目的研究交趾黄檀Dalbergia cochinchinensis Pierre ex Laness的新黄酮类成分及其抗H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤活性。方法交趾黄檀70%乙醇提取物采用硅胶、Sephadex LH-20、反相制备HPLC进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得...目的研究交趾黄檀Dalbergia cochinchinensis Pierre ex Laness的新黄酮类成分及其抗H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤活性。方法交趾黄檀70%乙醇提取物采用硅胶、Sephadex LH-20、反相制备HPLC进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。采用CCK-8法检测其对H9c2心肌细胞的活性及对H9c2细胞缺氧/复氧损伤的保护作用,并分析其构效关系。结果从中分离得到12个化合物,分别鉴定为阔叶黄檀酚(1)、5-O-methyllatifolin(2)、mimosifoliol(3)、5-O-methydalbergiphenol(4)、dalbergiphenol(5)、cearoin(6)、2,4-dihydroxy-5-methoxy-benzophenone(7)、2-hydroxy-4,5-dimethoxybenzophenone(8)、melannoin(9)、2,2′,5-trihydroxy-4-methoxybenzophenone(10)、黄檀素(11)、4-甲氧基黄檀醌(12)。黄檀酚及黄檀内酯类化合物对H9c2细胞毒性较小,黄檀酚类化合物抗H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤活性较强。结论化合物8为新天然产物,化合物4、9为首次从该植物中分离得到。黄檀酚类化合物可能是抗H9c2细胞缺氧/复氧损伤的主要新黄酮类成分。展开更多
目的通过建立氧糖剥夺-缺氧复氧(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)损伤模型模拟心肌缺血再灌注损伤,探讨海藻糖对OGD/R大鼠H9C2心肌细胞损伤的影响及其作用机制。方法H9C2细胞分为对照组、OGD/R组、海藻糖组(OGD/R+海藻...目的通过建立氧糖剥夺-缺氧复氧(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)损伤模型模拟心肌缺血再灌注损伤,探讨海藻糖对OGD/R大鼠H9C2心肌细胞损伤的影响及其作用机制。方法H9C2细胞分为对照组、OGD/R组、海藻糖组(OGD/R+海藻糖)、联合组(OGD/R+海藻糖+ML385)。四甲基偶氮唑盐法检测细胞增殖能力,并通过检测乳酸脱氢酶及Hoechst/丙啶碘化物染色检测细胞膜受损情况。Western blot检测核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)及其下游相关蛋白表达;活性氧、线粒体膜电位检测氧化应激水平;Western blot检测凋亡相关蛋白表达。结果与对照组比较,OGD/R组细胞活力明显降低。与OGD/R组比较,不同浓度海藻糖干预能显著提升细胞活力,与海藻糖浓度呈正相关(P<0.01);与OGD/R组比较,海藻糖组线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)、Nrf2、血红素加氧酶1和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸醌氧化还原酶1、Bcl-2、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Caspase-3)表达明显增高,活性氧、丙二醛、应答元素结合蛋白1、Bax、Bax/Bcl-2、裂解型Caspase-3表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。与海藻糖组比较,联合组活性氧、丙二醛及肿瘤坏死因子α、白细胞介素(interleukin,IL)1βmRNA、IL-6 mRNA表达明显增高,MMP、GSH水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);联合组Bax、Bax/Bcl-2、裂解型Caspase-3表达明显高于海藻糖组(1.77±0.08 vs 1.20±0.20,3.41±1.45 vs 0.99±0.15,4.10±1.05 vs 1.79±0.52,P<0.01),Bcl-2、Caspase-3表达明显低于海藻糖组(0.58±0.21 vs 1.23±0.25,0.87±0.25 vs 1.45±0.31,P<0.01)。结论海藻糖可以被视为一种Nrf2激活剂,通过激活Nrf2抑制氧化应激和凋亡,改善OGD/R诱导的心肌细胞损伤。展开更多
文摘目的 探究单宁酸对缺氧诱导的H9c2心肌细胞的保护作用及机制。方法 体外培养大鼠H9c2细胞,利用条件培养基和缺氧小室建立缺氧诱导的H9c2细胞损伤模型,分为对照组、缺氧1组、低剂量单宁酸组(0.2μmol单宁酸)和高剂量单宁酸组(0.8μmol单宁酸)。利用鱼藤酮进行功能回复实验,分为缺氧2组、缺氧+鱼藤酮抑制剂组(50 nmol鱼藤酮)、缺氧+鱼藤酮抑制剂+高剂量单宁酸组(50 nmol鱼藤酮+0.8μmol单宁酸)、缺氧+高剂量单宁酸组(0.8μmol单宁酸)。细胞计数试剂盒8法和乳酸脱氢酶(LDH)评估细胞损伤;化学荧光法检测细胞内活性氧(ROS)、线粒体ROS;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot检测Nod样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、消皮素D(GSDMD)和白细胞介素1β(IL-1β)蛋白表达;酶联免疫吸附测定IL-1β分泌。结果 与对照组比较,缺氧1组H9c2细胞密度降低,贴壁不牢,细胞存活率显著降低,LDH活性、细胞凋亡率、NLRP3、裂解的(Cleaved)Caspases-1、Cleaved-GSDMD和Cleaved-IL-1β蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与缺氧组1比较,低剂量单宁酸组、高剂量单宁酸组细胞存活率显著升高,LDH活性、细胞凋亡率、NLRP3、Cleaved-Caspases-1、Cleaved-GSDMD和Cleaved-IL-1β蛋白表达水平、分泌的IL-1β水平显著降低(P<0.05)。与缺氧2组比较,缺氧+鱼藤酮抑制剂组线粒体ROS、NLRP3、Cleaved-IL-1β蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与缺氧+高剂量单宁酸组比较,缺氧+鱼藤酮抑制剂+高剂量单宁酸组的线粒体ROS(0.85±0.02 vs 0.40±0.03)、NLRP3(0.61±0.03 vs 0.47±0.05)、Cleaved-IL-1β蛋白表达水平(0.70±0.06 vs 0.48±0.09)显著升高(P<0.05)。结论 单宁酸可通过抑制ROS/NLRP3通路介导的焦亡,减轻缺氧诱导的H9c2细胞损伤。
文摘目的研究交趾黄檀Dalbergia cochinchinensis Pierre ex Laness的新黄酮类成分及其抗H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤活性。方法交趾黄檀70%乙醇提取物采用硅胶、Sephadex LH-20、反相制备HPLC进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。采用CCK-8法检测其对H9c2心肌细胞的活性及对H9c2细胞缺氧/复氧损伤的保护作用,并分析其构效关系。结果从中分离得到12个化合物,分别鉴定为阔叶黄檀酚(1)、5-O-methyllatifolin(2)、mimosifoliol(3)、5-O-methydalbergiphenol(4)、dalbergiphenol(5)、cearoin(6)、2,4-dihydroxy-5-methoxy-benzophenone(7)、2-hydroxy-4,5-dimethoxybenzophenone(8)、melannoin(9)、2,2′,5-trihydroxy-4-methoxybenzophenone(10)、黄檀素(11)、4-甲氧基黄檀醌(12)。黄檀酚及黄檀内酯类化合物对H9c2细胞毒性较小,黄檀酚类化合物抗H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤活性较强。结论化合物8为新天然产物,化合物4、9为首次从该植物中分离得到。黄檀酚类化合物可能是抗H9c2细胞缺氧/复氧损伤的主要新黄酮类成分。
文摘目的通过建立氧糖剥夺-缺氧复氧(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)损伤模型模拟心肌缺血再灌注损伤,探讨海藻糖对OGD/R大鼠H9C2心肌细胞损伤的影响及其作用机制。方法H9C2细胞分为对照组、OGD/R组、海藻糖组(OGD/R+海藻糖)、联合组(OGD/R+海藻糖+ML385)。四甲基偶氮唑盐法检测细胞增殖能力,并通过检测乳酸脱氢酶及Hoechst/丙啶碘化物染色检测细胞膜受损情况。Western blot检测核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)及其下游相关蛋白表达;活性氧、线粒体膜电位检测氧化应激水平;Western blot检测凋亡相关蛋白表达。结果与对照组比较,OGD/R组细胞活力明显降低。与OGD/R组比较,不同浓度海藻糖干预能显著提升细胞活力,与海藻糖浓度呈正相关(P<0.01);与OGD/R组比较,海藻糖组线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)、Nrf2、血红素加氧酶1和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸醌氧化还原酶1、Bcl-2、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Caspase-3)表达明显增高,活性氧、丙二醛、应答元素结合蛋白1、Bax、Bax/Bcl-2、裂解型Caspase-3表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。与海藻糖组比较,联合组活性氧、丙二醛及肿瘤坏死因子α、白细胞介素(interleukin,IL)1βmRNA、IL-6 mRNA表达明显增高,MMP、GSH水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);联合组Bax、Bax/Bcl-2、裂解型Caspase-3表达明显高于海藻糖组(1.77±0.08 vs 1.20±0.20,3.41±1.45 vs 0.99±0.15,4.10±1.05 vs 1.79±0.52,P<0.01),Bcl-2、Caspase-3表达明显低于海藻糖组(0.58±0.21 vs 1.23±0.25,0.87±0.25 vs 1.45±0.31,P<0.01)。结论海藻糖可以被视为一种Nrf2激活剂,通过激活Nrf2抑制氧化应激和凋亡,改善OGD/R诱导的心肌细胞损伤。
