防御假单胞菌H78中crp基因对抗生素合成的调控作用

crp基因(编码cAMP受体蛋白)作为全局调控因子广泛存在于各种细菌中,在不同菌株中表现不同的调控功能。防御假单胞菌(Pseudomonas protegens)H78能产生硝吡咯菌素(Prn)、2,4-二乙酰基间苯三酚(2,4-DAPG)和藤黄绿菌素(Plt)等多种广谱抗生素。为探究P.protegens H78中crp基因对抗生素Prn、2,4-DAPG和Plt合成的调控作用,利用基因无痕敲除、HPLC分析、lacZ报告基因分析等技术,分析crp基因对抗生素Prn、2,4-DAPG和Plt合成及基因表达的影响。结果表明:H78菌株中crp基因的敲除导致Prn合成操纵子prnABCD表达显著下降;Plt合成及操纵子表达显著上升;2,4-DAPG合成及操纵子表达小幅下降。因此,P.protegens H78中crp基因对抗生素Prn合成存在显著的正调控作用,而对Plt合成存在明显的负调控作用,对2,4-DAPG合成存在一定的正调控作用。

TCL“自然光”专利独步 H78薄绝瘦身

9月10日,TCL在北京发布拥有完全自主知识产权的"自然光"技术,并同步推出了厚度仅72毫米的H78全高清动态液晶电视,创造了全球全高清液晶电视的"瘦身"记录.……

会当凌绝顶一览众山小 徐戈体验跨越超薄极限的TCL H78液晶电视

EF：你好，很高兴你能成为第一批使用TCL旗舰机型H78的用户，能谈谈你对TCL这个品牌的认识么？

假单胞菌H78中PhoR/B系统对磷元素吸收及其藤黄绿菌素合成的调控

【目的】研究根际荧光假单胞菌(Pseudomonas protegens)H78中双组分系统PhoR/B对Pst磷转运系统以及Plt生物合成的调控作用。【方法】通过同源重组的方法敲除pho R和pho B基因;使用lac Z报告基因融合质粒研究PhoR/B系统对Pst磷转运系统表达的调控;在不同磷浓度下测定H78野生型及H78pho BR突变株的生长,并在KMB培养基中测定其Plt产量。【结果】H78野生型中pst S′-′lac Z融合质粒表达的Lac Z酶活是H78pho BR突变株的15倍;在磷饥饿条件下H78的生长是H78pho BR菌株的3倍;在KMB培养基中,H78的Plt产量为H78phoBR菌株的2倍。【结论】PhoR/B系统正调控Pst转运系统的表达;在磷饥饿条件下,PhoR/B促进磷元素的吸收和利用;PhoR/B同时对Plt生物合成存在一定程度的正调控作用。

Pseudomonas protegens H78中抗真菌剂藤黄绿菌素的合成及其基因簇分析

假单胞菌株H78是本实验室从油菜根际分离得到的一株生防细菌。通过16S r RNA及藤黄绿菌素(pyoluteorin,Plt)合成基因plt C基因(编码聚酮合成酶)保守区段进行PCR测序,初步确定H78菌株可能属于P.protegens。本研究旨在进一步克隆H78菌株的Plt生物合成基因簇,分析其Plt合成特性以及H78菌株的分类地位。对假单胞菌株H78进行全基因组de novo测序;使用blast工具,分析假单胞菌株H78与P.protegens Pf-5、CHA0、P.aeruginosa M18、LESB58中Plt合成基因簇的同源性;使用KMB培养基对菌体进行发酵,测定菌体生长,对Plt合成进行HPLC测定。假单胞菌H78的Plt合成基因簇与其它4个菌株都存在保守的基因组成与布局,在Plt合成基因编码氨基酸序列上,H78与CHA0、Pf-5菌株的一致性高达99%~100%,其中与CHA0同源性更高;而与铜绿假单胞菌M18及LESB58菌株的一致性相对较低,为52%~88%。在KMB培养基中,假单胞菌株H78中累积合成Plt超过30滋g/m L。H78菌株属于P.proteg...

Pseudomonas protegens H78中Crc调控基因突变的转录组学分析

转录后调控子Crc蛋白(Catabolite repression control protein)在防御假单胞菌(Pseudomonas protegens)H78中发挥着重要的代谢调控作用。运用RNA-seq(RNA sequencing)技术,针对H78野生型和H78Δcrc突变株开展比较转录组学研究,利用COG(Clusters of orthologous groups of proteins)、KEGG(Kyoto encyclopedia of genes and genomes)数据库对受到Crc调控的基因进行功能分类。转录组结果显示:Crc突变导致218个基因的转录子水平发生两倍以上的显著变化,其中105个基因表达上调,113个基因表达下调。Crc蛋白对碳、能量、脂肪及氨基酸代谢、抗生素合成等次级代谢具有全局调控作用,比如,脂质转运和代谢的基因簇(H78_00275~00283)表达显著下调约2.7~8.1倍,能量生产和转换的cyoA_2B_2C_2D_2E_1基因簇(H78_05248~05252)基因表达显著下调约3.4倍,调控氨基酸转运与代谢的H78_04826astAA_4DB基因簇(H78_04822~04826)基因表达显著上调约4倍,抗真菌剂藤黄绿菌素(pyoluteorin,Plt)的合成基因簇(pltLABCDEFG)、转运基因簇(pltIJKNOP)表达下调平均约3倍,而调控基因簇(pltR,pltM,pltZ)的表达平均下调不足2倍,整体上Plt合成受到Crc的显著正调控。Crc转录组学结果为进一步开展Plt等抗生素合成的分子调控网络与代谢工程研究奠定基础。

假单胞菌H78中全局调控蛋白Crc对Plt生物合成及其基因表达的调控

【目的】研究Pseudomonas protegens H78中全局调控蛋白Crc对藤黄绿菌素(Pyoluteorin,Plt)生物合成及其基因表达的调控。【方法】通过同源重组方法无痕敲除crc基因,并将H78Δcrc突变株与H78野生株在KMB培养基中发酵测定Plt产量;采用lac Z报告分析研究Crc对plt合成基因表达的调控。【结果】突变株H78Δcrc的Plt产量显著下降;Crc在整体水平、转录水平及转录后水平均正调控plt合成基因的表达。【结论】全局调控因子Crc对Plt合成及基因表达表现为正调控作用。

防御假单胞菌双突变体H78ΔrsmA/E中hmgA基因对藤黄绿菌素生物合成的抑制

【背景】防御假单胞菌(Pseudomonas protegens) H78是分离于油菜根际的一株生防菌,其能合成藤黄绿菌素(pyoluteorin,Plt)等多种广谱抗生素,H78的rsmA/E双突变体中Plt合成被完全抑制。【目的】通过转座子诱变技术,筛选H78ΔrsmA/E双突变体中重新激活Plt合成的下游调控因子。【方法】通过同源重组的方法在pltL基因下游插入红色荧光蛋白(redfluorescentprotein,RFP)基因来指示Plt操纵子表达的激活情况;利用转座子随机插入突变、半随机PCR技术筛选并定位目标基因;通过基因回补等方法进一步验证基因功能。【结果】从约2万株H78ΔrsmA/E的转座子突变体中筛选到一株高产Plt和某种黑色素的菌株,并确定其插入位点为hmgA基因,hmgA基因回补能重新抑制H78ΔrsmA/E的Plt合成。【结论】假单胞菌双突变体H78ΔrsmA/E中hmgA基因对Plt的合成存在强烈抑制作用,是潜在的RsmA/E下游调控基因。本研究为进一步阐明Plt合成的调控机制与网络及通过基因工程提高Plt产量奠定了基础。

6sRNA对Pseudomonas protegensH78抗生素合成的调控

Pseudomonas protegens H78是本实验室从上海奉贤油菜根际分离得到的一株生防菌株,可以分泌多种抗生素和铁载体等次级代谢产物,6S RNA(ssrS编码产物)主要调控细菌DNA的转录过程。以H78菌株基因组DNA为模板,体外缺失体内同源重组构建H78 ssrS突变菌株,KMB培养基中测定菌体生长,进行藤黄绿菌素(Plt)发酵分析和pltL'-、prnA'-、pchD'-'lacZ表达酶活测定,分析6S RNA对H78抗生素生物合成等次级代谢的调控作用。与H78野生型比较,ssrS突变菌株Plt产量下降大约50%,pltL、pchD基因表达没有明显变化,prnA表达约为野生型的1.5倍,表明6S RNA对H78菌株的抗生素合成存在部分但不显著的调控作用。

防御假单胞菌H78中sRNA基因crcY/Z正调控藤黄绿菌素合成

防御假单胞菌(Pseudomonas protegens)H78能产生藤黄绿菌素(pyoluteorin,Plt)等多种广谱抗生素,这些抗生素的合成存在复杂的调控机制与网络。本研究旨在研究H78菌株碳分解代谢阻遏调控系统(Cbr/Crc)中两个同源小RNA(small RNA,sRNA)基因crcY和crcZ对Plt合成的调控机制。首先,利用无痕敲除方法构建crcY/Z双基因敲除突变体,发酵分析结果显示crcY/Z双敲除使H78菌株几乎完全丧失Plt的合成;其次,基因互补实验证实crcY或crcZ基因的外源互补能恢复crcY/Z双敲除突变体的Plt合成;最后,利用lacZ报告基因分析技术进一步证实crcY/Z双突变使Plt合成操纵子pltLABCDEFG的表达显著降低。结果表明:防御假单胞菌sRNA基因crcY/Z对Plt合成及基因表达存在显著的正调控作用。本研究将为进一步阐明Plt合成的调控网络及通过代谢工程提高Plt产量奠定基础。

超薄机身 TCL L52H78F液晶电视

TCL L52H78F是TCL H78系列液晶电视中的一款52英寸大屏产品,72mm的超薄机身设计,更能符合时尚家居生活理念。采用了自然光技术、动态背光技术以及附加圆偏振片,大幅提升电视画面的质量。TCL L52H78F的参数:屏幕尺寸:52英寸屏幕比例:16:9最佳分辨率:1920×1080亮度:500cd/m^2对比度:10000:1(动态)响应时间:4ms垂直可视角度:178°水平可视角度:178°机身尺寸:1308×886×269mm机身重量:40Kg产品功耗:320W输入端子:TV端子×2、AV端子×3、S端子×1、VGA输入×1、HDHI输入×2、分量输入×1其他性能DDH3数字动态全高清芯片、超高色温驱动、画面比例调节、主动数字背光调节、蓝晶彩屏技术、画厅提升技术、MEMC、全景显示、DDAS数字动态声谷。

黑莓果实UGT78H2重组蛋白诱导的响应面优化与蛋白纯化

UGT78H2是从黑莓果实中新发现的一个植物糖基转移酶家族成员,获得重组蛋白是后续深入研究该基因功能的基础。本研究通过构建原核表达载体,并应用响应面分析方法对重组蛋白的诱导条件(如诱导温度、IPTG浓度、菌液浓度和诱导时间)进行了优化,结果表明:(1)构建了p ET32a-UGT78H2原核表达载体,并成功导入到BL21(DE3)p Lys S细菌中;(2)经响应面优化,在29.5℃培养工程菌至菌液OD600=0.51,加入终浓度为0.4mmol·L-1的IPTG诱导7.4 h,可获得最大量重组蛋白166.4μg·m L-1(占总蛋白41.6%);(3)诱导时间和培养温度极显著地影响重组蛋白表达量,诱导剂IPTG和诱导前菌液浓度之间的交互效应显著影响重组蛋白的表达;(4)获得的带S-tag和His-tag的UGT78H2重组蛋白分子量为67.9 k Da,主要以包涵体形式存在,通过Ni-NTA柱纯化,成功获得了重组蛋白。以上结果为进一步采用酶学方法进行UGT78H2蛋白功能鉴定提供了基础资料。

黑莓糖基转移酶基因UGT78H2的分离鉴定及与类黄酮化合物的分子对接

糖基化修饰对于维持植物小分子化合物的多样性具有重要的作用。糖基转移酶是催化该反应发生的主体,但其底物受体和供体特异识别机制仍未清楚。本研究从黑莓(Rubus spp.)材料中获得了一个糖基转移酶全长编码基因,并提交国际糖基转移酶命名委员会命名为UGT78H2(Gen Bank登录号:KM061379)。该基因编码区全长1 380 bp,共编码459个氨基酸。编码蛋白的预测分子量为50.6 k D,等电点为5.88。生物信息学分析表明该酶具有植物糖基转移酶超家族I成员具有的植物次生代谢产物糖基转移酶保守区;系统发育树分析,UGT78H2属拟南芥糖基转移酶F类群,可能参与类黄酮化合物糖基化。氨基酸水平与月季Rh UF3GT1(UGT78H1)最相似,一致性为88%。UGT78H2在黑莓幼果期表达量最高,随着果实成熟,表达量迅速下降。以蒺藜苜蓿UGT78G1(PDB:3HBF)蛋白晶体结构为模板,同源模建了UGT78H2的结构,以其鉴定的受体催化活性中心与常见的11种类黄酮小分子进行分子对接。结果表明,UGT78H2最有可能催化的三种类黄酮化合物依次为黄酮醇槲皮素,柚皮素和黄烷醇表儿茶素。

大容量中文矩阵系统的设计

本文介绍了大容量中文矩阵系统的设计方法,叙述了系统的主要功能和软件设计方案,以及所用芯片的性能特点。

西门子C78H0-721型砂轮锯异常崩锯片原因分析

对西门子C78H0-721型砂轮锯异常崩锯片的现象进行了分析,列出了引起锯片崩裂的原因,采取应对措施,取得了较好的实施效果。