H7N9亚型禽流感油乳灭活苗诱导鸭产生HI抗体的研究

为了解H7N9亚型禽流感油乳灭活苗对不同品种鸭诱导免疫应答的基本能力和不同接种方法诱导各种鸭产生HI抗体的情况,试验采用H7N9亚型禽流感油乳灭活苗对4个品种(番鸭、白鸭、水鸭、麻鸭)的雏鸭进行3种不同程序的免疫试验(2周龄肌肉注射0.3 mL/只为程序1,2周龄肌肉注射0.5 mL/只为程序2,2周龄肌肉注射0.3 mL/只、3周龄肌肉注射0.6 mL/只为程序3)。结果表明,程序1免疫的雏鸭可在免疫后2周产生4.09~5.73 log_2HI抗体,免疫后1~8周均值为4.54~7.03 log_2;程序2免疫的雏鸭可在免疫后2周产生4.20~6.27 log_2的HI抗体,免疫后1~8周均值5.53~6.57 log_2;程序3免疫的雏鸭可在免后2周达到4.91~7.36 log_2,免疫后1~8周均值6.31~7.87 log_2。结果提示,该疫苗对4种鸭都具有良好的免疫原性,免疫后可较快地产生较高水平的抗体,且维持较长时间(8周以上),同时初步建立了鸭H7N9亚型禽流感油乳灭活疫苗的基本免疫程序。

广西H9N2亚型禽流感病毒疫苗候选株的筛选

【目的】筛选出免疫原性更优的H9N2亚型禽流感病毒(AIV)疫苗候选株用于新型疫苗研发,为加强对H9N2亚型AIV的防控提供技术支持。【方法】以2000—2020年广西地区分离获得的36株H9N2亚型AIV分离株为试验材料,依据HA基因遗传进化分析选择12株不同年份、不同地域及不同宿主来源的H9N2亚型AIV代表株,与目前使用的商品化H9亚型AIV疫苗株(SS株)进行交叉血凝抑制试验(HI)及抗原性分析,根据抗原分析结果选择其中具有不同抗原差异的代表株制备油乳剂灭活疫苗,并分别与商品化H9亚型AIV疫苗(SS株)进行交叉免疫保护试验。【结果】在36株H9N2亚型AIV广西分离株中有31株属于Y280-Like(9.4.1),其中26株属于分支I、5株属于分支II,另外5株属于G1-Like(h9.4.1),与我国常用疫苗株分属于不同进化分支。12株H9N2亚型AIV广西代表性分离株灭活后的HA效价≥7 log2,病毒灭活效果良好,可用于制备油乳剂灭活疫苗,且制备的油乳剂灭活疫苗稳定性和安全性良好。根据交互HI抗体滴度计算出各毒株间的抗原相关值(R),结果发现A/chicken/Guangxi/C227/2015(H9N2)株(简称C227株)与其他毒株的抗原性无明显差异,对应的R在0.72~0.93间波动;疫苗交叉保护试验结果也表明,C227株制备的油乳剂灭活疫苗对不同毒株的免疫保护率均高于80%,且免疫保护效果优于A/chicken/Guangxi/CX/2013(H9N2)株(简称CX13株),说明C227株更适合作为H9N2亚型AIV灭活疫苗的候选株。【结论】基于抗原性分析和免疫原性测定筛选出的A/chicken/Guangxi/C227/2015(H9N2)株对广西地区绝大部分H9N2亚型AIV流行株的免疫保护效果良好,可作为疫苗候选株用于研制新型H9N2亚型AIV疫苗。

H9亚型禽流感病毒黏膜DNA疫苗与灭活油乳苗的联合免疫研究

目的构建减毒沙门氏菌介导的H9亚型禽流感病毒黏膜DNA疫苗,并探讨黏膜DNA疫苗与灭活油乳苗联合应用的免疫效力。方法以RT-PCR法扩增H9N2亚型禽流感病毒分离株(A/Chicken/China/N/2005)的血凝素(HA)基因,然后克隆入pmcDNA3.1+载体中,获得重组质粒pmcDNA3.1-HA。通过电穿孔法将重组质粒转入减毒鼠伤寒沙门氏菌SL7207,构建沙门氏菌介导的黏膜DNA疫苗SL7207(pmcDNA3.1-HA)。重组菌与灭活油乳苗联合免疫1日龄商品代伊莎褐蛋鸡,并设立重组菌SL7207(pmcDNA3.1-HA)单独免疫组、油苗免疫组、空载体免疫组及空白对照组。用HI或ELISA测定血清和小肠黏膜抗体效价,以H9N2亚型禽流感病毒攻击,计算免疫保护力。结果联合免疫组和重组菌SL7207(pmcD-NA3.1-HA)单独免疫组能激发机体产生黏膜免疫应答,且与其他试验组之间存在显著性差异(P<0.05)。联合免疫组和重组菌SL7207(pmcDNA3.1-HA)单独免疫组的免疫保护力均与空载体组、空白对照组有显著差异(P<0.05),且联合免疫组的免疫保护率最高,达100%。结论成功构建H9亚型禽流感病毒黏膜DNA疫苗,DNA疫苗与灭活油乳苗联合应用具有良好的免疫协同作用。

H9亚型禽流感油乳剂灭活苗免疫、免疫后攻毒及人工感染鸡抗体的监测

本研究采用ＡＧＰ、ＨＩ等试验方法，对经Ｈ９亚型禽流感油乳剂灭活苗免疫、免疫后攻毒以及经Ｈ９Ｎ２活毒人工感染后的ＳＰＦ鸡抗体产生、消长规律进行了测定，结果表明人工感染ＳＰＦ鸡和免疫鸡一周后，ＡＧＰ的检出率即可达到１００％；Ｈ９亚型禽流感油乳剂灭活苗自免疫后一周内即可产生ＨＩ抗体，２１－２８天达到高峰，并能对相同亚型病毒感染引发良好的免疫反应。

H7N9亚型禽流感油乳灭活疫苗诱导鸡鸭鹅产生HI抗体的试验

本试验采用H7N9亚型流感油乳灭活疫苗,对雏鸡、雏番鸭和雏鹅作3种不同程序的免疫试验["2周龄,0.3 mL/只,肌肉注射"(程序1)、"2周龄,0.5 mL/只,肌肉注射"(程序2)、"2周龄,0.3 mL/只,3周龄0.6 mL/只,肌肉注射"(程序3)],以了解H7N9亚型禽流感油乳灭活疫苗对鸡、番鸭、鹅诱导免疫应答的基本能力和不同接种方法诱导鸡、番鸭、鹅产生HI抗体反应的情况。研究结果表明,本疫苗对3种雏禽都具有较好的免疫原性,以番鸭反应最强,鹅、鸡次之;不同免疫程序分析表明,雏鸡和雏鹅,以程序3优于程序2,程序2优于程序1;雏番鸭,以程序3和程序2优于程序1。3种动物(鸡、鸭、鹅)各周平均HI效价分别为4.46 Log2、6.31 Log2、5.60 Log2。研究结果为H7N9亚型禽流感油乳灭活疫苗的评价及相关禽类的免疫程序的制订提供了依据。

新城疫与禽流感(H9亚型)二联油乳剂灭活苗免疫效力试验

用新城疫病毒(NDV)LaSota株与禽流感病毒(AIV)F株尿囊腔接种非免疫鸡胚。取72～120小时死亡鸡胚液,灭活后分别制成新城疫油乳剂灭活苗、禽流感(H9亚型)油乳剂灭活苗、新城疫与禽流感(H9亚型)二联油乳剂灭活苗。免疫7日龄非免疫雏鸡,一周后开始检测ND、AI血凝抑制(HI)抗体,两周时各免疫组鸡的抗体效价都达到6log2以上,3周达到高峰,后维持在较高水平达45天以上。在65日龄进行攻毒,结果单苗和二联苗免疫鸡全部得到保护。

鸡新城疫、传染性支气管炎、减蛋综合征、H9N2亚型禽流感四联灭活油乳剂疫苗的研发和应用

随着现代养殖业集约化、规模化的发展,以及养殖密度的不断增加,现实养禽生产需要预防免疫的疾病种类较多,怎样能够简化免疫程序,减小应激水平和避免重复多次进行免疫注射,是养殖者最为关心的突出问题之一。将鸡新城疫病毒（NDV）、传染性支气管炎病毒（IBV）、减蛋综合征病毒（EDS76V）和H9N2亚型禽流感（AIV）等四种病毒（简称新支减流）联合在一起复配而成的四联灭活油乳剂疫苗就应运而生了。

减毒沙门氏菌介导H9亚型禽流感DNA疫苗与灭活疫苗联合应用研究

构建获得含有H9亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因的重组真核表达质粒pCAGGS-HA。重组质粒电转化减毒鼠伤寒沙门氏菌SL7207,获得重组沙门氏菌SL7207(pCAGGS-HA)。重组菌SL7207(pCAGGS-HA)以5×109cfu的剂量2次口服免疫1日龄商品代伊莎褐蛋鸡后,再以油乳剂灭活疫苗加强免疫1次,并设立重组菌单独免疫组、灭活苗免疫组、空载体免疫组及空白对照组。联合免疫组和重组菌单独免疫组的小肠黏膜抗体效价与其他组之间存在显著差异(P<0.05),且两组的攻毒免疫保护水平与空载体组之间差异显著(P<0.05),其中联合免疫组的免疫保护率最高,达100%,而灭活苗免疫组保护率为80%,表明减毒沙门氏菌介导的H9亚型禽流感DNA疫苗与灭活疫苗联合应用具有良好的免疫协同作用。

H_9N_2亚型禽流感病毒灭活苗最小免疫剂量及抗体消长规律的初步研究

H9N2亚型禽流感疫苗在我国普遍使用,在强大免疫压力下,H9N2亚型禽流感病毒变异加快,现有商品化灭活苗无法完全保护免疫鸡免受H9N2亚型禽流感病毒流行株的感染。为此,本研究以从近期流行毒株中筛选出的一株H9N2亚型禽流感病毒A/Chicken/Shanghai/441/2009（H9N2）（简称为SH441）为种毒.

不同H_5亚型禽流感灭活苗对鸡H_5N_1株的免疫效力试验

采用H5N2和H5N1两种类型的禽流感(A I)油乳灭活疫苗免疫鸡群对高致病性A I流行株H5N1A IV的攻毒保护效力进行了比较。结果表明:在同等免疫剂量条件下,H5N2和H5N1油乳灭活苗对鸡群具有相似或同等的免疫效力,均能抵抗对高致病性A IH5N1流行株的攻击;A I母源抗体对灭活苗免疫具有一定的干扰作用。

鸡新城疫—传染性支气管炎—禽流感(H9N2)三联灭活疫苗的安全性研究

为证实鸡新城疫—传染性支气管炎—禽流感(新支流)三联灭活油乳疫苗的安全性,通过颈部皮下注射接种14日龄来航鸡,每日测定鸡的体重,连续监测28 d,用t检验分析对照组和免疫组体重之间的差异显著性。试验结果表明,免疫接种组和空白对照组体重差异不显著,所制备的新支流三联疫苗不影响鸡的生长性能,对鸡安全。

家禽H5亚型禽流感油乳灭活苗最适免疫日龄与次数的探讨

应用禽流感油乳灭活疫苗免疫接种是目前防控禽流感最为有效的方法之一，但实际应用中发现抗体水平参差不齐，免疫效果良莠不一。为摸清不同免疫时间对免疫效果的影响，准确掌握各种家禽最适的免疫时间，以便使之获得良好的抵抗力，试验以前期H5亚型禽流感免疫现状调查的监测数据为依据，同时结合生产实际，采用国家指定厂家生产的H5亚型禽流感油乳灭活疫苗，对鸡、鸭、

“鸡新城疫、禽流感(H9亚型)二联灭活疫苗的研究与产业化”项目简介

公司“鸡新城疫、禽流感（H9亚型）二联灭活疫苗的研究与产业化”项目研究以新城疫病毒和禽流感H9亚型病毒为材料，感染鸡胚液经甲醛灭活后保留其免疫原性，以一定比例与油佐剂混合乳化，研制成一种能够“一针防两病”的新型疫苗。其间针对疫苗生产过程中的各个环节进行研究，解决了联苗技术，成功将鸡新城疫病毒与禽流感H9亚型病毒联合，而且达到并超过了单苗的防治效果，属国内领先技术；研究出新配方，解决了油乳剂灭活苗致注射部位变绿的行业难题，

重组禽流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗对鸡和鸭的免疫效果观察

H7N9流感变异毒株的出现给我国家禽养殖业造成了严重的疫情风险。为了解和评估新型重组禽流感H5+H7二价灭活疫苗(H5N1Re-8株+H7N9H7-Re1株)的免疫效果和抗体消长规律,我们开展了鸡、鸭现场免疫试验。监测结果表明,该疫苗对蛋鸡和蛋鸭都具有良好的免疫效果,H5和H7亚型免疫抗体水平在免疫后2周均能达到100%的免疫合格率。对雏鸡也具有较好的免疫效果,免疫一次时H5和H7亚型抗体合格率分别在一免后3周和2周达到70%以上,并维持到一免后13周;进行二次免疫后,H5和H7亚型抗体合格率在二免后1周都达到100%。对雏鸭的免疫效果相对较差,一次免疫的H5亚型抗体水平不能达到70%的免疫合格标准,二免后1周H5和H7亚型抗体合格率均能达到80%以上,必须加强免疫一次才能达到满意的免疫效果。

重组禽流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗免疫效果评估

2017年7月,农业部决定对全国家禽开展H7亚型流感免疫。为评价重组禽流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗(H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株)对家禽的安全性及免疫效果,2017年10—12月以田间试验方式,常规养殖肉鸡(江村黄鸡)、樱桃谷白鸭、黑棕鹅各120只。按程序免疫:肉鸡9日龄首免(剂量0.3 mL),30日龄二免(剂量0.5 mL);樱桃谷白鸭15日龄首免(剂量1 mL);黑棕鹅15日龄首免(剂量1 mL)、50日龄二免(剂量1.5 mL)。定期采集血清测定抗体效价直至出栏,并每日观察禽群临床表现。试验结果显示:鸡首免后21 d,H5亚型HI抗体效价为4.2 log2,抗体合格率均小于70%,H7亚型HI抗体效价为7.5 log2,抗体合格率均大于70%;二免后H5和H7亚型HI抗体效价均大于8 log2,抗体合格率均大于70%。鸭首免后21 d,H5亚型HI抗体效价为5.1 log2,抗体合格率均大于70%,H7亚型HI抗体效价为5.6 log2,抗体合格率均大于70%,出栏前(47日龄)H5和H7亚型HI抗体效价均大于6 log2,抗体合格率均大于70%。鹅首免后21 d,H5亚型HI抗体效价为3.9 log2,抗体合格率均小于70%,H7亚型HI抗体效价为5.2 log2,抗体合格率均大于70%;二免后H5和H7亚型HI抗体效价均大于7 log2,抗体合格率均大于70%。通过临床观察,未发现该疫苗有严重免疫副反应。试验结果表明,该二价灭活疫苗安全有效,但对于生长周期超过70 d天的家禽,应免疫两次。

成都市2021年秋季重组禽流感(H5+H7) 三价灭活苗免疫抗体水平的监测与分析

为监测成都市重组禽流感(H5+H7)三价灭活苗(H5N2 rSD57株+rFJ56株,H7N9 rLN79株)的免疫抗体水平,从成都市15个区(市)县的部分规模化养殖场、散养户中采集禽血清样本1320份,利用血凝和血凝抑制(HA-HI)试验监测H5和H7亚型禽流感的免疫抗体水平。结果得出:2021年秋季成都地区15个区(市)县禽流感的免疫抗体合格率为93.9%~99.8%;规模场H5亚型禽流感(rFJ56株、rSD57株)、H7亚型禽流感(rLN79株)的免疫抗体合格率分别为93.6%(674/720)、99.0%(713/720)、99.7%(718/720),散养户免疫抗体合格率分别为94.3%(566/600)、98.2%(589/600)、100.0%(600/600),各区(市)县之间免疫抗体合格率差异较小。本研究结果表明,重组禽流感(H5+H7)三价灭活苗能够使禽群产生有效的抗体水平,该结果为做好H5、H7亚型高致病性禽流感的预防与控制工作提供了参考。

重组禽流感二价灭活疫苗（H5+H7）有效抑制H7N9亚型禽流感病毒在鸡肺脏中的复制

从2013年至2017年上半年,H7N9亚型流感病毒已经引发五波疫情,且出现高致病性变异毒株。禽流感为高度接触性传染病,通过气溶胶进行传播的风险性较高。为探究H7N9亚型禽流感病毒能否在经H5+H7二价灭活苗免疫鸡的肺脏中有效进行复制,本研究选取H5+H7二价灭活苗对2周龄SPF鸡以0.3mL/只的剂量进行免疫,并在免疫14 d测定抗体滴度后以H7N9亚型禽流感病毒对免疫组与空白组SPF鸡点眼滴鼻方式攻毒,3d后剖杀采集肺脏进行病毒分离鉴定,结果显示免疫鸡肺脏中不含H7N9亚型禽流感病毒,而空白组SPF鸡能分离鉴定出H7N9亚型禽流感病毒。重组禽流感二价灭活苗(H5+H7)能有效抑制H7N9亚型禽流感病毒在鸡肺脏中的复制。

新佐剂新流二联浓缩苗与常规新流二联苗肉鸡免疫效果比较

为比较新型油佐剂鸡新城疫、禽流感(H9亚型)二联浓缩灭活疫苗(以下简称“新佐剂新流二联浓缩苗”)与常规油佐剂鸡新城疫、禽流感(H9亚型)二联灭活疫苗(以下简称“常规新流二联苗”)在商品肉鸡上的免疫效果,本研究用7日龄AA肉鸡对两种疫苗的安全性和有效性进行评价。安全性评价结果表明,商品肉鸡免疫新佐剂新流二联浓缩苗和常规新流二联苗后无任何不良反应,两种疫苗对肉鸡生长无影响,但新佐剂新流二联浓缩苗使用剂量免疫后14 d疫苗即可完全吸收,而常规新流二联苗免疫后28 d疫苗才能完全吸收。效力评价结果表明,与常规新流二联苗相比,新佐剂新流二联浓缩苗免疫后抗体产生速度快、滴度高、均匀度好,免疫后7 d即可为免疫鸡提供针对NDV和H9亚型禽流感的完全攻毒保护,保护效果优于常规新流二联苗。研究结果显示,新佐剂新流二联浓缩苗在肉鸡上安全、有效,具有疫苗粘度低、免疫剂量小、抗体产生快、疫苗吸收快的优势,适合大范围应用于肉鸡。