2005～2006年流感季节河北省甲3亚型流感病毒血凝素重链区基因变异分析

目的：研究2005～2006年流感流行期河北省分离的甲3（H3N2）亚型流感病毒株血凝素重链（HA1）的基因特性,了解H3N2亚型流感病毒株HA1基因的变异及其与流感流行的关系。方法：用狗肾（MDCK）细胞分离培养流感病毒,提取病毒核糖核酸（RNA）,采用RT-PCR法扩增病毒HA1基因,纯化产物进行核苷酸序列测定,用DNAStar软件作分析处理。结果：2005～2006年流感流行期在河北省分离到的H3N2亚型流感病毒株HA1与同时期的H3N2亚型流感疫苗株A/Calfornia/7/04相比其抗原性变异不大,核苷酸同源性为96.2%～98.2%,氨基酸同源性为98.7%～99.0%,3个位点发生了氨基酸替换,其中2个在抗原决定簇B区（188N〉D、193S〉F）,1个在受体结合位点（225D〉N）。结论：H3N2亚型流感病毒HA1尚未发生明显变异,与疫苗株同源性较高。人群对其已建立起较好的免疫屏障,这是河北省该流行期H3N2亚型活动水平低的主要原因。

2013~2014年上饶市甲1亚型流感病毒HA1基因特性的分析

目的 了解上饶市2013~2014年分离到的甲1亚型流感病毒HA1基因变异特性和规律,分析WHO甲1亚型疫苗推荐株对上饶市甲1亚型流感的预防效果。方法 采集流感病例咽拭子标本进行病毒分离,对分离到的甲1流感病毒采用RT-PCR方法 扩增病毒基因,进行核苷酸序列测定,使用DNAStar、Mage软件对测序结果 进行分析和处理,且与WHO 2013~2014年推荐的疫苗株进行比对。结果 2013~2014年10株甲1亚型流感病毒HA1没有发现核苷酸丢失和插入,上饶市流感病毒分离株与WHO疫苗推荐株之间差异很小,只有A/JiangxiXinzhou/SWL116/2014株有2个变异位点位于抗原决定簇A区和抗原决定簇B区内。结论 2013~2014年WHO疫苗推荐株生产的疫苗对我市这两年甲1亚型流感具有一定的预防效果,可推广使用。

A/深圳/1/99(H3N2)病毒抗原性及基因特性研究

目的 了解A/深圳 /1/99(H3N2 )病毒抗原性和基因特性 ,为促进深圳地区流感监测水平和流感病毒基因库建立提供科学资料。方法 鸡胚传代病毒 ,收获尿囊液作为抗原性分析抗原并提取病毒的RNA ,进行逆转录 -聚合酶链式反应(PT -PCR) ,扩增产物用纯化试剂盒纯化后测序 ,用MegAlign软件进行基因种系发生树分析。结果 A/深圳 /1/99(H3N2 )病毒抗原与其他毒株均存在着差异 ;他的HA1蛋白分子上共有 8个潜在的糖基化位点 ,除比A/武汉 /35 9/95 (H3N2 )病毒多了一个外 ,与其他毒株均相同 ;基因发生树分析表明 ,它与A/福建 /15 1/2 0 0 0毒株最相近 ,其次最接近的为A/莫斯科 /10 /99毒株。结论 A/深圳 /1/99(H3N2 )毒株为A/福建 /15 1/2 0 0 0类似株 (国内代表性毒株 )

2007-2009年郴州市H3N2亚型流感病毒HA1基因特性研究

目的了解2007-2009年郴州市H3N2亚型流感病毒流行情况及血凝素基因变异特征。方法 按时间先后顺序随机选择2007-2009年流感病原学监测中分离到的H3N2亚型毒株8株,提取病毒核糖核酸(RNA),采用RT-PCR法扩增病毒HA1基因,纯化产物进行核苷酸序列测定并推导其氨基酸序列进行基因特性分析。结果H3N2亚型流感病毒在2007年为优势株,2008-2009年相对H1N1亚型流感病毒为弱势株;2007年分离株与该年疫苗株(A/Wisconsin/67/2005)比较,变异位点主要为G50E、S138A、K140I、R142G、N144D和L157S,抗原性发生了漂移;2008年分离株与2008-2009年疫苗株(A/Brisbane/10/2007)比较,变异位点主要为R142G、L157S;2009年分离株与该年疫苗株比较,变异位点主要为L157S、K173Q,2008-2009年分离株与该年疫苗株比较未发生明显变异。结论郴州市2007年H3N2亚型流感病毒HA1发生了明显变异,H3N2流感病毒较活跃,当年生产的疫苗预防效果较差;2008-2009年H3N2亚型流感病毒HA1与该年度疫苗株相比未发生明显变异,人群对其建立较好的免疫屏障,这是郴州市2008-2009年H3N2亚型流感病毒活动水平较低的主要原因。

H9N2亚型禽流感病毒M2e和HA2串联蛋白在原核系统中的表达

构建H9N2亚型禽流感病毒M2蛋白胞外区（M2e）和HA蛋白颈部区（HA2）串联体，并在原核系统中进行该重组蛋白的表达，以便研究重组蛋白的反应原性。以含有全长H9N2亚型AIVHA基因的质粒为模板，经过PCR扩增得到HA2基因；利用BglⅡ和BamHⅠ互为同尾酶的链接方法，构建3个拷贝M2e和HA2基因的串联体，并将串联体连接入原核表达载体pGEX-4T-1构成3M2e＋HA2-pGEX重组质粒；同时构建单独表达HA2蛋白的原核表达重组质粒HA2-pGEX；DNA测序鉴定这两种重组质粒正确后，转化至表达宿主菌中；重组蛋白经不同IPTG浓度进行诱导；SDS—PAGE电泳鉴定重组蛋白大小，并进行可溶性分析和纯化；采用Western blotting法对两种重组蛋白的反应原性进行分析。结果显示，3M2e＋HA2-pGEX和HA2-pGEX重组蛋白分别经终浓度为0．5mmol／L和0．25mmol／L的IPTG诱导，37℃培养4h时，表达量最高；3M2e＋HA2-pGEX和HA2-pGEX重组蛋白大小分别为59．4ku和49．8ku；对重组蛋白进行可溶性分析显示，两种重组蛋白均以包涵体形式存在；Western blotting分析显示，3M2e＋HA2-pGEX和HA2-pGEX重组蛋白与免疫H9N2禽流感病毒后获得的阳性血清具有良好的特异性反应，这些结果为进一步研究HA2、3M2e＋HA2蛋白的免疫原性和开发广谱H9N2亚型禽流感疫苗提供了理论依据。