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Notch1胞内结构域真核表达质粒构建及在H9c2心肌样细胞的表达和生物学功能
被引量:
1
1
作者
周学亮
万力
刘季春
《中国现代医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第10期1-4,共4页
目的构建Notch l胞内结构域(N1ICD)真核表达质粒,确定能在H9c2心肌样细胞内表达,并发挥生物学效应,为后续Notch1信号通路的研究提供实验依据。方法设计并合成1对含有BamH I和EcoR I酶切位点的特异性引物,以小鼠cDNA文库为模板,经PCR扩...
目的构建Notch l胞内结构域(N1ICD)真核表达质粒,确定能在H9c2心肌样细胞内表达,并发挥生物学效应,为后续Notch1信号通路的研究提供实验依据。方法设计并合成1对含有BamH I和EcoR I酶切位点的特异性引物,以小鼠cDNA文库为模板,经PCR扩增得到了1 122 bp的目的片段,定向克隆至pcDNA 3.1/myc-His质粒,构建pcDNA3.1/N1ICD-myc-His真核表达质粒。通过双酶切及基因测序鉴定,经Lipofectamine 2000转染至H9c2心肌样细胞,48 h后提总蛋白,Western-blotting检测myc和Hes1,确定N1ICD能在H9c2细胞表达,并启动下游基因表达。结果表达质粒pcDNA3.1/N1ICD-myc-His双酶切及基因测序正确,N1ICD可在H9c2心肌样细胞内高效表达,具有Notch1生物学效应。结论真核表达质粒pcDNA3.1/N1ICD-myc-His构建成功,为Notch1信号通路在心血管领域的功能研究奠定了基础。
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关键词
NOT
c
h
信号通路
胞内结构域
质粒构建
h9c2心肌样细胞
下载PDF
职称材料
题名
Notch1胞内结构域真核表达质粒构建及在H9c2心肌样细胞的表达和生物学功能
被引量:
1
1
作者
周学亮
万力
刘季春
机构
南昌大学第一附属医院心脏外科
出处
《中国现代医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第10期1-4,共4页
基金
国家自然科学基金(No:81260024)
江西省研究生创新专项资金(No:YC2011-B013)
文摘
目的构建Notch l胞内结构域(N1ICD)真核表达质粒,确定能在H9c2心肌样细胞内表达,并发挥生物学效应,为后续Notch1信号通路的研究提供实验依据。方法设计并合成1对含有BamH I和EcoR I酶切位点的特异性引物,以小鼠cDNA文库为模板,经PCR扩增得到了1 122 bp的目的片段,定向克隆至pcDNA 3.1/myc-His质粒,构建pcDNA3.1/N1ICD-myc-His真核表达质粒。通过双酶切及基因测序鉴定,经Lipofectamine 2000转染至H9c2心肌样细胞,48 h后提总蛋白,Western-blotting检测myc和Hes1,确定N1ICD能在H9c2细胞表达,并启动下游基因表达。结果表达质粒pcDNA3.1/N1ICD-myc-His双酶切及基因测序正确,N1ICD可在H9c2心肌样细胞内高效表达,具有Notch1生物学效应。结论真核表达质粒pcDNA3.1/N1ICD-myc-His构建成功,为Notch1信号通路在心血管领域的功能研究奠定了基础。
关键词
NOT
c
h
信号通路
胞内结构域
质粒构建
h9c2心肌样细胞
Keywords
not
c
h
signaling pat
h
way
intra
c
ellular domain
plasmid
c
onstru
c
tion
h
9
c
2
c
ell
分类号
R-332 [医药卫生]
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作者
出处
发文年
被引量
操作
1
Notch1胞内结构域真核表达质粒构建及在H9c2心肌样细胞的表达和生物学功能
周学亮
万力
刘季春
《中国现代医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2013
1
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