H7亚型禽流感病毒荧光微球抗体检测方法的建立

为建立一种简便、快速、特异的H7亚型禽流感病毒抗体检测方法,将荧光微球偶联标记鼠抗鸡IgG,并将羊抗鼠IgG和重组H7亚型禽流感病毒HA蛋白分别作为质控线(C线)和检测线(T线),喷涂于硝酸纤维素膜上。采用单一变量分析法对反应体系进行了优化,随后对该方法的敏感性、特异性、重复性及符合率进行了评估。结果显示:本研究建立的H7亚型禽流感病毒荧光微球抗体检测方法比参照国标建立的血凝抑制试验灵敏度高2倍;特异性较好,对H5亚型禽流感病毒、H9亚型禽流感病毒、鸡新城疫病毒、鸡传染性支气管炎病毒、鸡传染性法氏囊病病毒和鸡减蛋综合征病毒等常见禽病病原阳性血清的检测结果均为阴性;重复性试验结果的变异系数为3.13%~8.46%,具有较好的重复性;本研究方法和血凝抑制试验血清抗体检测结果的总体符合率为95.67%,两种方法具有较高的一致性。结果表明,本研究建立的H7亚型禽流感病毒荧光微球抗体检测方法性能稳定、结果可靠,为H7亚型禽流感快速检测提供了新方法。

H7亚型禽流感病毒对家禽和人感染回顾及H7N9亚型流感防控建议

截止于2013年4月2日，国家卫生和计划生育委员会通报我国上海市、安徽省和江苏省共发现7例人感染H7N9禽流感病例，其中2例死亡。由于H7N9禽流感病毒感染人是世界范围首次出现的事件，该消息一经报出，立即引发了很大的反响，人们担忧此次出现的新型流感病毒是否会形成大流行。鉴于当前对该病毒的基因特性、生物学特性及传播能力尚不清晰，为了使读者更好的认识H7N9亚型禽流感病毒，本文回顾H7亚型流感病毒的特性、H7亚型禽流感病毒在家禽中的流行情况和对人类的感染情况，

贵州省H7亚型禽流感病毒感染的血清学和病原学分析

为了解贵州省近几年H7亚型禽流感病毒感染情况,分别采集鸡血清3 031份、卵黄962份、咽-肛拭子1 607份、环境土壤拭子394份及野鸟粪便122份样本共计6 116份,采用血凝抑制试验(HI)和实时荧光定量RT-PCR方法进行H7亚型禽流感病毒特异性抗体和核酸检测。结果显示,在鸡血清和卵黄样本中,H7亚型禽流感表达特异性抗体的阳性率分别为1.2%(37/3 031)和2.3%(22/962);在2 123份鸡咽-肛拭子、环境样本和野鸟粪便中,均未检测出H7亚型禽流感病毒核酸。这些结果表明贵州省家禽、野鸟和环境土壤中尚未发现H7亚型禽流感病毒感染。

北美H7亚型禽流感病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立

H7N9亚型禽流感病毒(AIV)对家禽养殖业和公共卫生的持续威胁提示我们应加强对H7亚型流感病毒的监测。根据血凝素(HA)基因的分子遗传进化特点,H7亚型AIV分为欧亚和北美两个进化分支,我国自然分离到的H7亚型AIV均属于欧亚分支,但是目前我国尚未检测到北美H7亚型AIV。本研究通过分析NCBI数据库中H7亚型AIV HA基因序列,设计特异性引物,建立了针对北美H7亚型AIV HA基因的实时荧光定量PCR检测方法。该方法仅针对北美分支H7亚型AIV HA基因出现特异性扩增曲线,不能检出欧亚分支H7亚型AIV、其他亚型(H3、H5和H9)流感病毒以及新城疫病毒和鸡传染性支气管炎病毒;检测方法的灵敏度可达53 Copies/μL。该检测方法的建立为监测北美H7亚型AIV提供了良好的技术支撑,可用于外来AIV的监测。

北美H7亚型禽流感病毒RT-PCR检测方法的建立

本研究通过分析NCBI数据库中H7亚型禽流感病毒HA基因序列,根据该基因设计引物,建立了针对北美H7亚型禽流感病毒HA基因的一步法RT-PCR检测方法,并对反应条件进行了优化。该方法可特异地检出北美H7亚型禽流感病毒HA基因,而未检出欧亚分支H7亚型禽流感病毒H7N2和H7N9、其他亚型流感病毒(H1N1、H3N2、H5N1、H5N8和H9N2),以及新城疫病毒和鸡传染性支气管炎病毒;检测方法的灵敏度可达0.1 pg/μL。该检测方法的建立为监测北美H7亚型禽流感病毒提供了良好的技术支撑,可用于外来禽流感病毒的检测。

H7亚型禽流感病毒血凝素基因的真核表达载体的构建及鉴定

参考已发表的H7亚型禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)基因序列设计引物,以pUCH7为模板,经PCR扩增出一条1.7kb的HA全基因片段,将该片段定向克隆到真核表达质粒载体pcDNA3.1(一)中,转化大肠埃希氏菌DH5α,小量制备重组质粒pcDNA-HA,酶切鉴定正确后,转染COS-1细胞,经免疫荧光鉴定其体外表达情况。结果表明H7亚型AIV HA在COS-1细胞中获得了成功表达。用该重组质粒pcDNA-HA免疫BALB／C小鼠,制备免疫血清,经免疫印迹实验证实该H7亚型AIV HA在小鼠体内也得到了良好的表达。

2012年以来全球H7亚型禽流感疫情概览和防控

本文概览了2012-2013年6月全球发生的H7亚型禽流感疫情，分析了疫情特点，总结了产生重大公共卫生事件的中国H7N9禽流感疫情和引起重大家禽业损失的墨西哥H7N3禽流感防控经验和教训。

H7亚型禽流感病毒与禽类和人类的关系

近年来,禽流感已给人类公共卫生健康造成严峻的挑战^[1-2],频繁引起人和各种动物的流感流行,如2005年H5N1禽流感和2009年H1N1人流感流行.在亚洲、非洲和欧洲的许多国家,从家禽和野生鸟类检测出禽流感病毒,不仅给畜禽产业造成重大损失,而且对人类的公共健康构成严重威胁^[3].这些病毒对家禽、野生鸟类和人类都构成了潜在威胁,其流行病学特征很复杂,传播途径、防治措施等诸多问题有待深入研究.野生鸟类,

贵州省部分地区H7亚型禽流感监测与分析

为了解贵州省H7亚型禽流感感染情况,采用HI试验对全省9个地区家禽血清样本进行血清抗体检测,PT-PCR方法对家禽咽-肛拭子、养禽场环境样本和野鸟粪便进行病原核酸检测。结果显示:在1570份家禽血清样本中,H7亚型禽流感血清抗体阳性率为0.45%(7/1570);在350份家禽咽-肛拭子和310份养殖场环境样本中,均未检测出H7亚型禽流感病毒核酸;在160份野鸟粪便中,有1份为H7亚型禽流感病毒核酸阳性,阳性率为0.63%(1/160)。试验提示,在贵州省养禽场中不存在H7亚型禽流感感染,但迁徙野禽中可能存在H7亚型禽流感隐性感染,应当引起重视。

2019~2021年花溪区H5、H7亚型禽流感免疫抗体监测情况及分析

为了解2019~2021年花溪区的禽流感免疫效果,对其管辖的部分涉农乡镇(街道)随机采集120~400日龄的鸡群血清样品4 391份,采用血凝抑制试验对禽流感H5和H7亚型进行免疫抗体检测,根据高致病性禽流感诊断技术中抗体效价标准进行判定,HI抗体效价≥4log2,判定个体免疫效力合格;群体免疫抗体合格率≥70%,判为群体抗体合格率达标。检测结果显示,花溪区(H5+H7亚型)禽流感免疫抗体合格率2019、2020、2021年依次为91.03%、91.78%、96.19%,呈现逐年上升趋势;H7亚型抗体合格率高于H5亚型,规模化鸡场抗体合格率高于大户和散养户。综上所述,禽流感免疫抗体合格率均高出国家标准,说明全区免疫工作较扎实有效;监测禽流感免疫抗体为花溪区科学预防H5、H7亚型禽流感的流行提供数据支撑,推动花溪区的家禽业健康持续发展。

2017-2019年夷陵区活禽调运H7亚型禽流感抗体监测与分析

为监测夷陵区活禽调运H7亚型禽流感免疫情况,采用血凝抑制试验对该辖区2017-2019年送检的家禽养殖场样品进行H7亚型禽流感抗体检测,并对检测结果进行数据分析。共检测421场次10,372份血清样品,鸡、鸭H7亚型禽流感抗体总合格率分别为69%、70%。未免疫113场次,抗体阳性率均为0%。2017-2019年整体合格场次率从2%上升到86%,整体合格率从2%上升到89%。养鸡场一次免疫0.3m L疫苗的场次抗体效价区间为4~6log2,一次免疫0.5m L疫苗的场次抗体效价区间为8~10 log2,进行二次免疫的场次抗体效价区间为8~10log2,说明禽流感(H5+H7)二价、三价疫苗免疫效果好,生长周期长的活禽需进行二次免疫。虽然未免疫场次逐年减少,但需进一步督促养殖场落实禽病防控主体责任,指导养殖场认真做好禽流感防控工作。

新型水禽用三价禽流感病毒载体疫苗可有效阻断H5和H7亚型禽流感病毒感染与传播

2020年以来,H5亚型高致病性禽流感病毒先后在欧洲出现,并在欧洲引发大规模疫情,随后通过野鸟迁徙传入非洲、亚洲及北美多个国家,引起更大规模的疫情暴发。据世界动物卫生组织(WOAH)统计,新型H5N8和H5N1病毒在全球已累计导致约3亿多只家禽死亡或被扑杀,给养禽业造成了巨大损失。此次禽流感疫情导致大量家禽死亡或被扑杀,部分国家出现了“鸡蛋荒”。

H7亚型禽流感病毒HA蛋白在Sf9中的表达与纯化

【目的】真核表达H7亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)HA蛋白,为进一步制备H7亚型HIV亚单位疫苗,评价其免疫原性提供基础。【方法】首先根据草地贪夜蛾卵巢细胞(Spodoptera frugiperda clone 9,Sf9)的密码子偏嗜性,优化并合成H7亚型AIV的HA序列,将其克隆至穿梭质粒pFastBac1中;接着将重组HA基因的杆状病毒质粒转染至Sf9中,通过间接免疫荧光和Westernblots试验鉴定重组病毒是否拯救成功;再通过SYBRgreen染料法荧光定量PCR试验,建立基于gp64基因的杆状病毒qPCR定量方法,筛选出在Sf9中表达HA重组蛋白的最佳感染复数和孵育时间;最后通过His镍株亲和纯化HA重组蛋白。【结果】表达H7亚型AIV HA蛋白的重组杆状病毒在Sf9盲传3代后,Sf9开始出现肿胀、脱落、死亡等细胞病变,表明重组杆状病毒拯救成功;通过间接免疫荧光和Western blots试验发现,Sf9内出现可与HA重组蛋白特异性结合的绿色荧光信号,特异性结合的HA重组蛋白条带大小约70 kD左右,与预期相符,且HA重组蛋白可与H7亚型AIV阳性血清反应,表明HA重组蛋白表达成功;以构建的pUC19-gp64质粒为标准,建立基于gp64基因的杆状病毒qPCR检测方法,该方法在1×103~1×108 copy/μL间呈现良好的线性关系,标准曲线的相关系数R2=0.993;利用qPCR检测方法对杆状病毒液滴度进行定量,并通过Western blots试验筛选HA蛋白表达的最佳感染复数和孵育时间,结果显示以10MOI的比例接种Sf9,孵育72h,蛋白表达效果最好;通过His镍株亲和纯化HA重组蛋白,蛋白浓度为0.268mg/mL,鸡红细胞凝集效价为4log2。【结论】本试验在Sf9中成功表达并纯化H7亚型AIVHA蛋白,并建立与之相应的杆状病毒荧光定量PCR检测方法,可为进一步评价H7亚单位疫苗的免疫原性提供参考。

澳门发现活禽携带H7亚型禽流感病毒等6则

新华社澳门2月3日电，澳门特区政府民政总署与卫生局3日晚共同召开记者会，通报在当天一批留置检验的活禽样本中，发现带有H7亚型禽流感病毒，该批活禽没有流入市面。澳门将暂停买卖活禽至少3天，并采取扑杀活禽、清洗消毒等措施。

澳门现H7亚型禽流感病毒

澳门民政总署与特区政府卫生局3日深夜召开记者会称，在本地检验出H7亚型禽流感病毒。特区政府当晚销毁了批发市场内1．5万余只活禽，并暂停活禽销售3日。据悉，民政总署于2月3日傍晚确认在澳门半岛沙梨头街市抽取的一个环境样本，对H7亚型禽流感病毒呈阳性反应。

H7亚型禽流感病毒在不同动物间的分布

为了解H7亚型禽流感病毒在西安市畜禽和犬间流行及分布情况,对辖区内8个区(县)的健康未免疫鸡、猪、牛、羊、犬血清共998份样本进行了H7亚型禽流感病毒血凝与血凝抑制试验。结果表明,不同动物间均有H7亚型禽流感病毒分布,其中鸡、猪、牛、羊、犬血清的抗体阳性率分别为21%、1.25%、1%、8.86%和1.31%;部分区(县)有H7亚型禽流感病毒分布,说明健康动物H7亚型禽流感病毒带毒情况散在分布。

H7亚型禽流感流行特点及防控措施

2017年以来,H7N9禽流感发病率大幅上升,引起社会一定程度的恐慌,同时也给我国卫生、农业以及经济发展带来了巨大的挑战。结合目前H7亚型禽流感的主要症状、流行特点,进行流行因素分析,对疫情防控措施进行了总结,并提出了下一步建议,以供相关人员参考和借鉴。

2017—2018年黔东南州H7亚型禽流感免疫抗体检测

为了解黔东南州H7亚型禽流感疫苗的免疫效果,分别于2017年下半年和2018年上半年采集养殖场和散养户家禽血清10 093份,应用血凝与血凝抑制试验进行免疫抗体检测。结果:养殖场免疫抗体合格数为4 486份,合格率为84.59%;散养户免疫抗体合格数为3 076份,合格率为64.22%。结果显示:养殖场的总体免疫抗体合格率达到农业农村部规定≥70%的要求,散养户的总体免疫抗体合格率未达标;个别养殖场家禽抗体滴度离散度较大,其中鸭、鹅养殖场的离散度大于养鸡场。

我国H5、H7亚型禽流感流行现状与防控策略

在新形势下,我国H5、H7亚型禽流感不断盛行,毒株复杂化,呈现出多样化特征。随之,我国养禽业疾病防控以及可持续发展面临巨大挑战,急需要采取行之有效的防控策略,有效开展禽流感防控工作,高效防控H5、H7亚型禽流感,最大化降低发生率的基础上推动新时期养禽业"健康、协调、稳定"发展。从不同角度客观分析了我国H5、H7亚型禽流感流行现状与防控策略。

表达H7N9亚型禽流感病毒HA蛋白的重组血清4型禽腺病毒构建及其免疫效果评估

为构建H7N9亚型禽流感病毒和血清4型禽腺病毒(FAdV-4)的二联疫苗候选株,试验通过CRISPR/Cas9和Cre-Loxp系统,以课题组前期构建的表达EGFP蛋白的重组病毒FAdV4-EGFP为载体,构建能够稳定表达H7N9亚型禽流感病毒血凝素(HA)蛋白的重组血清4型腺病毒;并通过PCR、间接免疫荧光试验(IFA)、Westernblot试验以及SPF鸡保护性试验等方法,探究此重组病毒体外生物学特性并评估其为鸡提供的保护力。结果显示:研究成功构建能稳定表达H7N9禽流感亚型病毒HA蛋白的重组血清4型腺病毒,命名为FAdV4-H7;FAdV4-H7能在LMH细胞高效复制,并能在LMH细胞传代15次后仍能稳定表达HA蛋白;FAdV4-H7不仅高度致弱,而且能诱导机体产生高滴度针对H7N9亚型禽流感病毒HI抗体和FAdV-4的中和抗体,能为SPF鸡提供足够保护来抵抗致死性FAdV-4感染。研究表明,试验成功构建了重组病毒FAdV4-H7,为H7N9亚型禽流感病毒和FAdV-4的联防联控提供了二联苗候选疫苗株。