山柰酚通过下调NF-κB信号通路减轻猪源甲型H9N2流感病毒所致小鼠急性肺损伤

目的:探讨山柰酚是否通过下调转录因子NF-κB信号通路的表达而保护感染猪源甲型H9N2流感病毒引起急性肺损伤的小鼠。方法:猪源甲型H9N2流感病毒感染BALB/c小鼠建立急性肺损伤模型,山柰酚干预后检测肺湿重与干重比,观察肺组织的病理学变化,检测支气管肺泡灌洗液内炎性细胞数量以及肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素1β(IL-1β)含量同时检测肺组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)和髓过氧化物酶(MPO)活性以及丙二醛(MDA)含量,Western blot检测小鼠肺内NF-κB P65的表达,ELISA检测小鼠肺组织匀浆细胞核提取物中NF-κB P65和NF-κB P50的核转位。结果:山柰酚能降低小鼠死亡率,改善肺组织的病理学变化和肺水肿程度,并能降低肺内巨噬细胞、淋巴细胞和中性粒细胞等炎性细胞的数量同时降低TNF-α、IL-6、IL-1β和MDA的含量,抑制MPO的活性并升高SOD的活性。另外,山柰酚可以下调NF-κB P65的表达增加细胞核提取物中NF-κB P65和NF-κB P50的核转位。结论:山柰酚通过下调NF-κB信号通路的表达从而降低猪源甲型H9N2流感病毒所致急性肺损伤小鼠的炎症程度和氧化应激损伤,最终减轻流感病毒所致的急性肺损伤。

人参皂苷Rb1对H9N2流感病毒诱导急性肺损伤小鼠抗氧化酶的影响

目的 探讨人参皂苷Rb1（G-Rb1）对肺损伤小鼠抗氧化酶活力的影响.方法 将195只6～8周龄BALB/c小鼠随机分为对照组、肺损伤模型组（ALI组）、人参皂苷Rb1组（G-Rb1组）,每组65只.ALI与G-Rb1组采用100 μL SI A/swine/HeBei/012/2008/猪流感病毒（H9N2 SIV）经鼻腔接种建立急性肺损伤模型,同时G-Rb1组腹腔注射人参皂苷Rb1液0.1 mL,剂量为10 mg/（kg·bw）,连续7d;对照组鼻腔接种相同剂量生理盐水稀释的正常鸡胚尿囊液.观察临床症状、肺病理组织学变化,计算小鼠肺湿干重比、肺系数,检测小鼠肺组织T-SOD、MPO、CAT、GSH-PX活力.结果 从第2天末开始ALI组大部分小鼠出现高度的精神沉郁,呼吸极度困难,采食量明显减少,体重下降.肺部明显水肿、淤血和出血,炎性细胞渗出,对照组小鼠各器官未见异常.肺系数及肺干湿重比逐渐升高,第8天开始下降,第14天趋于正常.G-Rb1组症状明显轻于攻毒组,症状出现较缓,症状较轻,死亡时间延迟,死亡率降低.在第4、6、8天,与对照组比G-Rb1组和ALI组T-SOD及CAT活力显著降低（P＆lt;0.01）,组间比,G-Rb1组明显高于ALI组（P＆lt;0.05）;在各时间点,与对照组比,ALI组GSH-PX活力显著降低（P＆lt;0.01）,而G-Rb1组则显著升高（P＆lt;0.01）,实验组组间差异显著（P＆lt;0.01）.结论 G-Rb1在一定浓度范围内,具有提高小鼠抗氧化酶活力作用,一定程度上改善H9N2猪流感病毒对肺组织的氧化损伤.

TRPM2离子通道在H9N2流感病毒感染小鼠肺微血管内皮细胞线粒体损伤中的作用

旨在探讨瞬时电位受体M2离子通道(TRPM2)在H9N2流感病毒感染小鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC)导致线粒体损伤过程中的作用。在已建立TRPM2 shRNA PMVEC的基础上,采用5MOI H9N2猪流感病毒感染细胞,在病毒作用后24和48 h提取各组细胞的线粒体进行蛋白定量,检测各组细胞线粒体超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、一氧化氮合成酶(NOS)、线粒体呼吸链复合物Ⅳ活性和ATP酶水平;利用激光共聚焦显微镜观察线粒体膜电位变化(JC-1染色)及细胞凋亡(Annexin V-FITC/PI双染色法)情况。结果表明:H9N2-SIV感染后TRPM2 shRNA PMVEC内SOD活性、GSH水平和Na^+-K^+-ATP、线粒体呼吸链复合物Ⅳ活性显著高于对照shRNA PMVEC(P<0.05或P<0.01);mtNOS活性则极显著低于shRNA PMVEC(P<0.01)。JC-1染色显示TRPM2-siRNA PMVEC线粒体膜电位水平高于对照shRNA PMVEC,但是AnnexinV-FITC/PI染色显示细胞凋亡则低于H9N2感染对照shRNA PMVEC。结果提示:TRPM2基因沉默有效减缓H9N2感染导致NOS产生,显著降低SOD、GSH、线粒体呼吸链复合物Ⅳ、Na^+-K^+-ATP的消耗以及线粒体膜电位的下降程度,进而有效缓解PMVEC线粒体损伤及细胞凋亡。

安徽省1例H9N2流感病例及回顾性分析

目的分析H9N2流感病毒感染患者的感染来源及流行病学特征。方法对2015年4月发现的H9N2流感患者流行病学个案调查资料及相关标本的检测结果进行描述性流行病学分析。结果该例患者临床主要表现为轻症流感样症状。患者发病前有活禽市场暴露史;活禽市场环境监测标本中H9型禽流感病毒核酸阳性率为24.1%;29名密切接触者在观察期内未出现流感样聚集性疫情。结论该病例感染来源可能与农贸市场环境暴露有关,病毒来源于禽源H9N2流感病毒。

p38MAPK信号通路在猪源H9N2流感病毒导致小鼠肺损伤中作用的研究

探讨p38MAPK信号通路在猪源H9N2流感病毒诱导小鼠肺损伤过程中的作用。将BALB/c小鼠随机分为病毒感染组(H9N2组)、模拟感染组(NS组)和H9N2+p38MAPK抑制剂组(H9N2+SB203580)。Western blot方法检测肺组织p38MAPK表达,观察各组小鼠肺组织病理学变化、测定肺湿/干重比,衡量肺损伤情况;同时进行支气管肺泡灌洗液(BALF)内细胞计数和肿瘤坏死因子α(TNF-α)及白细胞介素-1β(IL-1β)的测定。结果如下:Western blot结果显示感染组小鼠肺组织内p38MAPK表达显著高于H9N2+SB203580抑制剂组(P<0.01);感染组小鼠精神沉郁、呼吸困难、体重下降;肺组织学表现为肺泡间质水肿、炎性细胞渗出、出血为特征的弥漫性肺泡损伤。与感染组相比,p38MAPK抑制剂组症状较轻,一定程度上降低了死亡率,并明显延长小鼠存活时间(P<0.01);同时,小鼠BALF内炎性细胞渗出减少,TNF-α和IL-1β的含量(P<0.05)以及肺湿/干重较感染组显著下降(P<0.01)。本研究证实p38MAPK信号通路参与H9N2流感病毒诱导小鼠肺损伤过程,其抑制剂SB203580能够有效减少p38MAPK表达,进而减少TNF-α和IL-1β产生以及炎性细胞渗出,缓解肺损伤的严重程度,延长小鼠存活时间和降低死亡率,提示p38MAPK信号通路抑制剂SB203580在今后作为辅助预防和干预H9N2-SIV诱导肺损伤具有一定的应用前景。

H9N2流感病毒诱导MDCK细胞自噬对病毒复制的影响

本试验旨在研究H9N2流感病毒感染MDCK细胞引发的细胞自噬对病毒复制的影响。试验首先建立了稳定表达GFP-LC3的MDCK细胞系,该细胞系经H9N2流感病毒感染后,激光共聚焦观察到了绿色荧光的点状聚集,得出H9N2流感病毒感染MDCK细胞引发细胞自噬。随后试验利用3-MA抑制细胞自噬、Rapamycin诱导细胞自噬,荧光定量PCR检测NP mRNA水平,TCID50检测病毒的滴度进行细胞自噬与病毒复制的研究。结果表明:Rapamycin可显著增加NP mRNA水平和病毒滴度(P <0.01);3-MA可以显著降低NP m RNA水平和病毒滴度(P<0.01)。说明H9N2流感病毒感染MDCK细胞引发的细胞自噬可促进流感病毒的复制。

表达绿色荧光蛋白重组H9N2流感病毒的拯救及生物学特性

以具有气溶胶传播能力的A/Chicken/Shanghai/7/2001(H9N2)禽流感病毒作为骨架,构建该病毒反向遗传质粒,并在其NS基因中插入绿色荧光蛋白报告基因,拯救重组病毒。结果表明:NS基因中携带绿色荧光蛋白的重组H9N2病毒能够在鸡胚及SPF鸡体内正常复制,并在感染过程中表达绿色荧光蛋白。经鉴定发现重组的7NG病毒保留了野生型病毒通过气溶胶传播途径感染易感动物的生物学性能,为进一步研究H9N2流感病毒气溶胶传播的机制奠定基础。

共表达膜结合型与可溶性H9N2亚型禽流感病毒HA蛋白的重组基因Ⅶ型新城疫病毒的构建及免疫效果评价

旨在构建能高效稳定表达H9N2 AIV的HA蛋白的重组基因Ⅶ型新城疫病毒,有望开发抗新城疫和H9N2亚型禽流感病毒的二联疫苗,为控制H9N2 AIV和NDV提供新的防御思路,对NDV疫苗载体的构建和优化有重要的参考意义。利用反向遗传技术,以rDHN3-mF为骨架,在病毒基因组的P和M之间的非编码区插入全长膜结合HA和另外一个带有截短跨膜结构域的可溶性HA蛋白,获得了能高效稳定表达H9N2 AIV的HA蛋白的基因Ⅶ型NDV减毒株重组病毒rDHN3mF-HA和rDHN3mF-2HA。通过鸡胚接种、Western blot、血凝效价(HA)及平均鸡胚致死时间(MDT)等试验来检测重组病毒的稳定性以及生物学特性,将重组病毒以10~6 EID_(50·)只^(-1)剂量免疫7日龄SPF鸡并测定血凝抑制(HI)抗体,在免疫后28 d对各组进行攻毒保护试验。结果显示:重组病毒在鸡胚中连续传至十五代后HA基因无突变发生;Western blot证明重组病毒可稳定高效地表达特异性的HA蛋白;重组病毒的生长曲线说明了重组病毒与亲本毒株具有相似的复制特性和低毒力特征;重组病毒免疫组的SPF鸡均能产生针对NDV或者H9N2 AIV的特异性HI抗体;攻毒保护试验结果:重组病毒均能对攻毒后的鸡产生100%保护效果;喉、肛拭子检测结果说明重组病毒可显著减少NDV与H9N2 AIV的体外排毒;气管与肺qPCR检测结果显示攻毒后3 d, rDHN3mF-2HA较rDHN3mF-HA更显著地降低了脏器中H9N2 AIV含量。本研究成功构建了共表达膜结合型与可溶性H9N2亚型禽流感HA蛋白的基因Ⅶ型重组NDV,为H9N2 AIV和NDV的一种新型重组基因工程二联活载体疫苗的研制与应用奠定了基础。

空心莲子草乙酸乙酯部位体内外抗H9N2亚型禽流感病毒活性的研究

[目的]探究空心莲子草乙酸乙酯部位(ethyl acetate extract from Alternanthera philoxeroides,AETAC)体内外抗H9N2亚型禽流感病毒(H9N2 subtype Avian influenza virus, AIV-H9N2)活性及其作用机制。[方法]利用CCK-8法检测不同浓度AETAC作用不同时间对鸡胚成纤维细胞(DF-1)的抑制作用,通过预防感染、影响复制、阻止吸附及直接杀灭4种方式作用后检测AETAC对DF-1细胞的毒性,选择体外最佳抗AIV-H9N2作用方式。尿囊腔接种不同浓度AETAC确定其对鸡胚的最大安全浓度;将AETAC以3种不同给药方式作用于AIV-H9N2感染后鸡胚,选择体内最佳给药方式。经尿囊腔同时接种AETAC和AIV-H9N2,统计各组鸡胚存活数,测定血凝效价,并观察胚胎的发育情况和鸡胚法氏囊病理组织变化。[结果]在一定范围内,随着AETAC浓度升高或作用时间延长,AETAC对DF-1细胞的抑制率升高。与空白对照组相比,4种抗AIV-H9N2作用方式下,病毒对照组和药物组细胞存活率均显著降低(P<0.05);与病毒对照组相比,AETAC浓度为5~30μg/mL时,4种抗AIV-H9N2作用方式下,药物组细胞存活率均显著升高(P<0.05)。4种作用方式下,DF-1细胞存活率分别为8.15%~64.96%(预防感染)、8.56%~83.83%(影响复制)、1.82%~5.90%(阻止吸附)和6.90%~40.12%(直接杀灭)。AETAC对鸡胚的最大安全浓度为16.41 mg/mL,对感染鸡胚的最佳给药方式为AETAC和病毒混合后接种。以最佳体内作用方式给药后,AETAC中、低浓度组鸡胚存活率为40%~60%,高浓度组鸡胚全部存活,胚胎喙部发育明显,鸡胚法氏囊淋巴滤泡发育完整,滤泡大小和数量正常,充血量少,组织病理状态改善。[结论]AETAC在体内外对AIV-H9N2均具有显著的抑制作用,且主要与影响病毒复制作用方式相关。

H9N2 AIV灭活疫苗免疫SPF鸡攻毒后肺组织免疫相关基因表达变化研究

[目的]本试验旨在探究H9N2亚型禽流感病毒攻击对H9灭活疫苗免疫SPF鸡呼吸系统的影响。[方法]选用36只3周龄SPF鸡,随机分为对照组(Con)、攻毒组(Flu)、免疫后攻毒组(Vac+Flu)。以每只0.4 mL剂量免疫接种H9灭活疫苗,3周后以10~6 EID_(50)的病毒量进行攻毒,采集拭子、血清、气管、肺组织等样品,通过血凝抑制(HI)试验、RT-PCR、荧光定量PCR(qPCR)等方法检测血清中HI抗体滴度、肺脏流感病毒M基因拷贝数以及免疫相关基因CD4、CD8、GATA3、T-bet、IL-4、IL-13、TNF-α、IFN-γ、Perforin、Granzyme、FasL、Fas等的表达量;并利用HE染色、免疫组织化学的方法观察气管、肺脏的病理变化及病毒特异性抗原NP蛋白的分布特征。[结果]HI试验结果显示,SPF鸡疫苗免疫后可产生较高的H9N2 AIV抗体效价。免疫保护试验和RT-PCR结果显示,SPF鸡疫苗免疫后攻毒仍能检测到机体排毒和流感病毒M基因在肺脏组织中的表达。HE染色和免疫组化结果显示,接种H9N2 AIV灭活疫苗后能够明显减轻SPF鸡气管和肺脏的病理损伤,降低气管、肺脏中的病毒载量。荧光定量PCR结果显示,接种H9N2 AIV灭活疫苗后能够提高SPF鸡肺脏中Th1、Th2细胞因子分泌水平,促进穿孔素/颗粒酶途径相关基因表达进而增强肺脏中细胞毒性反应。[结论]H9N2疫苗免疫鸡感染H9病毒后虽然仍存在排毒现象,但其抗病毒免疫系统活跃、其主要器官病毒载量降低,建议按照流感疫苗免疫程序进行免疫接种,提高对流感的防控水平。

H9N2亚型禽流感病毒感染鸡红细胞引起白细胞介素的免疫应答

为研究H9N2亚型禽流感病毒(H9N2 AIV)感染鸡红细胞后白细胞介素(ILs)参与的免疫应答反应,进一步揭示鸡红细胞在感染H9N2亚型禽流感病毒中所发挥的免疫调节作用,应用实时荧光定量PCR技术分别对体外感染H9N2 AIV后0、2、6、10 h和体内攻毒3、7、14 d后8种白细胞介素相关基因(IL-6、IL-7、IL-12、IL-13、IL-15、IL-16、IL-18、IL-34)的表达水平进行检测。结果表明,8种ILs相关基因均在鸡红细胞中表达,其表达水平在体外感染H9N2 AIV后和体内攻毒后呈现动态变化;与对照组相比,体外感染H9N2 AIV后不同时间点IL-6和IL-18的相对表达量呈现逐渐升高的趋势,而IL-7、IL-12、IL-15的相对表达量呈现逐渐下降的趋势;IL-13在感染H9N2 AIV后的0、6 h显著下降,而IL-16仅在感染H9N2 AIV后的2 h显著下降。体内攻毒后的不同时间点,IL-12、IL-13、IL-15、IL-16的相对表达水平均逐渐升高,而IL-6、IL-18、IL-34的表达水平先升高后降低,仅IL-7表达水平先降低后升高。综上,鸡感染H9N2 AIV后红细胞发生了相应的免疫应答反应,并通过促炎因子以及抗炎因子的表达来调节鸡感染H9N2后的免疫应答。

自噬在H9N2亚型禽流感病毒和大肠杆菌共感染中的作用研究

为探究H9N2亚型禽流感病毒(AIV)和大肠杆菌共感染对无特定病原体(SPF)鸡肺组织和免疫系统的损伤及细胞自噬在共感染致病过程中的作用,选用60只3周龄SPF鸡,随机平均分为对照组、单独细菌感染组、单独病毒感染组、先病毒后细菌共感染组和先细菌后病毒共感染组5组。于处理后第1、3、5和7天各组随机选择3只鸡采集血清和肺组织,利用荧光定量PCR和HE组织学染色技术探究共感染对SPF鸡的肺组织系数、肺组织病理变化和肺组织屏障功能的影响。利用细胞培养、荧光定量PCR、酶联免疫吸附和Western blot等技术探究共感染与细胞自噬的关系以及自噬对共感染炎症反应和辅助性T细胞17(Th17)免疫反应的影响。结果显示:先病毒后细菌共感染试验组导致鸡肺组织病理损伤严重;共感染诱导强烈的细胞自噬,先病毒后细菌组自噬相关因子(LC3、Beclin-1)的蛋白表达水平与其他组相比极显著升高(P<0.01);同时与其他组相比,先病毒后细菌组炎症因子基因表达水平极显著升高(P<0.01),Th17免疫相关因子基因表达水平极显著降低(P<0.01)。提示:自噬通过促进共感染中炎性因子释放且抑制Th17免疫反应,造成鸡肺组织严重损伤。本试验为研究病毒与细菌共感染机制提供了科学依据。

H9N2亚型禽流感病毒样颗粒制备及免疫原性评价

H9N2亚型禽流感病毒近年来在家禽中普遍发生,可造成蛋鸡产蛋量下降,肉鸡复合型呼吸道疾病,给养禽业造成了巨大的经济损失。本研究筛选保护谱广的H9N2亚型禽流感病毒流行株的HA、NA、M1基因,以共表达的方式构建重组杆状病毒。通过血凝活性检测、Western blot杂交、电镜观察等方法对蛋白表达及病毒样颗粒的组装进行鉴定。结果表明,构建的重组杆状病毒可同时表达HA、NA和M1蛋白,且表达的蛋白具有良好的血凝活性,电镜观察可见约100 nm的病毒样颗粒。将表达的蛋白制备油乳剂亚单位疫苗并免疫SPF鸡,免疫后诱导的HI抗体与全病毒灭活疫苗的HI抗体效价水平相当,且对异源毒株具有良好的交叉保护。

H9N2禽流感病毒PB2蛋白627位点突变对小鼠肺脏RIP3、Slit2和Robo4表达和分布的影响

PB2蛋白627位点被证实是决定甲型流感病毒宿主范围和致病性的关键因子,为深入探究H9N2禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)及其PB2蛋白627位点突变株对BALB/C小鼠肺脏RIP3、Slit2和Robo4基因表达和组织分布的影响,该研究使用H9N2 AIV(V_(K627))和该毒株PB2蛋白627位点突变株(rV_(K627E))感染BALB/C小鼠,分别在攻毒后第1、3、5、6 d采集肺组织,通过qRT⁃PCR和免疫组织化学技术对RIP3、Slit2和Robo4基因在小鼠肺组织中的特异性表达和分布进行研究。结果显示,攻毒组小鼠肺脏RIP3的表达量与对照组相比显著上升,同时VK627组RIP3的表达量显著高于rV_(K627E)组;Slit2和Robo4的表达量在攻毒后第1 d明显低于对照组,之后rVK627E组的表达量与对照组和VK627E组相比显著上升。免疫组织化学检测结果显示,RIP3蛋白主要分布在小鼠肺泡壁上皮细胞以及肺动脉血管内皮细胞,呈弱阳性表达,而攻毒组RIP3蛋白在气管粘膜下层细胞也有中至强阳性表达;Slit2蛋白在对照组和rVK627E组小鼠的肺泡上皮细胞以及气管粘膜上皮细胞中呈现中强阳性表达,而在VK627组中呈现弱阳性表达。Robo4蛋白的分布和表达情况与Slit2蛋白相似。综上所述,H9N2 AIVs感染小鼠后,会显著影响RIP3和Slit2/Robo4的表达和分布,且其表达和分布与H9N2 AIVs对小鼠的致病性密切相关;PB2蛋白627位点的突变在H9N2 AIVs影响RIP3、Slit2和Robo4表达和分布中起着重要作用。该研究结果将为进一步探究H9N2 AIVs及其点突变毒株介导宿主病理发生的分子机制和抗炎策略的选择提供基础数据。

安徽省2株人感染H9N2流感病毒基因特征

目的分析2015年安徽省2株人感染H9N2禽流感病毒分离株全基因组特征。方法对安徽省2015年4月和9月流感监测网络实验室先后发现并确诊的2例H9N2禽流感病毒感染病例及其病毒分离株全基因组序列进行分析，使用Mega6．0等软件解析2株H9N2毒株全基因组特征。结果安徽省首次报道人感染H9N2禽流感病毒病例，对病毒分离株分析显示，其HA和NA基因与中国2013年禽间流行的H9N2病毒高度同源，属于A／Chicken／Shanghai／F／98（H9N2）支系；而PB2和MP基因属于A／quail／HongKong／G1／97支系，与H7N9、H10N8和H6N2具有较高的相似度。氨基酸序列比对发现该2株病毒出现多个人易感倾向位点分子特征：HA蛋白发生Q226L、H183N和E190T突变，且HA裂解位点为PSRSSR＼GL排列，NA蛋白茎部发生63～65位氨基酸缺失，M2蛋白s31N突变，以及PA一100A、PA一356R和PA一409N。结论安徽省首次报道的人感染禽源H9N2流感病毒为H9N2系间重配病毒，存在多个人易感位点。

人参皂苷Rb1对H9N2亚型猪流感病毒诱导急性肺损伤小鼠肺组织氧自由基的影响

本试验将120只6～8周龄BALB／c小鼠随机分为对照组、肺损伤模型组（ALI组）、人参皂苷Rb1组（G-Rb1组），每组40只。AL1与GRb1组采用100μL SIA／swine／HeBei／012／2008／猪流感病毒（H9N2SIV）经鼻腔接种建立急性肺损伤模型，同时G-Rb1组腹腔注射人参皂苷Rb1液0．1mL（剂量为10mg·kg-1），连续7d；对照组鼻腔接种相同剂量生理盐水稀释的正常鸡胚尿囊液。通过观察临床症状、小鼠的体重、肺病理组织学变化、检测小鼠肺组织T—SOD活性、抑制0H·能力及MDA、NO含量，探讨人参皂苷Rb1（G-Rb1）清除肺损伤小鼠氧自由基的能力。结果表明，从第2天末开始ALI组大部分小鼠出现高度的精神沉郁，呼吸极度困难，采食量明显减少，体重下降。肺部明显水肿、淤血和出血，炎性细胞渗出，对照组小鼠各器官未见异常。G-Rb1组症状明显轻于攻毒组，症状出现较缓，症状较轻，死亡时间延迟，死亡率降低。在第4、6、8天：抑制0H·能力、T-SOD活力与对照组比，G-Rb1与AILI组含量显著减少（P〈O．05），但G-Rb1组明显高于ALI组（P〈0．05）；MDA及N0含量与对照组比，G-Rb1与ALI组含量极显著增加（P〈0．01），但G-Rb1组明显低于ALI组（P〈0．01）。本研究表明，G-Rb1在一定浓度范围内，具有清除由病毒诱导的肺损伤组织中自由基的作用，保护自由基对肺组织的氧化损伤。

吉林省长春市城乡活禽市场H9N2亚型禽流感病毒的检测与分子遗传进化分析

H9N2亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)通过为其他流感病毒提供内部基因或直接跨越种间屏障感染人,而活禽市场是H9N2亚型AIV传播的主要传播途径之一。为了解吉林省长春地区城乡活禽市场H9N2亚型AIV流行特点和趋势,对2021年9月至2023年4月在4个城乡活禽市场分离到3株代表性H9N2亚型AIV进行了分子遗传进化分析。结果显示3株毒株HA蛋白裂解位点均为PSKSSR↓GLF,其受体结合位点的第226位氨基酸由Q突变为L,可与α,2-6唾液酸受体结合,具有感染人的特性。分子遗传进化分析显示3株毒株的HA基因归属于BJ-94谱系中h9.4.2.5亚分支;NA基因归属Y280谱系;PB2、M基因均属于G1谱系;剩余内部基因均属于F-98谱系。研究结论丰富当前国内H9N2亚型AIV的流行病学研究,提示需加强病毒变异监控和新疫苗研发。

H9N2禽流感病毒河南分离株NS基因序列测定及进化生物信息分析

为明确河南地区鸡群中H9N2亚型AIV中非结构蛋白基因(NS)系统进化情况,对H9N2禽流感病毒河南分离毒株非结构蛋白基因(NS)进行扩增,并克隆到pGEM-T载体中测序,获得NS蛋白的完整编码序列。将NS核甘酸序列与GenBank已有的参考序列作比对,结果表明,河南分离毒株的NS基因与上海F98处于同一分支;在AIV NS基因系统发育进化树中,对测得的序列进行种系发育关系研究,确定H9N2禽流感病毒河南分离毒株的进化关系。

H9N2流感病毒在鸡胚中繁殖规律及血凝活性的研究

为了研究H9N2流感病毒在鸡胚中的繁殖规律及其血凝活性，试验用H9N2河南分离毒株接种鸡胚，对收获的尿囊液进行10倍系列稀释，选取不同浓度尿囊液分别接种不同日龄鸡胚，测定不同日龄鸡胚接种病毒后尿囊液产量及其血凝效价，探讨影响毒株血凝活性的因素。结果表明：10日龄鸡胚接种1×10-5病毒时收获的尿囊液产量最多且血凝效价最高；筛选分析影响H9N2病毒血凝活性因素时发现，缓冲液的pH值为3．0—5．5时发生溶血，水浴温度为70～80℃时几乎完全丧失活性。

鸭H9N2亚型禽流感病毒的研究进展

H9N2亚型禽流感病毒目前已经是世界范围内传播最为广泛的人兽共患病毒之一,其感染谱和传染源都在逐渐扩大,引起大众重视H9N2对公共卫生安全存在的潜在威胁。鸭H9N2病毒普遍认为是以水禽类—陆地禽类—人类的路径实现人的感染,H9N2可作为重组病毒的基因供体和其他类型的流感病毒基因进行重排重组具备感染人的能力。加强禽类饲养管理、做好养禽场的防病管理、加大对禽场工作人员宣传教育的力度可以有效的防控H9N2亚型禽流感病毒的传播,疫苗接种、建立准确又灵敏的检测方法是禽流感病毒防控工作的重要手段。