转录因子NbNAC062及其纳米药物对PVY侵染的抑制作用

前期研究表明NbNAC062能够抑制PVY早期侵染,本研究通过构建NbNAC062敲除突变体和过表达植株进一步明确NbNAC062的抗病毒功能,并利用异硫氰酸荧光素(fluorescein-5-isothiocyanate,FITC)标记的壳聚糖季铵盐(chitosan quaternary ammonium salt,HACC)包被NbNAC062质粒,制备HACC-NbNAC062纳米药物。激光共聚焦显微镜对纳米药物进行示踪;透射电镜和激光粒子分析仪对其表征进行分析。通过GFP荧光差异、qRT-PCR和蛋白免疫印迹检测病毒含量来探明纳米药物对PVY侵染的影响。结果显示,敲除组病毒GFP荧光增强,而过表达组病毒GFP荧光减弱,PVY CP含量与上述结果一致。纳米药物粒径集中分布在18~32 nm之间;Zeta电位为+41.8 mV。浸润纳米药物HACC-NbNAC062后48 h,在细胞内观察到FITC-HACC(绿色荧光)与RFP-NbNAC062(红色荧光);接种PVY-GFP后5、7、9 d,NbNAC062-HACC施药组的PVY CP mRNA水平较对照组分别下调17.41%、47.81%、13.03%;第7天施药组PVY CP蛋白水平明显低于对照组,病毒荧光强度显著暗于对照组。上述研究结果说明HACC-NbNAC062纳米药物成功递送了NbNAC062,并发挥了其对PVY初期侵染的抑制作用。