诺帝对HPV 16亚基因永生化人宫颈上皮细胞增殖、凋亡和分化的影响

目的：研究诺帝（Nordy）对HPV 16型亚基因（E6、E7）永生化人宫颈上皮细胞（H8细胞）增殖、分化和凋亡的影响。方法：MTT法检测诺帝对H8细胞增殖的抑制作用，SP法检测增殖细胞核抗原mcm 5的表达，FCM分析细胞周期和凋亡，光学显微镜、电子显微镜观察细胞形态变化，端粒重复序列扩增-酶联免疫吸附法（telomerase repeat amplification protocol-enzyme linked immunosorbent assay，TRAP—ELISA）法检测端粒酶活性变化。结果：10～100μmol/L浓度的诺帝能够不同程度地抑制H8细胞的增殖，细胞核内mcm 5的表达明显下降，可阻滞细胞周期于G0／G1期、S期细胞减少，细胞凋亡率增多，细胞形态上出现向成熟分化的趋势，端粒酶活性明显降低。结论：诺帝具有抑制H8细胞增殖，促进凋亡，诱导其分化的作用，这种作用可能是通过阻滞细胞周期，降低端粒酶活性来实现的。

宫颈永生化细胞和癌细胞的胞浆差异蛋白组学研究

目的:对HPV-16阳性的H8细胞株(宫颈上皮永生化细胞)和Caski细胞株(宫颈癌细胞)胞浆蛋白进行双向电泳和质谱分析,寻找与宫颈癌相关的特异性差异蛋白质。方法:采用双向凝胶电泳(2-dimensronal gel electrophoresis,2-DE)和基质辅助激光解吸飞行时间串联质谱(Matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight tandem mass spectrometry,MALDI-TOF-MS/MS)以及SWISS-PROT数据库,对H8和Caski细胞胞浆蛋白进行比较,找出差异蛋白质。结果:通过对宫颈永生化细胞和癌细胞胞浆蛋白2-DE图谱比较和质谱分析,初步鉴定出6个差异蛋白,它们分别为STK3、TRAF5、S100PI、KKb、CDK6、TAF2,其中S100P、IKKb、CDK6、TAF2、TRAF5这5种蛋白质在宫颈癌细胞胞浆中高表达,STK3蛋白质在宫颈癌细胞胞浆中表达缺失。结论:初步发现STK3、TRAF5、S100PI、KKb、CDK6、TAF2蛋白质在宫颈癌前病变和宫颈癌细胞胞浆中存在差异表达,通过对其功能的了解研究为宫颈癌前病变向癌转变机制的探讨、特异性肿瘤标志物的寻找提供实验依据。

宫颈永生化细胞和癌细胞胞膜差异蛋白质组学研究

目的建立HPV-16阳性的宫颈上皮永生化细胞(H8细胞株)和宫颈癌细胞(CaSKi细胞株)胞膜蛋白双向电泳图谱,寻找特征性的差异蛋白点。方法提取两种细胞胞膜蛋白质进行双向凝胶电泳(2-dimensronal gel electrophore-sis,2-DE),建立电泳图谱,然后筛选出差异点进行基质辅助激光解吸飞行时间串联质谱(matrix-assisted laser desorption/i-onization time-of-flight tandem mass spectrometry,MALDI-TOF-MS/MS)分析,鉴定出蛋白质。结果获得了分辨率和重复性均较好胞膜蛋白2-DE图谱,并分析找出了13个的差异蛋白点,对其中3个显著差异点进行质谱分析和初步鉴定。结论建立了H8和Caski细胞胞膜蛋白2DE图谱,并初步发现LRC8D、EDAR、MTX1蛋白在宫颈癌前病变和宫颈癌细胞胞膜中存在差异表达,为宫颈癌及癌前病变的诊断及癌变机制提供了帮助。

长链非编码RNA FAL1对宫颈癌Hela细胞增殖、侵袭与迁移的影响

目的:探索人宫颈癌细胞Hela与正常人宫颈永生化上皮细胞H8中长链非编码RNA FAL1分子的表达差异及沉默人宫颈癌细胞Hela中FAL1的表达对人宫颈癌细胞Hela增殖、侵袭和迁移的影响。方法:利用qRT-PCR技术检测细胞中FAL1基因表达水平;设计并合成FAL1的siRNA片段(FAL1-siRNA)转染宫颈癌Hela细胞,qRT-PCR技术检测其沉默效率;MTT检测人宫颈癌细胞Hela增殖;Transwell实验检测人宫颈癌细胞Hela的侵袭、迁移能力的变化。结果:长链非编码RNA FAL1在人宫颈癌细胞Hela中的表达明显高于正常人宫颈永生化上皮细胞H8中的表达,FAL1-siRNA下调了Hela细胞中FAL1的表达,并抑制了宫颈癌细胞Hela的增殖和侵袭迁移能力。结论:FAL1-siRNA能够下调Hela细胞FAL1的表达,进而抑制人宫颈癌细胞Hela的增殖及其侵袭迁移能力,提示长链非编码RNA FAL1在宫颈癌中是一种癌基因,FAL1的表达异常增高可能是宫颈癌发生发展的重要分子机制。

四甲基吡啶卟啉-光动力疗法对人宫颈永生化上皮H8细胞的作用

目的探讨四甲基吡啶卟啉-光动力疗法(TMPy P4-PDT)对人宫颈永生化上皮H8细胞增殖和凋亡的影响。方法显微镜下观察TMPy P4-PDT后H8细胞形态学变化;采用细胞活力试剂盒(CCK-8)检测细胞的增殖活力;Annexin V-FITC/PI双染试剂盒检测细胞凋亡率;免疫细胞化学SABC法检测TMPy P4-PDT对H8细胞p16INK4a蛋白的表达变化;蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测人端粒酶逆转录酶(hTERT)、p21蛋白的表达。结果 TMPy P4-PDT可抑制H8细胞的增殖,诱导细胞凋亡,且在一定范围呈TMPy P4剂量依赖性;免疫细胞化学SABC法结果显示,TM Py P4-PDT可降低细胞p16INK4a蛋白的阳性率;Western blotting结果表明,TMPy P4-PDT下调hTERT的表达,上调p21的表达。结论 TM Py P4-PDT可抑制H8细胞的增殖,诱导H8细胞的凋亡,其作用机制可能与下调p16INK4a、hTERT及上调p21的表达有关。

单磷酸阿糖腺苷对HPV16感染永生化宫颈上皮细胞株H8生物学影响

目的探讨单磷酸阿糖腺苷对HPV16感染永生化宫颈上皮细胞株H8增殖、凋亡及侵袭的影响。方法分别以0、20、40、60、80μg/mL浓度单磷酸阿糖腺苷处理体外培养HPV16感染永生化宫颈上皮细胞株H8,CKK-8法分别在12、24、48、72 h检测H8细胞增殖情况,筛选合适药物浓度及作用时间;将体外培养HPV16感染的H8细胞随机分为三组:对照组、单磷酸阿糖腺苷组及顺铂组,以CCK-8法检测细胞活力;以流式细胞技术检测细胞凋亡率;以Transwell侵袭实验和细胞划痕实验检测单磷酸阿糖腺苷对H8细胞侵袭能力的影响;以免疫印记法检测凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤因子相关X蛋白(Bax)及侵袭相关蛋白E-cadherin、Vimentin的表达。结果选择60μg/mL的单磷酸阿糖腺苷处理H8细胞48 h来进行H8细胞增殖、凋亡研究,选择单磷酸阿糖腺苷处理H8细胞12 h后检测细胞侵袭转移力。与对照组比较,单磷酸阿糖腺苷组与顺铂组H8细胞活力、H8细胞数目、侵袭能力、Bcl-2、Vimentin表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),凋亡率、E-cadherin及Bax表达显著增加,差异有统计学意义(P<0.05);单磷酸阿糖腺苷组和顺铂组相比,各指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论单磷酸阿糖腺苷能抑制HPV16感染永生化宫颈上皮细胞H8增殖及侵袭转移能力,促进其凋亡。