禽流感病毒H9亚型灭活油乳剂疫苗的免疫试验

以低致病性禽流感病毒 (AIV)H9N2亚型株的鸡胚适应毒经尿囊腔接种 1 0日龄鸡胚 ,从2 4h后死亡胚及 96h后 4℃致冷死亡胚收集尿囊液。尿囊液的血凝价约 7log2 ,每毫升约含 1 0 8 6个ELD50 的病毒。将尿囊液经 0 1 %福马林灭活后 ,用超滤器将尿囊液浓缩 5倍后分别制成双联灭活疫苗。对 4周龄SPF鸡肌肉注射 0 5ml或 0 3ml单联H9亚型AIV灭活苗 ,在接种后 2、3、4、5周后 ,血清中对H9亚型AIV的血凝抑制 (HI)抗体效价分别是 5 1、7 2、8 3、1 0log2 或 3 8、6 5、6 3、8 3log2 。注射 0 5ml的H9亚型AIV和NDV二联油乳苗的鸡 ,在接种后 2、3、4、5周对H9亚型AIV及Lasota株NDV的HI滴度分别是 4 6、5 6、6 7、8log2 及 7、7 6、6 7、7log2 。显然 。

禽流感H9亚型灭活油乳剂疫苗不同剂量的免疫效果比较

将 4 7只 2 8日龄SPF鸡分为 4组 ,第 1～ 3组为试验组 ,每组 12只 ,分别肌肉注射禽流感H9亚型灭活油乳剂疫苗 0 .1、0 .3、0 .5mL/只 ,第 4组 11只为对照组。各组鸡在免疫后 1、2、3周采血 ,测定H9抗体水平 ;在免疫后 3周用 1∶10稀释的AIV H9N2攻毒 ,0 .2mL/只。攻毒后第2、3、4周继续测定H9抗体水平 ,观察了疫苗对鸡的保护效果。结果显示 ,0 .5mL/只剂量的免疫效果比 0 .1mL/只和 0 .3mL/只剂量的免疫效果好 ;攻毒用的AIV H9N2的致病力低 ,对所有试验鸡均不致死。

禽流感H5、H9亚型灭活油乳剂疫苗的免疫效果评价

对采自成都市牧星蛋鸡场免疫鸡群的2 943份血清样品进行了H5、H9亚型禽流感抗体免疫接种试验。结果表明,在2 943份血清样品中,H5、H9亚型HI效价≥4 log 2的样品数量分别为2 455、2 738份,免疫合格率分别为83.4%、93.1%,免疫后抗体高峰维持7log2以上的时间达63 d以上。超过蛋鸡场免疫合格标准,可大面积用于禽流感强制免疫和防控。

禽流感(H5、H9亚型)二价油乳剂灭活疫苗试验研究

本品系用A型禽流感病毒A/Ostrich/Denmark/72420/96(LPAI-H5N2)株及A/Chicken/Shanghai/1/98(H9N2)株分别接种易感鸡胚、收获感染胚液、超滤浓缩后经甲醛溶液灭活 ,加油佐剂混合乳化制成的油乳剂灭活疫苗。疫苗用4周龄SPF鸡作安全试验 ,每只鸡肌肉注射2ml ,结果表明试验鸡均无全身症状和局部病变 ,证明疫苗安全性良好。取疫苗一羽份免疫4周龄SPF鸡作效力检验 ,免疫鸡全部获得保护 ,对照鸡全部感染或死亡。经不同免疫剂量测定 ,证明一羽份疫苗中至少含有8个免疫剂量。免疫干扰试验证明两种抗原具有免疫协同作用。

禽流感(H_9亚型)油乳剂灭活疫苗的血凝抑制(HI)抗体动态变化的研究

从市场上随机购得不同厂家各两批次的商品化禽流感(H9)油乳剂灭活疫苗,按瓶签说明免疫禽流感母源抗体为阴性的蛋鸡。当疫苗抗体下降至5log2左右时部分鸡再二免,并做田间试验。结果表明,免疫1周出现血清抗体,并逐日上升,3周达高峰。首次免疫8周后抗体下降至5log2左右,二次免疫15周后抗体下降至5log2左右。这四批疫苗的免疫原性较高,安全可靠,两次免疫保护期可保护至开产后。

禽流感(H9亚型)油乳剂灭活疫苗的研究

将 H9亚型禽流感病毒尿囊液 ,经甲醛灭活 ,以矿物油为佐剂制成油乳剂灭活疫苗。疫苗物理性状良好 ,接种鸡无不良反应 ,接种疫苗后 1 4d,禽流感病毒 HI GMT(Log2 )为 7.7～ 7.8,2 1 d为 8.9～ 9.3 ,于接种疫苗后 1 4、2 1、3 0、6 0 d攻击同型禽流感病毒 ,接种疫苗鸡全部获得保护。现地实验取得了良好地免疫效果 ,证明制备的油乳剂灭活疫苗安全 ,免疫原性良好。

广西H9N2亚型禽流感病毒疫苗候选株的筛选

【目的】筛选出免疫原性更优的H9N2亚型禽流感病毒(AIV)疫苗候选株用于新型疫苗研发,为加强对H9N2亚型AIV的防控提供技术支持。【方法】以2000—2020年广西地区分离获得的36株H9N2亚型AIV分离株为试验材料,依据HA基因遗传进化分析选择12株不同年份、不同地域及不同宿主来源的H9N2亚型AIV代表株,与目前使用的商品化H9亚型AIV疫苗株(SS株)进行交叉血凝抑制试验(HI)及抗原性分析,根据抗原分析结果选择其中具有不同抗原差异的代表株制备油乳剂灭活疫苗,并分别与商品化H9亚型AIV疫苗(SS株)进行交叉免疫保护试验。【结果】在36株H9N2亚型AIV广西分离株中有31株属于Y280-Like(9.4.1),其中26株属于分支I、5株属于分支II,另外5株属于G1-Like(h9.4.1),与我国常用疫苗株分属于不同进化分支。12株H9N2亚型AIV广西代表性分离株灭活后的HA效价≥7 log2,病毒灭活效果良好,可用于制备油乳剂灭活疫苗,且制备的油乳剂灭活疫苗稳定性和安全性良好。根据交互HI抗体滴度计算出各毒株间的抗原相关值(R),结果发现A/chicken/Guangxi/C227/2015(H9N2)株(简称C227株)与其他毒株的抗原性无明显差异,对应的R在0.72~0.93间波动;疫苗交叉保护试验结果也表明,C227株制备的油乳剂灭活疫苗对不同毒株的免疫保护率均高于80%,且免疫保护效果优于A/chicken/Guangxi/CX/2013(H9N2)株(简称CX13株),说明C227株更适合作为H9N2亚型AIV灭活疫苗的候选株。【结论】基于抗原性分析和免疫原性测定筛选出的A/chicken/Guangxi/C227/2015(H9N2)株对广西地区绝大部分H9N2亚型AIV流行株的免疫保护效果良好,可作为疫苗候选株用于研制新型H9N2亚型AIV疫苗。

禽流感H_9亚型油乳剂灭活疫苗的改进

用新引进的 6株禽流感病毒 (AIV )H9亚型和现制苗用的AIV H9毒株分别制备AIV H9、AIV H5、NDV二联三价油乳剂灭活疫苗 ,免疫 5日龄和 10日龄雏鸡 ,于免疫当日直至 80日龄鸡出栏期间定期采血 ,用HI法检测相应的AIV H9、AIV H5和NDV抗体。结果表明 ,10日龄免疫鸡的AIV H9抗体效价最高 ,5日龄和 10日龄免疫鸡的AIV H5抗体效价差别不明显 ;用引进的 3号AIV H9毒株制备的联苗对 10日龄雏鸡免疫后 2 0d产生AIV H9保护性抗体 ,一直持续到 80日龄以上 ,期间的抗体平均效价为 6 .72 (lb) ,而现制苗用的AIV H9毒株制备的联苗免疫力较差 ;现制苗用的AIV H5毒株制备的联苗免疫效力仍较好 ;分别接种 0 .2 5、0 .30mL/只联苗的雏鸡AIV H5抗体效价没有明显差别 ,而AIV H9抗体效价以接种 0 .30mL/只剂量的为高 ;不同日龄、不同免疫剂量的试验鸡NDV抗体效价没有明显差异。

H9亚型禽流感油乳剂灭活苗免疫、免疫后攻毒及人工感染鸡抗体的监测

本研究采用ＡＧＰ、ＨＩ等试验方法，对经Ｈ９亚型禽流感油乳剂灭活苗免疫、免疫后攻毒以及经Ｈ９Ｎ２活毒人工感染后的ＳＰＦ鸡抗体产生、消长规律进行了测定，结果表明人工感染ＳＰＦ鸡和免疫鸡一周后，ＡＧＰ的检出率即可达到１００％；Ｈ９亚型禽流感油乳剂灭活苗自免疫后一周内即可产生ＨＩ抗体，２１－２８天达到高峰，并能对相同亚型病毒感染引发良好的免疫反应。

新城疫与禽流感(H9亚型)二联油乳剂灭活苗免疫效力试验

用新城疫病毒(NDV)LaSota株与禽流感病毒(AIV)F株尿囊腔接种非免疫鸡胚。取72～120小时死亡鸡胚液,灭活后分别制成新城疫油乳剂灭活苗、禽流感(H9亚型)油乳剂灭活苗、新城疫与禽流感(H9亚型)二联油乳剂灭活苗。免疫7日龄非免疫雏鸡,一周后开始检测ND、AI血凝抑制(HI)抗体,两周时各免疫组鸡的抗体效价都达到6log2以上,3周达到高峰,后维持在较高水平达45天以上。在65日龄进行攻毒,结果单苗和二联苗免疫鸡全部得到保护。

囊素肽对禽流感(H9N2)油乳剂灭活疫苗免疫效果的影响

为研究囊素肽对禽流感(H9N2)油乳剂灭活疫苗免疫效果的影响,将200只鸡分为疫苗组、疫苗+囊素组、囊素组和对照组,每组50只。从13日龄起每7 d测定其法氏囊指数、禽流感(H9)HI抗体水平。结果表明:囊素肽能提高禽流感(H9N2)油乳剂灭活疫苗免疫后的抗体水平,并延长高水平抗体的维持期,能显著地促进法氏囊的生长发育。

禽流感H_5亚型油乳剂灭活疫苗抗体消长规律的研究

用禽流感H5N2 亚型毒株接种 10日龄SPF鸡胚 ,收获尿囊液 ,经甲醛灭活后与优质矿物油佐剂混合乳化制成油乳剂灭活疫苗。抽取其中三批 ,接种 2 8日龄非免疫鸡 10 0羽 ,4天后检测抗体 ,以后每隔 1周或 2周采血检测H5亚型HI抗体 ,并于抗体水平为 2log2、4log2、6log2左右时攻毒。结果表明 ,免疫后 4天即能检测出抗体 ,之后逐渐上升 ,至第 5周抗体水平达到高峰且较稳定 ,然后缓慢下降 ,110天后抗体降至临界值以下。攻毒结果表明 ,能使鸡抵抗强毒攻击的抗体临界值为 6log2。

H9亚型禽流感病毒黏膜DNA疫苗与灭活油乳苗的联合免疫研究

目的构建减毒沙门氏菌介导的H9亚型禽流感病毒黏膜DNA疫苗,并探讨黏膜DNA疫苗与灭活油乳苗联合应用的免疫效力。方法以RT-PCR法扩增H9N2亚型禽流感病毒分离株(A/Chicken/China/N/2005)的血凝素(HA)基因,然后克隆入pmcDNA3.1+载体中,获得重组质粒pmcDNA3.1-HA。通过电穿孔法将重组质粒转入减毒鼠伤寒沙门氏菌SL7207,构建沙门氏菌介导的黏膜DNA疫苗SL7207(pmcDNA3.1-HA)。重组菌与灭活油乳苗联合免疫1日龄商品代伊莎褐蛋鸡,并设立重组菌SL7207(pmcDNA3.1-HA)单独免疫组、油苗免疫组、空载体免疫组及空白对照组。用HI或ELISA测定血清和小肠黏膜抗体效价,以H9N2亚型禽流感病毒攻击,计算免疫保护力。结果联合免疫组和重组菌SL7207(pmcD-NA3.1-HA)单独免疫组能激发机体产生黏膜免疫应答,且与其他试验组之间存在显著性差异(P<0.05)。联合免疫组和重组菌SL7207(pmcDNA3.1-HA)单独免疫组的免疫保护力均与空载体组、空白对照组有显著差异(P<0.05),且联合免疫组的免疫保护率最高,达100%。结论成功构建H9亚型禽流感病毒黏膜DNA疫苗,DNA疫苗与灭活油乳苗联合应用具有良好的免疫协同作用。

鸡新城疫、传染性支气管炎、减蛋综合征、H9N2亚型禽流感四联灭活油乳剂疫苗的研发和应用

随着现代养殖业集约化、规模化的发展,以及养殖密度的不断增加,现实养禽生产需要预防免疫的疾病种类较多,怎样能够简化免疫程序,减小应激水平和避免重复多次进行免疫注射,是养殖者最为关心的突出问题之一。将鸡新城疫病毒（NDV）、传染性支气管炎病毒（IBV）、减蛋综合征病毒（EDS76V）和H9N2亚型禽流感（AIV）等四种病毒（简称新支减流）联合在一起复配而成的四联灭活油乳剂疫苗就应运而生了。

减毒沙门氏菌介导H9亚型禽流感DNA疫苗与灭活疫苗联合应用研究

构建获得含有H9亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因的重组真核表达质粒pCAGGS-HA。重组质粒电转化减毒鼠伤寒沙门氏菌SL7207,获得重组沙门氏菌SL7207(pCAGGS-HA)。重组菌SL7207(pCAGGS-HA)以5×109cfu的剂量2次口服免疫1日龄商品代伊莎褐蛋鸡后,再以油乳剂灭活疫苗加强免疫1次,并设立重组菌单独免疫组、灭活苗免疫组、空载体免疫组及空白对照组。联合免疫组和重组菌单独免疫组的小肠黏膜抗体效价与其他组之间存在显著差异(P<0.05),且两组的攻毒免疫保护水平与空载体组之间差异显著(P<0.05),其中联合免疫组的免疫保护率最高,达100%,而灭活苗免疫组保护率为80%,表明减毒沙门氏菌介导的H9亚型禽流感DNA疫苗与灭活疫苗联合应用具有良好的免疫协同作用。

猪流感病毒H1N2亚型油乳剂灭活苗的免疫效果

【目的】评估以H1N2亚型猪流感病毒(SIV)制成油乳剂灭活苗的免疫效果,为预防SIV的发生和蔓延提供参考依据。【方法】采用不同剂量的SIVH1H2亚型油乳剂灭活苗对猪只进行免疫,免疫后采血,用HI试验测定抗体效价,连续测定至第10周,然后对猪只进行攻毒,并观察其临床症状及进行病毒检测等。【结果】中免疫剂量组(4mL/头)和高免疫剂量组(6mL/头)的抗体滴度高于低免疫剂量组(2mL/头);免疫组与对照组在攻毒后猪只的体温无显著差异(P>0.05),免疫组攻毒后无明显的临床症状,除中免疫剂量组在攻毒后第1d检测出鼻粘液病毒外,其他时间及其他剂量组均未检测到SIV,对猪只起到良好的保护作用。【结论】SIVH1N2亚型油乳剂灭活苗具有良好的免疫效果,对同亚型病毒的攻击具有一定保护作用,其最佳免疫剂量为4mL/头。

H7N9亚型禽流感油乳灭活苗诱导鸭产生HI抗体的研究

为了解H7N9亚型禽流感油乳灭活苗对不同品种鸭诱导免疫应答的基本能力和不同接种方法诱导各种鸭产生HI抗体的情况,试验采用H7N9亚型禽流感油乳灭活苗对4个品种(番鸭、白鸭、水鸭、麻鸭)的雏鸭进行3种不同程序的免疫试验(2周龄肌肉注射0.3 mL/只为程序1,2周龄肌肉注射0.5 mL/只为程序2,2周龄肌肉注射0.3 mL/只、3周龄肌肉注射0.6 mL/只为程序3)。结果表明,程序1免疫的雏鸭可在免疫后2周产生4.09~5.73 log_2HI抗体,免疫后1~8周均值为4.54~7.03 log_2;程序2免疫的雏鸭可在免疫后2周产生4.20~6.27 log_2的HI抗体,免疫后1~8周均值5.53~6.57 log_2;程序3免疫的雏鸭可在免后2周达到4.91~7.36 log_2,免疫后1~8周均值6.31~7.87 log_2。结果提示,该疫苗对4种鸭都具有良好的免疫原性,免疫后可较快地产生较高水平的抗体,且维持较长时间(8周以上),同时初步建立了鸭H7N9亚型禽流感油乳灭活疫苗的基本免疫程序。

鸡新城疫—传染性支气管炎—禽流感(H9N2)三联灭活疫苗的安全性研究

为证实鸡新城疫—传染性支气管炎—禽流感(新支流)三联灭活油乳疫苗的安全性,通过颈部皮下注射接种14日龄来航鸡,每日测定鸡的体重,连续监测28 d,用t检验分析对照组和免疫组体重之间的差异显著性。试验结果表明,免疫接种组和空白对照组体重差异不显著,所制备的新支流三联疫苗不影响鸡的生长性能,对鸡安全。