1起人感染H9N2禽流感病例的流行病学调查

目的 分析扬州市广陵区首发人感染H9N2禽流感病例的流行病学特征,为制定人感染禽流感防控措施提供参考。方法 收集病例临床资料、实验室检测结果及疫情调查处置资料,运用描述性流行病学方法,阐述病例发现、流行病学调查、现场处置、风险研判过程。结果 2021年流感常规监测标本检测中发现1例人感染H9N2禽流感病例,为广陵区人感染H9N2禽流感首发病例,为小学生、轻症,无续发病例。对182份病家和周边市场的环境样本进行检测,共检出阳性样本48份(包括病家1份、联谊农贸批发市场3份、联谊家禽批发市场8份、东花园菜场36份),其中41份为仅H9N2阳性,7份为H9N2、H5N6双阳性,环境标本阳性率为26.37%(48/182)。结论 该首发病例为本地感染,存在环境污染源,提示感染来源与活禽市场有关,患儿为直接或间接接触病毒感染。建议开展禽类养殖、流通销售升级转型和管理,强化病原学监测和风险评估以及疫情联防联控机制。

H9N2禽流感病毒PB2蛋白627位点突变对小鼠肺脏RIP3、Slit2和Robo4表达和分布的影响

PB2蛋白627位点被证实是决定甲型流感病毒宿主范围和致病性的关键因子,为深入探究H9N2禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)及其PB2蛋白627位点突变株对BALB/C小鼠肺脏RIP3、Slit2和Robo4基因表达和组织分布的影响,该研究使用H9N2 AIV(V_(K627))和该毒株PB2蛋白627位点突变株(rV_(K627E))感染BALB/C小鼠,分别在攻毒后第1、3、5、6 d采集肺组织,通过qRT⁃PCR和免疫组织化学技术对RIP3、Slit2和Robo4基因在小鼠肺组织中的特异性表达和分布进行研究。结果显示,攻毒组小鼠肺脏RIP3的表达量与对照组相比显著上升,同时VK627组RIP3的表达量显著高于rV_(K627E)组;Slit2和Robo4的表达量在攻毒后第1 d明显低于对照组,之后rVK627E组的表达量与对照组和VK627E组相比显著上升。免疫组织化学检测结果显示,RIP3蛋白主要分布在小鼠肺泡壁上皮细胞以及肺动脉血管内皮细胞,呈弱阳性表达,而攻毒组RIP3蛋白在气管粘膜下层细胞也有中至强阳性表达;Slit2蛋白在对照组和rVK627E组小鼠的肺泡上皮细胞以及气管粘膜上皮细胞中呈现中强阳性表达,而在VK627组中呈现弱阳性表达。Robo4蛋白的分布和表达情况与Slit2蛋白相似。综上所述,H9N2 AIVs感染小鼠后,会显著影响RIP3和Slit2/Robo4的表达和分布,且其表达和分布与H9N2 AIVs对小鼠的致病性密切相关;PB2蛋白627位点的突变在H9N2 AIVs影响RIP3、Slit2和Robo4表达和分布中起着重要作用。该研究结果将为进一步探究H9N2 AIVs及其点突变毒株介导宿主病理发生的分子机制和抗炎策略的选择提供基础数据。

云南省首例人感染H9N2禽流感病例发现与应对

目的对云南省流感监测中发现的首例人感染H9N2禽流感病例进行调查分析,为进一步防治人禽流感疫情提供科学依据。方法对患者、密切接触者和活禽市场开展流行病学调查,并采集病例呼吸道标本和外环境标本进行实验室检测分析。结果病例有活禽市场暴露史,标本禽流感病毒核酸阳性结果表明,该病例为人感染H9N2禽流感确诊病例,未出现二代病例。病例暴露的活禽市场环境中存在大量禽流感病毒。结论医疗机构加强流感样病例监测和不明原因肺炎监测是及时发现人禽流感病例的重要手段。活禽交易市场定期消毒与休市是降低感染率的关键措施。

两种免疫增强剂对肉鸡H9N2禽流感病毒感染的保护试验

[目的]研究囊素肽和中草药添加剂——抗感康对肉鸡预防H9N2禽流感病毒感染的保护效果。[方法]选择120羽1日龄AA鸡,随机分为3组,即中草药组、囊素肽组和对照组,40只/组。中草药组从1日龄起饲喂添加有0.1%抗感康的混合饲料;囊素组在13日龄时颈部皮下注射囊素肽0.4ml;对照组在13日龄颈部皮下注射0.85%灭菌生理盐水0.4ml,并观察鸡的临床表现。在1、7、18、27、35和45日龄时,记录采食量和体重,计算试验各阶段和全期平均日增重、采食量和料重比。[结果]囊素肽和抗感康能阻止H9N2禽流感病毒的水平传播,提高肉鸡抵抗力,并显著提高鸡的生产性能(P<0.05)。[结论]囊素肽和抗感康能明显增强鸡的免疫力并提高鸡的生产性能。

贵州省首次报道人感染H9N2禽流感病例的病原学诊断及意义

目的通过病原学诊断确诊贵州省首例人感染H9N2禽流感病例。方法采集符合流感样病例定义的标本,进行实时荧光定量(Real-Time)PCR检测,同时通过病毒分离技术分离病毒。结果实时荧光定量(Real-Time)PCR结果显示禽流感病毒H9N2亚型阳性;成功分离出H9N2亚型禽流感病毒,细胞培养物红细胞凝集试验滴度为1:16,Real-Time PCR检测为禽流感病毒H9N2亚型阳性。结论贵州省禽类外环境监测中,H9N2禽流感病毒一直处于较高的感染水平,监测发现的人感染H9N2禽流感病例为贵州省首次报道。

鸡CMPK2的原核表达及其抗H9N2禽流感病毒的初步研究

为研究鸡CMPK2基因的遗传进化特点和生物学功能,本研究以鸡成纤维细胞系(DF-1)为模板,通过RT-PCR扩增鸡CMPK2基因完整阅读框(ORF)(762 bp),利用MEGA7软件对CMPK2氨基酸序列进行同源性和遗传进化分析。并构建了重组质粒p3xFLAG-CMV-14-CMPK2和重组原核表达载体pET-28a-CMPK2,利用原核载体表达CMPK2目的蛋白后制备小鼠抗鸡CMPK2的多克隆抗体,并采用western blot检测其反应性。构建的CMPK2氨基酸序列进化树结果显示,鸡CMPK2与爬行类动物CMPK2遗传关系较近,而与哺乳动物CMPK2氨基酸序列的遗传距离相对较远。为研究鸡CMPK2是否具有抗病毒功能,利用H9N2禽流感病毒(AIV)感染DF-1细胞,感染后6 h、12 h时分别采用荧光定量PCR及western blot方法检测鸡CMPK2基因转录水平和蛋白表达情况,结果显示H9N2 AIV感染能够引起鸡CMPK2 mRNA转录水平和蛋白表达水平的明显上调。进一步利用DF-1细胞过表达CMPK2及利用特异性siRNA干扰CMPK2的表达后,分别采用荧光定量PCR及western blot检测鸡CMPK2蛋白对H9N2 AIV复制的影响。荧光定量PCR以及western blot结果显示,过表达鸡CMPK2蛋白可以抑制H9N2 AIV的增殖。而下调鸡CMPK2蛋白的表达后H9N2 AIV增殖水平显著上升(P<0.01)。上述结果首次证实,鸡CMPK2是H9N2 AIV复制的负调控因子,能够抑制AIV的复制。本研究丰富了AIV与抗病毒宿主因子的研究内容,也可为抗禽类病毒感染药物靶点的研究提供重要参考。

2016—2017年华东地区活禽市场7株H9N2禽流感病毒遗传进化分析

活禽市场的家禽,特别是水禽在禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)的演化、维持和扩散过程中起重要作用,因此对活禽市场进行长期不间断的流行病学监测非常重要。2016年10月至2017年9月,每月定期采集华东地区某活禽市场家禽喉头和泄殖腔棉拭子,并接种10日龄SPF鸡胚,测定鸡胚尿囊液HA效价,取阳性尿囊液进行HI试验分型,应用RT-PCR对该样品进行全基因PCR并测序,利用DNASTAR、MEGA6.0分析序列,并绘制系统发生树。结果共采集样品1 178份,来自127群,H9N2AIV阳性样品100份。从水禽中分离到H9N2AIV 7株,对7株病毒全基因组进行测序和遗传进化分析,不同基因片段均存在不同的遗传进化趋势。活禽市场水禽体内携带的7株H9N2AIV与当前家禽优势流行基因型一致,因此对活禽市场家禽中循环存在的AIV进行的定期监测,对了解潜在的流行株的演化和出现有重要作用。

表达H9N2禽流感病毒HA1蛋白的转基因和缓艾美耳球虫的构建

H9N2亚型禽流感病毒已经被证实可以传播到人类，对它存在的潜在危害已受到越来越多的关注。因此，研究安全而有效的H9N2禽流感病毒疫苗已迫在眉睫。为研究和缓艾美耳球虫作为活载体表达及运输禽流感病毒抗原的潜能，本研究构建了可稳定表达H9N2禽流感病毒HA1蛋白的转基因和缓艾美耳球虫。利用黄色荧光蛋白（YFP）及融合的乙胺嘧啶抗性基因（DHFR-TSm2m3）作为报告基因及筛选基因，我们将表达H9N2禽流感病毒HA1抗原的质粒载体核转球虫子孢子，接种鸡后在乙胺嘧啶药物的选择压力下进行筛选并连续传代获得转基因和缓艾美耳球虫系。利用染色体步移和免疫印迹证实了HA1基因的成功插入和表达；利用间接免疫荧光证实HA1蛋白定位于球虫子孢子细胞膜表面和头部。研究进一步发现，转基因球虫的繁殖力与野生球虫相当，感染后亦于第6d达到排卵囊高峰。该转基因和缓艾美耳球虫株具有作为疫苗活载体的潜能。

一例人H9N2禽流感病例触发的禽间禽流感紧急流行病学调查

2021年9月,A省B市出现一例人H9N2禽流感病例。为了解禽间是否存在禽流感病原,确定该病例的感染来源,防止出现禽间疫情,对该病例家附近区域内的家禽养殖场户、集中屠宰点和农贸市场开展了H9亚型禽流感紧急流行病学调查,对该病例居住地和就读学校间区域内的家禽养殖户、屠宰点和农贸市场以及B市所有家禽养殖场户进行禽流感疫情排查,均未发现可疑病例。对该病例居住社区内养殖场户、农贸市场和活禽临时集中屠宰点进行第一轮家禽咽/泄殖腔拭子和环境样品采样检测,结果均为H9亚型禽流感阴性;在第二轮采样检测中,活禽临时集中屠宰点8家屠宰摊位的16份鸡拭子检测为H9亚型禽流感阳性。经疫情排查和采样检测,认为本地家禽发生H9亚型禽流感疫情的风险较低,该病例通过家禽感染的可能性较小,但不能排除通过野禽感染的可能,病原通过屠宰点和农贸市场由外地传入散播的风险较高。建议加强家禽屠宰点、农贸市场等高风险场所的清洗、消毒和疫情排查,做好家禽养殖场的禽流感防控,切断人-禽间的禽流感传播途径。

H9N2禽流感病毒全基因组密码子使用偏好性及影响因素分析

【目的】探究H9N2禽流感病毒(AIV)全基因组的密码子使用偏好性及影响因素。【方法】选取2010—2018年国内H9N2 AIV流行毒株的全基因组为研究对象,分析其碱基组成特性、最优密码子、密码子使用偏好性的影响因素以及病毒对宿主密码子使用模式的适应性。【结果】H9N2 AIV的全基因组中AU含量高于GC。大部分最优密码子以A或U结尾,有效密码子数(ENC)平均值为52.86,提示存在密码子使用偏好性但偏好性较低。密码子使用偏好性主要受到突变压力和自然选择的共同作用,其中自然选择(所占比例为61.79%~76.15%)作用大于突变压力(所占比例为23.85%~38.21%)。H9N2 AIV对人Homo sapiens的密码子适应指数平均值为0.739~0.741,提示H9N2 AIV禽流感病毒可能已适应人类的密码子使用模式。【结论】本研究为H9N2 AIV的基因进化分析、已有疫苗的密码子优化和新型疫苗(密码子去优化疫苗)研制提供了理论依据。

2006-2007年云南流行H9N2禽流感病毒血凝素全基因序列分析

为调查云南省H9N2亚型禽流感病毒的分子流行病学情况,对2006年6月至2007年4月从云南省16地州随机采集了各种家禽、家猪的5 728份喉气管和口腔棉拭子样品进行RT-PCR检测,276份样品呈H9N2阳性。将具有代表性的17份阳性样品的HA全长基因序列测定和分析。结果表明:株间HA基因同源性为91%～100%,推导氨基酸同源性95%～100%,所测序列与云南1999年分离H9N2毒株ackynkenxie-1-99的同源性仅为93%。根据HA基因同源性,可将17个毒株可分为2个亚群,一个亚群的12株HA基因同源性高达97%以上,与Qa/ST3143/05和C/Bei1/94同源性是97%和93%,其中的11株毒株HA基因全长1 671,编码556aa,存在第6～9位4 aa缺失,只有AC/Yndq/06株HA基因1 683,编码560 aa。另外一个亚群的其余5株,同源性98%以上,HA基因全长1683 bp,编码560 aa。17个毒株中3个存在218～220 aa糖基化位点变异,1个毒株551～553 aa糖基化位点发生变异。所有毒株在HA裂解位点处没有连续性碱性氨基酸插入,受体结合位点处的氨基酸没有变异。

H9N2禽流感病毒纳米抗体酵母双杂交文库的构建

【目的】构建H9N2禽流感病毒(AIV)纳米抗体(Nbs)酵母双杂交文库,为后期筛选H9N2 AIV Nbs奠定基础。【方法】以H9亚型禽流感疫苗(F株)免疫双峰驼,当血凝抑制(HI)抗体滴度大于1∶2~4时,颈静脉采集血液,分离淋巴细胞并提取淋巴细胞总RNA,用反转录试剂盒合成第一链cDNA,再以此为模板,通过巢式PCR扩增Nbs基因片段。将Nbs基因与pGADT7-Rec载体共转至Y187酵母感受态细胞,转化产物涂布SD/-Leu平板,30℃倒置培养约4 d,收集平板上的全部菌落,构建H9N2 AIV Nbs酵母双杂交文库,并对文库库容、滴度、重组效率和多样性进行鉴定。【结果】经H9亚型禽流感疫苗连续免疫4次后,双峰驼HI抗体滴度可达1∶2~9;通过巢式PCR成功扩增出400 bp的Nbs基因。对构建的H9N2AIV Nbs酵母双杂交文库的鉴定表明,其库容为2.4×10~8,滴度为4.2×10~9 CFU/mL,插入重组率为95.6%;随机挑取10个克隆测序,结果显示均符合Nbs序列特征,且为独立克隆,表明文库多样性良好。【结论】成功构建了H9N2 AIV Nbs酵母双杂交文库,且文库各项指标均达到了要求。

2012年—2015年安徽省H9N2禽流感病毒抗原变化分析

为探讨近年来H9N2禽流感病毒流行毒株抗原的变化情况,对2012年—2015年自安徽省分离的24株H9N2亚型禽流感病毒流行株的HA基因进行测序,研究其进化规律。取1株与疫苗株F98遗传距离最远的流行毒株A/chicken/Anhui/20150416/2015,进行交叉免疫保护试验。结果显示,2株灭活苗诱导产生的抗体对异源病毒的中和效价要低1个～2个滴度,并且不能完全阻断异源H9N2禽流感病毒的排毒,表明两者之间存在抗原差异。

PB2-340K和PB2-588V突变导致H9N2禽流感病毒在哺乳动物间传播

H9N2亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)于1966年首次在美国火鸡中发现,它在禽类之间的有效传播使其在全世界家禽中流行。H9N2亚型AIV也能够感染人和多种哺乳动物(如猪、狗、水貂、蝙蝠),中国于1998年报导了第一例人感染H9N2 AIV的病例。血清学研究发现具有家禽接触史的人(特别是从事家禽职业的工人),H9N2 AIV抗体的阳性率比普通人要高,说明H9N2 AIV可以从家禽传播感染人。

娄底市1例人感染H9N2禽流感病毒流行病学调查与基因序列分析

目的对娄底市1例人感染甲型禽流感H9N2病毒病例的流行病学调查分析和基因序列分析,为今后禽流感的科学防治提供依据。方法2023年2月10日对湖南省娄底市1例诊断为感染甲型禽流感H9N2病毒患者的密切及次密切接触者和当地活禽市场进行流行病学调查,并采集患者和密切及次密切接触者咽拭子进行基因序列分析。结果除该病例外,与患者密切和次密切接触者核酸检测均为阴性。患者家庭住宅及周边鸡血样和环境样,经检测其禽类甲型流感病毒均为阴性,但周边活禽市场所采集检测到H9阳性。基因序列分析显示:HA基因序列与国内以往获得的人感染H9N2流行株的HA同源性为83.6%~98.5%,最接近ON856627/Fujiansiming/2021(H9N2)Human/HA,同源性为98.5%;NA基因序列与国内以往获得的人感染H9N2流行株的NA同源性为83.3%~95.5%。最接近MT875139/A Szuhou/2019(H9N2)Human/NA,同源性为95.5%。结论患者感染甲型禽流感H9N2病毒与当地活禽市场存在禽类甲型流感病毒密切相关,今后可通过增加样本数量和采样频率来改进常规流感样疾病监测。

一株H9N2亚型禽流感病毒抗原变异株产生原因的分析

目前,H9N2亚型禽流感病毒是我国最主要的低致病性禽流感病毒,造成禽养殖业的严重经济损失。H9N2禽流感病毒灭活疫苗是防控该疫病的最有效方式,然而,H9N2病毒在免疫压力下容易产生抗原变异,导致疫苗免疫失败,其机制尚不清楚。在前期研究中,我们通过模拟H9N2禽流感免疫压力筛选出携带HA_(D201N)单点突变的逃逸株,但HA_(D201N)如何导致H9N2病毒逃逸株出现的原因尚不明确。为此,本研究利用8质粒反向遗传技术方法拯救出1株A/Chicken/Shanghai/1/2006(H9N2)(简称SH1)及其免疫逃逸株rSH1-HA_(D201N)。为了鉴定HA_(D201N)是否通过影响H9N2禽流感病毒复制能力而导致病毒发生免疫逃逸,用0.001 MOI的病毒接种MDCK并测定其生长曲线,结果表明HA_(D201N)点突变可显著降低rSH1病毒的复制能力,且病毒复制能力的变化不是rSH1病毒发生逃逸的主要原因。为了研究HA_(D201N)是否通过影响H9N2病毒抗原变异而产生病毒逃逸株,将原毒株与突变毒株加入佐剂后免疫鸡以制备多克隆抗体血清,利用交叉HI试验,计算R值并分析抗原变异,结果表明rSH1与rSH1-HA_(D201N)的R值为2,说明HA_(D201N)会导致rSH1发生显著的抗原变异,从而使病毒在免疫压力下逃逸。本研究为探索H9N2禽流感病毒抗原变异规律及其疫苗研发奠定了基础。

共表达膜结合型与可溶性H9N2亚型禽流感病毒HA蛋白的重组基因Ⅶ型新城疫病毒的构建及免疫效果评价

旨在构建能高效稳定表达H9N2 AIV的HA蛋白的重组基因Ⅶ型新城疫病毒,有望开发抗新城疫和H9N2亚型禽流感病毒的二联疫苗,为控制H9N2 AIV和NDV提供新的防御思路,对NDV疫苗载体的构建和优化有重要的参考意义。利用反向遗传技术,以rDHN3-mF为骨架,在病毒基因组的P和M之间的非编码区插入全长膜结合HA和另外一个带有截短跨膜结构域的可溶性HA蛋白,获得了能高效稳定表达H9N2 AIV的HA蛋白的基因Ⅶ型NDV减毒株重组病毒rDHN3mF-HA和rDHN3mF-2HA。通过鸡胚接种、Western blot、血凝效价(HA)及平均鸡胚致死时间(MDT)等试验来检测重组病毒的稳定性以及生物学特性,将重组病毒以10~6 EID_(50·)只^(-1)剂量免疫7日龄SPF鸡并测定血凝抑制(HI)抗体,在免疫后28 d对各组进行攻毒保护试验。结果显示:重组病毒在鸡胚中连续传至十五代后HA基因无突变发生;Western blot证明重组病毒可稳定高效地表达特异性的HA蛋白;重组病毒的生长曲线说明了重组病毒与亲本毒株具有相似的复制特性和低毒力特征;重组病毒免疫组的SPF鸡均能产生针对NDV或者H9N2 AIV的特异性HI抗体;攻毒保护试验结果:重组病毒均能对攻毒后的鸡产生100%保护效果;喉、肛拭子检测结果说明重组病毒可显著减少NDV与H9N2 AIV的体外排毒;气管与肺qPCR检测结果显示攻毒后3 d, rDHN3mF-2HA较rDHN3mF-HA更显著地降低了脏器中H9N2 AIV含量。本研究成功构建了共表达膜结合型与可溶性H9N2亚型禽流感HA蛋白的基因Ⅶ型重组NDV,为H9N2 AIV和NDV的一种新型重组基因工程二联活载体疫苗的研制与应用奠定了基础。

鸽H9N2亚型禽流感病毒的分离鉴定及致病性试验

H9N2亚型禽流感病毒属于A型流感病毒,目前H9N2亚型禽流感病毒不仅可以感染家禽,而且可以感染猪、猫等哺乳动物,甚至出现人类感染现象。因此,H9N2亚型流感病毒不仅影响畜禽的健康养殖,同时也具有一定的公共卫生学意义。近年来鸽群感染流感病毒时有报道,这其中包括H5N1、H7N9以及H9N2亚型禽流感病毒。虽然H9N2亚型禽流感毒株的致病性相对于H5和H7亚型较低,但是该亚型病毒在我国家禽中存在较为普遍,且目前从鸽子已分离到重组的H9N2毒株,该毒株不仅引起鸽子感染而且具有优先与人类呼吸道表面受体结合的能力,因此加强流感病毒在鸽群中流行情况具有重要的现实意义。

H9N2亚型禽流感病毒感染鸡呼吸道应答模式研究

【目的】通过建立H9N2亚型禽流感病毒(AIV)感染鸡上呼吸道炎症模型,探索其感染鸡上呼吸道引起的炎症反应。【方法】将H9N2亚型AIV流行毒株GD10142,按照100μL/只(108 EID 50/100μL)的剂量通过滴鼻点眼方法感染SPF鸡,并在感染后观察鸡的临床特征,采集感染后0、1、3、5、7、9 d的咽拭子和血清样品;感染后5和9 d剖检观察鸡的呼吸道和肺脏病理变化,收集气管灌洗液、气管和肺脏组织;通过实时荧光定量PCR检测咽拭子、气管灌洗液、气管和肺脏组织中的病毒载量;应用ELISA方法检测感染后血清总IgG和H9N2亚型AIV特异性IgG的变化规律,通过血清中和试验分析血清中和抗体的活性;通过ELISA方法检测血清和气管灌洗液中炎症相关细胞因子白细胞介素6(IL-6)、IL-10、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和核转录因子κB(NF-κB)的水平。【结果】H9N2亚型AIV感染后鸡没有出现典型的临床特征,但感染后1~5 d在咽拭子中可检测到病毒核酸,且感染3 d后病毒载量最高,感染5 d后检测不到病毒核酸;感染5 d时,在气管灌洗液、气管和肺脏检测到病毒核酸,其中前两者载量高于肺脏;血清总IgG和H9N2亚型AIV特异性IgG在感染后3 d增多,感染后5~9 d维持较高水平,且具有较强的病毒中和活性;血清IL-10、IL-1β、TNF-α和NF-κB也在感染后3 d开始呈上升趋势;但气管灌洗液中IL-6、IL-10、IL-1β、TNF-α和NF-κB含量很低,且感染前后无明显变化。【结论】本研究成功建立了H9N2亚型AIV感染鸡呼吸道模型,确定上呼吸道是H9N2亚型AIV主要感染和增殖部位,H9N2亚型AIV感染诱导机体产生促炎和抑炎细胞因子,可能是感染动物维持免疫稳态的重要因素。本研究为深入探索H9N2亚型AIV的致病机制和宿主防御机制奠定了基础。

空心莲子草乙酸乙酯部位体内外抗H9N2亚型禽流感病毒活性的研究

[目的]探究空心莲子草乙酸乙酯部位(ethyl acetate extract from Alternanthera philoxeroides,AETAC)体内外抗H9N2亚型禽流感病毒(H9N2 subtype Avian influenza virus, AIV-H9N2)活性及其作用机制。[方法]利用CCK-8法检测不同浓度AETAC作用不同时间对鸡胚成纤维细胞(DF-1)的抑制作用,通过预防感染、影响复制、阻止吸附及直接杀灭4种方式作用后检测AETAC对DF-1细胞的毒性,选择体外最佳抗AIV-H9N2作用方式。尿囊腔接种不同浓度AETAC确定其对鸡胚的最大安全浓度;将AETAC以3种不同给药方式作用于AIV-H9N2感染后鸡胚,选择体内最佳给药方式。经尿囊腔同时接种AETAC和AIV-H9N2,统计各组鸡胚存活数,测定血凝效价,并观察胚胎的发育情况和鸡胚法氏囊病理组织变化。[结果]在一定范围内,随着AETAC浓度升高或作用时间延长,AETAC对DF-1细胞的抑制率升高。与空白对照组相比,4种抗AIV-H9N2作用方式下,病毒对照组和药物组细胞存活率均显著降低(P<0.05);与病毒对照组相比,AETAC浓度为5~30μg/mL时,4种抗AIV-H9N2作用方式下,药物组细胞存活率均显著升高(P<0.05)。4种作用方式下,DF-1细胞存活率分别为8.15%~64.96%(预防感染)、8.56%~83.83%(影响复制)、1.82%~5.90%(阻止吸附)和6.90%~40.12%(直接杀灭)。AETAC对鸡胚的最大安全浓度为16.41 mg/mL,对感染鸡胚的最佳给药方式为AETAC和病毒混合后接种。以最佳体内作用方式给药后,AETAC中、低浓度组鸡胚存活率为40%~60%,高浓度组鸡胚全部存活,胚胎喙部发育明显,鸡胚法氏囊淋巴滤泡发育完整,滤泡大小和数量正常,充血量少,组织病理状态改善。[结论]AETAC在体内外对AIV-H9N2均具有显著的抑制作用,且主要与影响病毒复制作用方式相关。