期刊文献+
共找到78篇文章
< 1 2 4 >
每页显示 20 50 100
苦参碱对H9N2 AIV感染小鼠NLRP3炎性体信号通路的影响 被引量:3
1
作者 魏婧洁 蒋宁波 +3 位作者 梁燕 张倩 孙英健 胡格 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第21期4315-4326,共12页
【目的】流感病毒感染引发机体的炎症反应及免疫稳态失衡,由此产生的细胞因子风暴(CS)是引起感染宿主死亡的主要原因。通过探究苦参碱对H9N2 AIV感染小鼠的保护作用及其调节NLRP3炎性体信号通路的特点及作用机制,可进一步完善中药抗病... 【目的】流感病毒感染引发机体的炎症反应及免疫稳态失衡,由此产生的细胞因子风暴(CS)是引起感染宿主死亡的主要原因。通过探究苦参碱对H9N2 AIV感染小鼠的保护作用及其调节NLRP3炎性体信号通路的特点及作用机制,可进一步完善中药抗病毒的理论依据,为新型抗病毒药物的研发奠定基础。【方法】72只8周龄BALB/c小鼠随机分为空白组(0.1 mL无菌鸡胚尿囊液)、病毒组(0.1 mL 4×10^(5)PFU/mLH9N2 AIV)、金刚烷胺组(0.1 mL 4×10^(5)PFU/mLH9N2 AIV+100×10^(-6)99%金刚烷胺)、苦参碱高浓度治疗组(0.1 mL 4×10^(5)PFU/mLH9N2 AIV+40 mL·kg^(-1)苦参碱)、中浓度治疗组(0.1 mL 4×10^(5)PFU/mLH9N2 AIV+20 mL·kg^(-1)苦参碱)和低浓度治疗组(0.1 mL 4×10^(5)PFU/mLH9N2 AIV+10 mL·kg^(-1)苦参碱),每组12只,含病毒鸡胚尿囊液滴鼻构建小鼠病毒性肺炎模型,灌服或饮水给药治疗连续5 d,试验共进行7 d,观察不同组小鼠的体重变化。在第1、3、5、7天分别取3只小鼠无菌采血并处死,取小鼠肺组织进行病理组织学观察,RT-PCR检测小鼠肺组织中H9N2 NA、NLRP3 NLR基因表达情况,Western Blot检测苦参碱治疗后H9N2感染小鼠肺组织NLRP3炎性体信号通路相关蛋白表达量的变化,小鼠血清用ELISA法测定细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-10表达量的变化。【结果】与病毒组相比,苦参碱高浓度治疗组病理组织学观察中H9N2 AIV感染小鼠肺部水肿的区域明显减少,红细胞渗出减少,炎性细胞数量减少,效果接近金刚烷胺组。7 d时苦参碱高浓度治疗组小鼠肺泡壁完好,肺泡之间分界清楚,肺组织内炎性细胞、浆细胞数量大量减少,与空白组无异;苦参碱中浓度治疗组肺组织少量出血,肺泡内无渗出液,肺泡间隔完好;苦参碱低浓度治疗组可见肺泡内红细胞渗出,大量浆细胞募集,肺泡之间出现融合现象。经过苦参碱和金刚烷胺治疗的各组小鼠肺组织中H9N2病毒基因表达量在3、5和7 d极显著降低(P<0.01)。经治疗3、5 d时,苦参碱高浓度治疗组和金刚烷胺组的NLRP3基因和蛋白表达量、TNF-α、IL-1β蛋白表达量极显著降低(P<0.01);7 d时,苦参碱高、中、低治疗组小鼠肺组织中NLRP3基因表达量极显著降低(P<0.01);5 d时苦参碱低浓度治疗组NLRP3蛋白、Caspase-1蛋白和中浓度组Caspase-1蛋白表达量显著降低(P<0.05);3 d、5 d时苦参碱中、低浓度治疗组TNF-α和IL-1β蛋白表达量极显著降低(P<0.01),苦参碱中浓度治疗组IL-10表达量极显著降低。【结论】苦参碱可在体内抑制H9N2 AIV的表达,通过下调NLRP3炎性体信号通路相关蛋白,下调TNF-α、IL-1β和IL-10的表达,减轻炎症反应,有良好的抗病毒、抗炎作用。 展开更多
关键词 苦参碱 h9n2 aiv NLRP3炎性体信号通路
下载PDF
抗H9N2 AIV HA单克隆抗体的制备及其在胶体金层析检测中的初步应用 被引量:3
2
作者 詹爱军 王新卫 +2 位作者 陈枝楠 卢体康 花群义 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2008年第9期123-126,共4页
用基因疫苗pcDNA-H9和纯化H9N2亚型AIV免疫Balb/C小鼠,细胞融合后用HI和ELISA方法筛选出5株抗H9亚型AIV HA的特异性单克隆抗体H9-01(2E6),H9-02(3B1),H9-03(3H11),H9-04(1A4),H9-05(2G9)。各株单抗亚型测定的结果为H9-01,H9-02和H9-05均... 用基因疫苗pcDNA-H9和纯化H9N2亚型AIV免疫Balb/C小鼠,细胞融合后用HI和ELISA方法筛选出5株抗H9亚型AIV HA的特异性单克隆抗体H9-01(2E6),H9-02(3B1),H9-03(3H11),H9-04(1A4),H9-05(2G9)。各株单抗亚型测定的结果为H9-01,H9-02和H9-05均为IgG2b,H9-03为IgG1,H9-04为IgG2a,轻链的亚型均为kappa链。经特异性和与同型病毒的反应谱检测,它们均是HA特异性单克隆抗体。用制备的抗H9亚型AIV HA的单克隆抗体做成胶体金层析检测试纸条,可以检测到200个EID50的H9亚型AIV,为监测该亚型AIV试剂盒的进一步商品化奠定了基础。 展开更多
关键词 h9n2亚型aiv 单克隆抗体 胶体金层析检测
下载PDF
10株不同年代H9N2 AIV NA基因的克隆及序列分析 被引量:2
3
作者 杨大光 王新卫 +1 位作者 王泽霖 周欣 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2008年第6期58-63,共6页
利用RT-PCR技术克隆了10株涵盖不同分离年代和不同毒力的H9N2亚型AIV的NA基因,序列分析表明,10株AIV的NA基因的核苷酸和推导的氨基酸同源性高,进化稳定。系统进化树分析表明,其NA基因都属欧亚大陆禽分支,H9N2流感病毒的分布与地域有相... 利用RT-PCR技术克隆了10株涵盖不同分离年代和不同毒力的H9N2亚型AIV的NA基因,序列分析表明,10株AIV的NA基因的核苷酸和推导的氨基酸同源性高,进化稳定。系统进化树分析表明,其NA基因都属欧亚大陆禽分支,H9N2流感病毒的分布与地域有相关性。其NA蛋白氨基酸序列潜在的糖基化位点以及氨基酸红细胞吸附位点出现的变化尚不能解释这些毒株生物学特性上的差别。但这些研究结果从理论上丰富了H9N2亚型禽流感的分子流行病学,也为进一步研究该类毒株的进化提供了依据。 展开更多
关键词 h9n2 aiv NA基因 克隆 序列分析
下载PDF
HH9N2 AIV对小鼠肠道菌群结构及黏膜屏障功能的影响研究 被引量:4
4
作者 谢青梅 陆浩然 +1 位作者 张露萱 陈义虎 《中国家禽》 北大核心 2017年第20期18-22,共5页
为研究H9N2亚型禽流感病毒(H9N2 AIV)继发细菌感染的作用机制,以BALB/c小鼠为模型,研究呼吸道感染H9N2 AIV后,宿主肠道菌群结构、黏膜屏障、黏膜炎症反应等情况。结果显示:H9N2 AIV经呼吸道感染BALB/c小鼠后,小鼠肠道菌群紊乱。攻毒后... 为研究H9N2亚型禽流感病毒(H9N2 AIV)继发细菌感染的作用机制,以BALB/c小鼠为模型,研究呼吸道感染H9N2 AIV后,宿主肠道菌群结构、黏膜屏障、黏膜炎症反应等情况。结果显示:H9N2 AIV经呼吸道感染BALB/c小鼠后,小鼠肠道菌群紊乱。攻毒后小鼠体内的葡萄球菌属、链球菌属和棒状杆菌属极显著增加(P<0.01),而有益菌为主的乳杆菌属等极显著降低(P<0.01);H9N2 AIV感染小鼠后,肠道黏膜屏障被破坏,促炎因子IFN-γ、IFN-β等极显著高表达(P<0.01),上皮细胞中的ZO-1等紧密连接蛋白则明显下调(P<0.05),造成肠壁通透性增强。研究表明小鼠感染H9N2 AIV后,其肠道微生物菌群失衡、黏膜屏障功能被破坏、出现炎症反应等。 展开更多
关键词 h9n2aiv 小鼠 肠道菌群 黏膜屏障功能
下载PDF
Maternal-derived antibodies hinder the antibody response to H9N2 AIV inactivated vaccine in the field
5
作者 Xue Pan Xin Su +10 位作者 Pingyun Ding Jinhua Zhao Hongrui Cui Dawei Yan Qiaoyang Teng Xuesong Li Nancy Beerens Haitao Zhang Qinfang Liu Mart C.M.de Jong Zejun Li 《Animal Diseases》 2022年第2期109-117,共9页
The H9N2 subtype avian influenza virus(AIV)inactivated vaccine has been used extensively in poultry farms,but it often fails to stimulate a sufficiently high immune response in poultry in the field,although it works w... The H9N2 subtype avian influenza virus(AIV)inactivated vaccine has been used extensively in poultry farms,but it often fails to stimulate a sufficiently high immune response in poultry in the field,although it works well in laboratory experiments;hence,the virus still causes economic damage every year and poses a potential threat to public health.Based on surveillance data collected in the field,we found that broilers with high levels of maternal-derived antibodies(MDAs)against H9N2 virus did not produce high levels of antibodies after vaccination with a commercial H9N2 inactivated vaccine.In contrast,specific pathogen-free(SPF)chickens without MDAs responded efficiently to that vaccination.When MDAs were mimicked by administering passively transferred antibodies(PTAs)into SPF chickens in the laboratory,similar results were observed:H9N2-specific PTAs inhibited humoral immunity against the H9N2 inactivated vaccine,suggesting that H9N2-specific MDAs might hinder the generation of antibodies when H9N2 inactivated vaccine was used.After challenge with homologous H9N2 virus,the virus was detected in oropharyngeal swabs of the vaccinated and unvaccinated chickens with PTAs but not in the vaccinated chickens without PTAs,indicating that H9N2-specific MDAs were indeed one of the reasons for H9N2 inactivated vaccine failure in the field.When different titers of PTAs were used to mimic MDAs in SPF chickens,high(HI=12 log2)and medium(HI=log 9 log2)titers of PTAs reduced the generation of H9N2-specific antibodies after the first vaccination,but a booster dose would induce a high and faster humoral immune response even of PTA interference.This study strongly suggested that high or medium titers of MDAs might explain H9N2 inactivated vaccine failure in the field. 展开更多
关键词 Maternal-derived antibodies(MDAs) Passively transferred antibodies(PTAs) Humoral immune response Vaccination failure h9n2 avian influenza virus(aiv)
下载PDF
广西H9N2亚型禽流感病毒疫苗候选株的筛选
6
作者 李孟 谢芝勋 +7 位作者 李丹 徐倩 罗思思 张民秀 谢丽基 黄超 沈前程 黄娇玲 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期243-252,共10页
【目的】筛选出免疫原性更优的H9N2亚型禽流感病毒(AIV)疫苗候选株用于新型疫苗研发,为加强对H9N2亚型AIV的防控提供技术支持。【方法】以2000—2020年广西地区分离获得的36株H9N2亚型AIV分离株为试验材料,依据HA基因遗传进化分析选择1... 【目的】筛选出免疫原性更优的H9N2亚型禽流感病毒(AIV)疫苗候选株用于新型疫苗研发,为加强对H9N2亚型AIV的防控提供技术支持。【方法】以2000—2020年广西地区分离获得的36株H9N2亚型AIV分离株为试验材料,依据HA基因遗传进化分析选择12株不同年份、不同地域及不同宿主来源的H9N2亚型AIV代表株,与目前使用的商品化H9亚型AIV疫苗株(SS株)进行交叉血凝抑制试验(HI)及抗原性分析,根据抗原分析结果选择其中具有不同抗原差异的代表株制备油乳剂灭活疫苗,并分别与商品化H9亚型AIV疫苗(SS株)进行交叉免疫保护试验。【结果】在36株H9N2亚型AIV广西分离株中有31株属于Y280-Like(9.4.1),其中26株属于分支I、5株属于分支II,另外5株属于G1-Like(h9.4.1),与我国常用疫苗株分属于不同进化分支。12株H9N2亚型AIV广西代表性分离株灭活后的HA效价≥7 log2,病毒灭活效果良好,可用于制备油乳剂灭活疫苗,且制备的油乳剂灭活疫苗稳定性和安全性良好。根据交互HI抗体滴度计算出各毒株间的抗原相关值(R),结果发现A/chicken/Guangxi/C227/2015(H9N2)株(简称C227株)与其他毒株的抗原性无明显差异,对应的R在0.72~0.93间波动;疫苗交叉保护试验结果也表明,C227株制备的油乳剂灭活疫苗对不同毒株的免疫保护率均高于80%,且免疫保护效果优于A/chicken/Guangxi/CX/2013(H9N2)株(简称CX13株),说明C227株更适合作为H9N2亚型AIV灭活疫苗的候选株。【结论】基于抗原性分析和免疫原性测定筛选出的A/chicken/Guangxi/C227/2015(H9N2)株对广西地区绝大部分H9N2亚型AIV流行株的免疫保护效果良好,可作为疫苗候选株用于研制新型H9N2亚型AIV疫苗。 展开更多
关键词 禽流感病毒(aiv) h9n2亚型 油乳灭活疫苗 抗原相关性 疫苗交叉保护
下载PDF
空心莲子草乙酸乙酯部位体内外抗H9N2亚型禽流感病毒活性的研究
7
作者 廖思雨 郑新 +4 位作者 戴琪 许诗怡 张天旭 张秀桥 桂春 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期759-769,共11页
[目的]探究空心莲子草乙酸乙酯部位(ethyl acetate extract from Alternanthera philoxeroides,AETAC)体内外抗H9N2亚型禽流感病毒(H9N2 subtype Avian influenza virus, AIV-H9N2)活性及其作用机制。[方法]利用CCK-8法检测不同浓度AETA... [目的]探究空心莲子草乙酸乙酯部位(ethyl acetate extract from Alternanthera philoxeroides,AETAC)体内外抗H9N2亚型禽流感病毒(H9N2 subtype Avian influenza virus, AIV-H9N2)活性及其作用机制。[方法]利用CCK-8法检测不同浓度AETAC作用不同时间对鸡胚成纤维细胞(DF-1)的抑制作用,通过预防感染、影响复制、阻止吸附及直接杀灭4种方式作用后检测AETAC对DF-1细胞的毒性,选择体外最佳抗AIV-H9N2作用方式。尿囊腔接种不同浓度AETAC确定其对鸡胚的最大安全浓度;将AETAC以3种不同给药方式作用于AIV-H9N2感染后鸡胚,选择体内最佳给药方式。经尿囊腔同时接种AETAC和AIV-H9N2,统计各组鸡胚存活数,测定血凝效价,并观察胚胎的发育情况和鸡胚法氏囊病理组织变化。[结果]在一定范围内,随着AETAC浓度升高或作用时间延长,AETAC对DF-1细胞的抑制率升高。与空白对照组相比,4种抗AIV-H9N2作用方式下,病毒对照组和药物组细胞存活率均显著降低(P<0.05);与病毒对照组相比,AETAC浓度为5~30μg/mL时,4种抗AIV-H9N2作用方式下,药物组细胞存活率均显著升高(P<0.05)。4种作用方式下,DF-1细胞存活率分别为8.15%~64.96%(预防感染)、8.56%~83.83%(影响复制)、1.82%~5.90%(阻止吸附)和6.90%~40.12%(直接杀灭)。AETAC对鸡胚的最大安全浓度为16.41 mg/mL,对感染鸡胚的最佳给药方式为AETAC和病毒混合后接种。以最佳体内作用方式给药后,AETAC中、低浓度组鸡胚存活率为40%~60%,高浓度组鸡胚全部存活,胚胎喙部发育明显,鸡胚法氏囊淋巴滤泡发育完整,滤泡大小和数量正常,充血量少,组织病理状态改善。[结论]AETAC在体内外对AIV-H9N2均具有显著的抑制作用,且主要与影响病毒复制作用方式相关。 展开更多
关键词 空心莲子草乙酸乙酯部位(AETAC) h9n2亚型禽流感病毒(aiv-h9n2) DF-1细胞 鸡胚
下载PDF
H9N2亚型禽流感病毒M1和NA基因在昆虫细胞中的表达
8
作者 王粲 张民秀 +6 位作者 谢芝勋 李孟 罗思思 李丹 阮志华 谢丽基 谢志勤 《中国动物检疫》 CAS 2024年第4期103-110,共8页
为通过昆虫细胞表达出H9N2亚型禽流感病毒M1和NA蛋白,并鉴定其免疫活性,利用PCR技术扩增H9N2亚型禽流感病毒M1和NA基因,以pFastBacDual为转移载体构建重组转移载体pFastBacDual-M1和pFastBacDual-NA;将阳性重组转移载体分别转化至DH10Ba... 为通过昆虫细胞表达出H9N2亚型禽流感病毒M1和NA蛋白,并鉴定其免疫活性,利用PCR技术扩增H9N2亚型禽流感病毒M1和NA基因,以pFastBacDual为转移载体构建重组转移载体pFastBacDual-M1和pFastBacDual-NA;将阳性重组转移载体分别转化至DH10Bac感受态细胞,得到重组杆粒rBacmid-M1和rBacmid-NA;将重组杆粒分别转染Sf9昆虫细胞,获得含M1和NA基因的重组杆状病毒rBV-M1和rBV-NA;运用IFA和Western-blot鉴定M1和NA蛋白的表达情况,同时以NA蛋白为包被抗原,运用间接ELISA方法鉴定NA蛋白的反应活性。结果显示,IFA鉴定均出现特异性绿色荧光,Western-blot检测M1和NA蛋白大小分别约为28和52 ku,ELISA检测NA蛋白对抗H9N2阳性血清有很高的反应值。结果表明,M1和NA蛋白可在昆虫细胞中特异性表达且具有反应原性。本试验为进一步研发H9N2亚型禽流感诊断技术和疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 禽流感病毒 h9n2亚型 M1蛋白 NA蛋白 Bac-to-Bac杆状病毒表达系统
下载PDF
H9N2亚型AIV全基因序列分析及重组病毒R01/NASS气源性传播的特点 被引量:1
9
作者 魏宝之 杨燕 +2 位作者 胡家卿 吕静 柴同杰 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期1099-1108,共10页
为了研究H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)气源性传播的分子机制,本研究以1株2008年山东省分离的H9N2亚型AIV为研究对象,对其全基因组序列进行分子特性和遗传进化分析;利用反向遗传操作技术,对具有气源性传染能力的山东... 为了研究H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)气源性传播的分子机制,本研究以1株2008年山东省分离的H9N2亚型AIV为研究对象,对其全基因组序列进行分子特性和遗传进化分析;利用反向遗传操作技术,对具有气源性传染能力的山东分离株(SD01株)和不具有气源性传染能力的广东分离株(SS94株)进行重组,转染细胞拯救出重组株R01/NASS,对其在鸡群间的气源性传染能力进行测定。对SD01株序列分析表明,SD01株的M、NS、NP和HA基因与HK/G9/97相似性最高,NA、PB1和PB2基因与HK/Y280/97相似性最高,PA基因与SH/F/98相似性最高。病毒在SPF鸡群间传播性试验发现,重组病毒R01/NASS接种鸡群后,可以经直接接触途径传染鸡群,但是却未感染气溶胶被动感染组鸡群,表明NA基因的替换使病毒失去了气源性传染的能力。该试验结果为从分子水平上深入研究SD01株AIV NA蛋白氨基酸位点与气源性传染的关系提供了理论依据。 展开更多
关键词 h9n2亚型aiv 序列分析 反向遗传操作技术 气源性传染
下载PDF
隐绿原酸对H9N2-AIV致小鼠肺损伤的免疫调节和抗氧化效果 被引量:2
10
作者 张昕 张铭 +1 位作者 何宏轩 胡延春 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2022年第1期33-40,共8页
为探讨隐绿原酸(4-CQA)对感染H9N2亚型禽流感(H9N2-AIV)病毒的小鼠造成肺损伤的修复作用,将90只6~8周龄健康昆明系小鼠随机分为病毒(H9N2)感染组、H9N2+4-CQA组、空白对照组、4-CQA对照组,用H9N2-AIV滴鼻复制小鼠肺损伤模型并灌胃4-CQA... 为探讨隐绿原酸(4-CQA)对感染H9N2亚型禽流感(H9N2-AIV)病毒的小鼠造成肺损伤的修复作用,将90只6~8周龄健康昆明系小鼠随机分为病毒(H9N2)感染组、H9N2+4-CQA组、空白对照组、4-CQA对照组,用H9N2-AIV滴鼻复制小鼠肺损伤模型并灌胃4-CQA干预。观察各组小鼠肺组织病理学变化;测定肺指数及肺内丙二醛(MDA)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、髓过氧化物酶(MPO)含量;测定脾内T淋巴细胞亚群CD4^(+)、CD8^(+)百分比及比率(CD4^(+)/CD8^(+))。结果显示,H9N2组小鼠表现出精神沉郁、呼吸急促;肺指数上升、脾指数下降;肺组织病理学表现为肺泡萎缩、肺泡隔增厚、局部肺实变;T淋巴细胞亚群CD4^(+)/CD8^(+)比率显著下降(P<0.05);肺内T-SOD活性显著下降、MDA含量显著增加、MPO活性显著升高(P<0.05)。4-CQA干预后,小鼠肺指数下降、脾指数上升;肺组织病理学损伤减轻;T淋巴细胞亚群CD4^(+)/CD8^(+)比率显著上升(P<0.05);肺内T-SOD活性显著升高,MDA含量显著降低,MPO活性显著下降(P<0.05)。得出4-CQA可通过维持机体免疫平衡、降低机体氧化损伤来缓解由H9N2亚型AIV诱导的小鼠肺损伤。 展开更多
关键词 h9n2亚型禽流感病毒 隐绿原酸 肺损伤 免疫调节 抗氧化
下载PDF
In vivo Inhibition of NAS Preparation on H9N2 Subtype AIV 被引量:1
11
作者 Ruo-feng SHANG Jian-ping LIANG +6 位作者 Zhong-yuan NA Hong-jun YANG YU LU Lan-ying HUA Wen-zhu GUO Ying CUI Ling WANG 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2010年第2期145-150,共6页
NAS preparation, a kind of Chinese herbal medicine found by the Yunnan Eco-agricultural Research Institute, has potential antiviral activity. In this paper, the inhibiting effect of NAS preparation on H9N2 subtype Avi... NAS preparation, a kind of Chinese herbal medicine found by the Yunnan Eco-agricultural Research Institute, has potential antiviral activity. In this paper, the inhibiting effect of NAS preparation on H9N2 subtype Avian influenza virus (AIV) was investigated in vivo. Chickens infected with H9N2 virus were treated with NAS preparation for 4 days. The virus was then detected by hemoagglutination (HA) test and reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR). The results showed that no H9N2 virus could be detected at the 7th day when the chickens were treated with 0.2g/kg/d or 0.1g/kg/d of NAS preparation. However the virus could be detected in other chickens without NAS preparation treatment. This result suggested that NAS preparation may be a potential drug candidate to control infection of H9N2 subtype AIV in chickens. 展开更多
关键词 h9n2亚型禽流感病毒 NAS 体内 逆转录聚合酶链反应 制备 病毒感染 农业研究所 抗病毒活性
下载PDF
波形蛋白对H9N2亚型AIV复制的影响研究
12
作者 卢安然 殷贵虎 +4 位作者 黄翔宇 黄静雯 胡嘉宁 蔡怡秦 冯秀丽 《畜牧与兽医》 北大核心 2022年第4期93-101,共9页
为研究波形蛋白(vimentin)对H9N2亚型禽流感病毒(AIV)复制的影响,构建了真核表达载体FLAG-vimentin,并采用Western blot技术验证FLAG-vimentin重组载体和病毒NP蛋白的表达情况,用荧光定量PCR技术检测病毒HA基因水平。同时,设计合成siRNA... 为研究波形蛋白(vimentin)对H9N2亚型禽流感病毒(AIV)复制的影响,构建了真核表达载体FLAG-vimentin,并采用Western blot技术验证FLAG-vimentin重组载体和病毒NP蛋白的表达情况,用荧光定量PCR技术检测病毒HA基因水平。同时,设计合成siRNA,敲低内源性vimentin,检测其对病毒HA基因表达水平的影响。构建原核表达载pCold I-vimentin,蛋白纯化后孵育细胞,采用Western blot、荧光定量PCR技术检测病毒的蛋白表达和基因水平的变化。结果证实,H9N2亚型AIV感染FLAG-vimentin重组载体转染的Hela细胞12 h时,病毒NP蛋白表达减少;而在感染24和36 h时,病毒NP蛋白表达上升。荧光定量PCR结果亦显示,在AIV感染后12 h时,HA基因表达水平明显降低。siRNA敲低Hela细胞内源性vimentin后,H9N2亚型AIV的HA基因表达水平在病毒感染12 h时明显升高,24 h时差异较小,36 h时有所升高。纯化后的vimentin重组蛋白孵育细胞,在病毒感染36 h时,H9N2亚型AIV的NP蛋白表达显著被抑制。荧光定量PCR结果亦证实病毒HA基因在AIV感染后36 h时表达水平明显降低。上述结果表明,H9N2亚型AIV在人源Hela细胞上的早期复制中,vimentin能起到一定程度上的抑制作用,且其重组表达蛋白孵育细胞能够阻断H9N2亚型AIV对细胞的感染,为深入研究vimentin抗病毒复制的机制提供了重要的试验依据,同时为开展抗H9N2亚型AIV的药物研发提供了参考。 展开更多
关键词 波形蛋白 h9n2亚型aiv 重组蛋白表达 病毒基因表达 小干扰RNA
下载PDF
血凝素蛋白145位潜在糖基化位点对H9N2禽流感病毒生物学特性的影响
13
作者 王娅娟 王飞 +5 位作者 吴锦森 万志敏 邵红霞 钱琨 叶建强 秦爱建 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第5期1-6,共6页
从某肉鸡场分离的A/Chicken/Jiangxi/106/2012(H9N2)(JX106)毒株,其HA蛋白在145位氨基酸由S突变为N,使得在该处增加了一个潜在的糖基化位点NGT。本研究以JX106为研究对象,通过反向遗传操作获得重组病毒rgJX106-HA145N和rgJX106-HA145S... 从某肉鸡场分离的A/Chicken/Jiangxi/106/2012(H9N2)(JX106)毒株,其HA蛋白在145位氨基酸由S突变为N,使得在该处增加了一个潜在的糖基化位点NGT。本研究以JX106为研究对象,通过反向遗传操作获得重组病毒rgJX106-HA145N和rgJX106-HA145S。利用不同方法探究了HA蛋白145位糖基化位点对病毒的毒力、复制、受体亲和力和致病性等方面的影响。研究发现,rgJX106-HA145N和rgJX106-HA145S在A549细胞上的复制、对鸡胚的感染力无明显差异,而HA蛋白145位无糖基化位点的rgJX106-HA145S与α2,6-唾液酸受体的亲和力更强,在小鼠肺脏中复制更快、致病力更强且能产生更高的交叉HI效价,这一结果提示流感病毒血凝素的糖基化对病毒诱导的体液免疫具有重要影响。 展开更多
关键词 h9n2aiv 潜在糖基化位点 病毒拯救 致病性
下载PDF
商品疫苗对我国h9.4.2.5分支H9N2亚型禽流感分离株的免疫保护
14
作者 麻琦 和新文 +15 位作者 王燕 刘艳晶 潘舒心 侯玉杰 施建忠 邓国华 包红梅 刘景利 郭兴福 毛胜刚 胡井雷 路通 杨帆 田国彬 曾显营 陈化兰 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第15期3040-3050,共11页
【目的】我国批准使用的H9亚型禽流感(avian influenza,AI)商品化灭活疫苗种类繁多,其免疫效果和选用受到养殖者的广泛关注。通过评估不同商品疫苗对我国近期H9N2亚型AIV的免疫保护效果,以期为H9亚型AIV的免疫防控提供科学参考。【方法... 【目的】我国批准使用的H9亚型禽流感(avian influenza,AI)商品化灭活疫苗种类繁多,其免疫效果和选用受到养殖者的广泛关注。通过评估不同商品疫苗对我国近期H9N2亚型AIV的免疫保护效果,以期为H9亚型AIV的免疫防控提供科学参考。【方法】依据国家兽药基础数据库疫苗批签发数据,从在售的40种H9亚型AI商品疫苗中选择批签发数量较多的4种疫苗(A—D疫苗),进行免疫攻毒试验。4株h9.4.2.5分支的H9N2亚型分离株CK/XJ/S1204/2015、DK/JX/S4512/2017、CK/YN/S1666/2020和CK/NX/S4590/2020为攻毒毒株,分别测定4株病毒的鸡胚半数感染量(EID_(50))、鸡半数感染量(CID50)和细胞半数感染量(TCID50),以确定动物试验的攻毒剂量和细胞试验的感染剂量。每种疫苗以产品推荐剂量免疫3周龄SPF鸡各40只,同时设同日龄SPF鸡40只接种PBS作为对照组;免疫3周时,采集所有试验鸡血清,测定血凝抑制抗体(HI)和中和抗体(NT)滴度;同时将每种商品疫苗接种40只SPF鸡进行随机分组,每组10只,连同10只对照组鸡,以10 CID50的剂量鼻腔感染H9N2亚型分离株,分别进行商品疫苗对4株病毒的攻毒保护试验。采集攻毒后3、5 d喉头及泄殖腔棉拭子样品,接种10日龄鸡胚检测排毒情况,统计疫苗保护率,比较疫苗对H9N2亚型分离株的免疫保护效果。【结果】4株H9N2亚型分离株的CID50依次为10^(3.5)、10^(2.5)、10^(2.5)和10^(3.5)EID_(50)/0.1 mL。商品疫苗接种后3周,各免疫组SPF鸡血清中针对商品化H9亚型HI试验抗原(CK/SH/10/2001)的HI抗体均在9.4 log_(2)—11 log_(2)之间,但针对攻毒株的HI抗体平均效价在4.6 log_(2)—10.8 log_(2)之间,不同疫苗免疫组间存在较大差异,最大差异为64倍,各免疫组NT抗体平均效价在6.7 log_(2)—12.2 log_(2)之间,最大差异为32倍,对照组鸡的HI抗体和NT抗体均为阴性。以滴鼻方式感染不同H9病毒后,4种疫苗的免疫保护效果存在较大差别,在攻击CK/XJ/S1204/2015毒株的试验中,3种疫苗(B—D疫苗)能为免疫鸡提供80%以上保护;在攻击DK/JX/S4512/2017毒株试验中,仅1种疫苗(B疫苗)能为免疫鸡提供80%以上保护;在攻击CK/YN/S1666/2020毒株的试验中,2种疫苗(A和B疫苗)能为免疫鸡提供80%以上免疫保护;而攻击CK/NX/S4590/2020毒株,4种疫苗免疫鸡的保护率均低于80%,而同期各对照组鸡均排毒,排毒率均高于80%。【结论】不同商品疫苗预防近期H9亚型分离株感染的免疫保护效果存在较大差异,疫苗抗原与分离株之间的抗原性差异是免疫保护率降低的主要原因;使用H9N2亚型流行毒株测定免疫后的HI抗体和NT抗体可作为评价商品疫苗免疫保护效果的重要依据。本研究为商品H9疫苗的科学选用提供重要参考。 展开更多
关键词 h9n2亚型 aiv 商品疫苗 免疫效果 禽流感
下载PDF
利用8质粒系统拯救A/Chicken/Shanghai/F/98(H9N2)株禽流感病毒 被引量:10
15
作者 石火英 卢建红 +3 位作者 陈素娟 孙蕾 刘秀梵 刘玉良 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期373-376,共4页
应用反向遗传技术将含有1998年中国大陆分离株H9N2亚型禽流感病毒(Avianinfluenzavirus,AIV)的8个基因片段的质粒共转染COS_1细胞,产生了与野生病毒生物学特性相同的H9N2亚型AIV。将A Chicken Shanghai F 98(CK SH F 98)株H9N2亚型AIV的... 应用反向遗传技术将含有1998年中国大陆分离株H9N2亚型禽流感病毒(Avianinfluenzavirus,AIV)的8个基因片段的质粒共转染COS_1细胞,产生了与野生病毒生物学特性相同的H9N2亚型AIV。将A Chicken Shanghai F 98(CK SH F 98)株H9N2亚型AIV的8个基因组cDNA分别克隆到polⅠ_polⅡ转录 表达载体pHW2 0 0 0中,构建成8个转录表达载体重组质粒。将这8个质粒共转染COS_1细胞,2 4h后收获细胞及上清接种SPF鸡胚,4 8h后收取鸡胚尿囊液继续进行鸡胚传代,产生能致死鸡胚的病毒。经血凝、血凝抑制试验、序列分析和电镜观察,证实产生了CK SH F 98(H9N2 )株AIV。 展开更多
关键词 反向遗传技术 h9n2亚型aiv 质粒 转染
下载PDF
3株H9N2亚型禽流感病毒广西分离株全基因组序列的测定与分析 被引量:9
16
作者 谢芝勋 董建宝 +4 位作者 唐小飞 刘加波 庞耀珊 邓显文 谢志勤 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期916-922,926,共8页
目的对3株H9N2亚型禽流感病毒进行全基因序列的测定与分析。方法根据GenBank公布的H9N2亚型禽流感病毒(AIV)的全基因序列,设计了8对引物,运用RT-PCR方法获取了3株H9N2亚型AIV广西地方分离株A/Chick-en/Guangxi/1/00、A/Chicken/Guangxi/... 目的对3株H9N2亚型禽流感病毒进行全基因序列的测定与分析。方法根据GenBank公布的H9N2亚型禽流感病毒(AIV)的全基因序列,设计了8对引物,运用RT-PCR方法获取了3株H9N2亚型AIV广西地方分离株A/Chick-en/Guangxi/1/00、A/Chicken/Guangxi/14/00和A/Chicken/Guangxi/17/00的全基因序列,并对所得序列进行了比较分析。结果同源性分析及遗传进化分析发现,所分离的3个毒株的各基因与A/Chicken/Guangdong/4/00和A/Chicken/Jiangsu/1/00的相应基因的核苷酸序列有着较高的同源性和较近的亲缘关系,可能起源于同一种系。所分离毒株中每个毒株的8个基因,在遗传进化树上的分支不具有统一性,说明此3个毒株可能为不同基因亚系间发生自然重排的产物。氨基酸序列比较发现,A/Chicken/Guangxi/1/00、A/Chicken/Guangxi/14/00和A/Chicken/Guangxi/17/003株AIV的na基因核苷酸序列在开放性阅读框架的187~195位均缺失了ACAGAGATA共9个核苷酸,它们所编码的氨基酸为T、E、I。3个分离株的HA蛋白第226位氨基酸均为Gln,证明它们为人类非易感性的H9N2亚型AIV。结论此3株H9N2亚型流感病毒为基因自然重排的产物,其na基因均存在缺失,且从分子水平上证明它们对人类不具有易感性。 展开更多
关键词 禽流感 h9n2亚型 全基因组 测定与分析
下载PDF
广西野鸟H9N2亚型流感病毒的分离与鉴定 被引量:3
17
作者 黄胜斌 蒋家霞 +4 位作者 何奇松 付薇 孙翔翔 马琳 熊毅 《南方农业学报》 CAS CSCD 2011年第5期539-543,共5页
【目的】探讨H9N2亚型流感病毒在野鸟中的存在与传播,为广西流感疫情动态监测和防控及人流感预防监测提供重要依据。【方法】采集广西野鸟肺脏组织,将病料接种于9~11日龄SPF鸡胚尿囊腔进行分离培养,血清学试验鉴定HA和NA亚型,并克隆扩增... 【目的】探讨H9N2亚型流感病毒在野鸟中的存在与传播,为广西流感疫情动态监测和防控及人流感预防监测提供重要依据。【方法】采集广西野鸟肺脏组织,将病料接种于9~11日龄SPF鸡胚尿囊腔进行分离培养,血清学试验鉴定HA和NA亚型,并克隆扩增其HA和NA基因。【结果】该分离株能被H9亚型阳性血清抑制,神经氨酸酶抑制(NI)试验结果将其鉴定为N2亚型,判断该病毒属于H9N2亚型流感病毒,命名为A/wildbird/Guangxi/H2/07,对HA和NA基因进行序列分析,发现与流感病毒H9亚型和N2亚型同源性最高,分别达到82.4%~99.0%和83.1%~99.9%。【结论】H9N2亚型流感病毒已在广西野鸟中存在,该结论为广西流感疫情动态监测和防控提供了重要依据。 展开更多
关键词 野鸟 h9n2亚型流感病毒 分离 鉴定 HA基因 NA基因 广西
下载PDF
H9N2亚型禽流感病毒抗原性变异的研究 被引量:5
18
作者 葛菲菲 刘健 +3 位作者 杨德全 李鑫 鞠厚斌 周锦萍 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2015年第5期10-14,共5页
为了解不同年分离的H9N2亚型禽流感病毒(Avian infl uenza virus,AIV)之间的抗原相关性,挑选2002年、2006~2014年在上海市分离的14株H9N2亚型禽流感病毒,通过血凝抑制(hemagglutination inhibition,HI)交叉试验进行抗原性比较和分... 为了解不同年分离的H9N2亚型禽流感病毒(Avian infl uenza virus,AIV)之间的抗原相关性,挑选2002年、2006~2014年在上海市分离的14株H9N2亚型禽流感病毒,通过血凝抑制(hemagglutination inhibition,HI)交叉试验进行抗原性比较和分析。HI试验结果显示,2002年,2006~2014年这14株H9N2亚型AIV不同毒株间已经发生了抗原漂移,划分成4个不同的抗原群,A/Chicken/Shanghai/Y1/2002和A/Chicken/Shanghai/Y1/2006归为一个抗原群,A/Chicken/Shanghai/C/2011独自成为一个抗原群,A/Pigeon/Shanghai/JC1/2013、A/Chicken/Shanghai/1107/2013归为同一个抗原群,其余毒株均为一个抗原群。综上所述,随着时间的推移,H9N2 AIV抗原发生了不同程度的漂变,但是也存在在某个时间段多种抗原群共存的情况。该研究结果从理论上为上海市制定禽流感防控策略,有效防制H9N2 AIV流行提供了科学的指导,为生产H9N2亚型流感免疫与疫苗候选毒株的选择提供参考依据。 展开更多
关键词 h9n2亚型禽流感病毒 交叉HI试验 抗原漂移
下载PDF
一株H9N2亚型禽流感病毒分离株的生物学特性研究及其全基因组序列分析 被引量:6
19
作者 刘海玲 胡自立 罗开健 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第9期22-26,共5页
本试验对1株2010年从广东省分离的H9N2亚型禽流感病毒A/chicken/Guangdong/QY/2010(H9N2)的生物学特性进行研究并对其全基因组序列进行分析。结果显示,该毒株的鸡胚半数感染量EID50为10-9/0.1mL,鸡胚最小致死量的平均死亡时间MDT为104h... 本试验对1株2010年从广东省分离的H9N2亚型禽流感病毒A/chicken/Guangdong/QY/2010(H9N2)的生物学特性进行研究并对其全基因组序列进行分析。结果显示,该毒株的鸡胚半数感染量EID50为10-9/0.1mL,鸡胚最小致死量的平均死亡时间MDT为104h,脑内致病指数ICPI值为0.51,静脉致病指数IVPI为0。用RT-PCR方法扩增病毒的基因组各片段,将扩增片段进行克隆、测序并进行序列分析。结果显示,该毒株的HA基因与Ck/HK/G9/97和Dk/HK/Y280/97在同一分支上,HA的裂解位点为PARSSR↓GLF,有8个潜在糖基化位点,226位氨基酸残基为L,较保守的202位受体结合位点由L突变为P,该毒株的HA和NA核苷酸序列与Dk/HK/Y280/97同源性较高,NS、PA、PB1的核苷酸序列均与Ck/SH/F/98同源性较高,NP基因与A/VN/1203/04(H5N1)的核苷酸序列同源性为95.3%。 展开更多
关键词 aiv h9n2亚型 生物学特性 克隆 全基因 序列分析
下载PDF
3种方法纯化兔抗H9N2亚型禽流感病毒血清的比较 被引量:2
20
作者 李芳 王泽雄 +3 位作者 亓文宝 刘海玲 胡自立 罗开健 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第10期211-213,共3页
本试验分别用蛋白G亲和层析法、饱和硫酸铵法和辛酸-硫酸铵法纯化兔抗H9N2亚型禽流感病毒血清,发现蛋白G亲和层析法纯化得到的抗体纯度最高,回收率较低,抗体活性未变,操作简便,但成本较高,适合实验室研究及小量样品的纯化;饱和硫酸铵法... 本试验分别用蛋白G亲和层析法、饱和硫酸铵法和辛酸-硫酸铵法纯化兔抗H9N2亚型禽流感病毒血清,发现蛋白G亲和层析法纯化得到的抗体纯度最高,回收率较低,抗体活性未变,操作简便,但成本较高,适合实验室研究及小量样品的纯化;饱和硫酸铵法纯化得到的抗体纯度较蛋白G亲和层析法低一些,抗体活性不变,可通过多次盐析来提高抗体纯度,多作为蛋白G亲和层析法纯化前的初步纯化;辛酸-硫酸铵法纯化得到的抗体纯度不及前两种方法,回收率较高,抗体活性亦无改变,纯化时对pH的精确性和辛酸的浓度要求较高,多用于样品的粗提和单抗的纯化。 展开更多
关键词 纯化方法 h9n2亚型禽流感病毒 血清
下载PDF
上一页 1 2 4 下一页 到第
使用帮助 返回顶部