人胚胎干细胞H9诱导心脏类器官的方法研究

目的探索人胚胎干细胞H9诱导心脏类器官方法的研究。方法首先,我们从碱性磷酸酶以及干细胞干性标志物鉴定人胚胎干细胞(human embryonic stem cell,hESC)的全能性。然后,采用U型孔诱导H9向中胚层(mesoderm,MES)分化,进而继续诱导向心脏类器官分化。在分化过程中,我们观察不同时间点的心脏类器官形态变化,并选取相应时间点,采用real-time PCR、western blotting、细胞免疫荧光化学技术鉴定诱导分化方法的合理性。结果光镜下,H9细胞呈克隆状生长,ALP显示呈蓝紫色且干细胞干性标志物OCT4在细胞核内表达呈强阳性(绿色)。Real-time PCR结果显示,随着时间的推移,心肌细胞标志基因ACTN2、cTnT和MYL2以及非心肌细胞标志物在一定的时间节点后呈爆发式上升;western blotting显示第5天后开始递增表达;细胞免疫荧光显示,分化18天的心脏类器官ACTN2阳性表达(绿色),肌节排列不规则且肌丝分布不均匀;而诱导40天时的心脏类器官中心肌细胞呈杆状,肌节排列整齐,肌丝分布于整体心肌细胞,CX43高表达,趋向于成熟。结论此方法成功诱导H9向心脏类器官分化。