显示,该病毒与2.3.4.4分支H5-Re8、2.3.4.4b分支H5-Re14疫苗株抗原性相近。不同哺乳动物细胞系生长曲线结果显示,该病毒可在哺乳动物细胞系中有效复制,但其在A549中的复制效率高于其在MDCK及293T细胞中的复制效率。BALB/c小鼠感染实验结果显示,该病毒不经提前适应即可在小鼠的多脏器中有效复制,对小鼠的半数致死量(MLD50)为0.98log10EID50,对小鼠呈高致病性。本研究结果对H5亚型HPAI的综合防控和公共安全预警具有借鉴意义。

HA和NA匹配度对H5亚型高致病性禽流感假病毒影响的研究

为研究不同H5亚型高致病性禽流感病毒(H5 HPAIV)的HA和NA匹配度对流感假病毒组装和功能的影响,本研究将5株H5 HPAIV的HA和NA基因节段分别克隆于pCMV/R载体,构建3个HA和5个NA重组质粒,两两随机组合后将HA、NA质粒与pCMV/RΔ8.9质粒、p HR-CMV-Luc质粒构成4质粒系统,利用磷酸钙法将4个质粒转染HEK293T细胞,检测各细胞培养上清液血凝效价,结果显示:有3个上清液无血凝效价,其余12个上清液的血凝效价在100 HAU/m L~400 HAU/m L,表明获得12株具有血凝效价的流感假病毒。超速离心后获得浓缩假病毒,通过western blot检测假病毒HA蛋白的表达,结果显示各假病毒均在75 ku、50 ku和25 ku有特异性条带。利用各假病毒分别感染MDCK.1细胞60 h后裂解细胞,采用荧光素酶试验检测假病毒的相对荧光素酶活性(RLA),结果显示各假病毒RLA在5.0×10~1~4.5×10~5不等。上述结果首次表明不同H5 HPAIV的HA和NA相互匹配会对假病毒的血凝效价和相对荧光酶活性(RLA)造成影响。本研究为后续流感病毒灭活疫苗制备及抗病毒药物的研发奠定基础。

鸽H9N2亚型禽流感病毒的分离鉴定及致病性试验

H9N2亚型禽流感病毒属于A型流感病毒,目前H9N2亚型禽流感病毒不仅可以感染家禽,而且可以感染猪、猫等哺乳动物,甚至出现人类感染现象。因此,H9N2亚型流感病毒不仅影响畜禽的健康养殖,同时也具有一定的公共卫生学意义。近年来鸽群感染流感病毒时有报道,这其中包括H5N1、H7N9以及H9N2亚型禽流感病毒。虽然H9N2亚型禽流感毒株的致病性相对于H5和H7亚型较低,但是该亚型病毒在我国家禽中存在较为普遍,且目前从鸽子已分离到重组的H9N2毒株,该毒株不仅引起鸽子感染而且具有优先与人类呼吸道表面受体结合的能力,因此加强流感病毒在鸽群中流行情况具有重要的现实意义。

高致病性H5N1亚型人禽流感病毒性肺炎的影像学表现特点

目的探讨高致病性H5N1亚型人禽流感病毒性肺炎的影像学检查方法及胸部X线与CT影像表现特点。方法回顾性分析2006年6月深圳接诊的首例由卫生部确诊,并经过抢救治疗痊愈的高致病性H5N1亚型人禽流感病毒性肺炎患者的相关临床及影像学资料。结果胸部影像学特点是:①磨玻璃样影、大小片状影及肺实变影是人禽流感病毒性肺炎较早出现的影像表现;②病灶侵犯肺组织广泛,表现为多叶多段的两肺广泛受累;③病灶蔓延变化迅速;④肺实质、肺间质及胸膜受累可同时存在;⑤病灶吸收慢、迁延时间长,恢复期有肺纤维化的影像表现。结论影像学检查与诊断仍然是人禽流感病毒性肺炎的临床诊断、鉴别诊断、疗效评价及预后分析的重要手段。动态观察人禽流感病毒性肺炎的影像学变化及影像学表现特点,监测ARDS和肺部继发感染等并发症的发生,利于指导临床及时有效地进行治疗。

H5N1亚型高致病性禽流感病毒A/goose/Guangdong/1/96株反向基因操作系统的建立

A/goose/Guangdong/1/96(GSGD/1/96)是中国分离的第1株H5N1亚型禽流感病毒,它不仅是97香港感染并致人死亡的H5N1亚型流感病毒HA基因供体株,而且是中国目前已报到的H5亚型流感病毒分离株的共同祖先。本研究建立了该病毒的8质粒反向基因操作系统,并通过细胞转染成功拯救了该病毒(R-GSGD/1/96)。R-GSGD/1/96在对SPF鸡和Balb/c小鼠的致病性方面保持了与亲本野毒(W-GSGD/1/96)一致的生物学特性,即对鸡都是高致病性毒株,R-GSGD/1/96与W-GSGD/1/96的静脉致病指数分别为2.01和2.10;救获病毒与野生病毒一样,尽管106EID50经鼻腔感染小鼠后1～2d内能从肺脏检测到低滴度的病毒,但不能在小鼠体内成功复制。GSGD/1/96反向基因操作系统的成功建立为进一步开展中国高致病性禽流感病毒分离株的生物学特性、遗传衍化及结构与其功能关系研究奠定了基础。

一例人感染高致病性禽流感病毒(H5N1)的流行病学调查

目的通过对1例人感染高致病性禽流感病毒(H5N1)的调查分析,为制定人禽流感预防控制措施提供科学依据。方法采用流行病学调查、临床检查、血清学检查和 RT-PCR、 Real-time PCR 法进行分析和诊断。结果发现1例人感染高致病性禽流感病毒(H5N1),经救治无效因呼吸衰竭死亡。患者有明确的病、死禽接触史。采用隔离治疗、个人防护、医学观察、消毒等措施,疫情得到控制,未出现二代病例。结论需加强禽流感疫情监测,采取综合防控措施,预防疫情再次发生。