基于同源加尾系统的4种腹泻病毒的多重RT-PCR检测方法

目的针对轮状病毒、诺如病毒、星状病毒和扎如病毒四种常见腹泻病毒,建立基于同源加尾(Homo-Tag AssistedNon-Dimer,HAND)系统的一步法四重RT-PCR检测方法。方法根据4种病毒基因组保守序列设计引物并在5'端加上同源尾巴序列。通过优化通用尾巴引物和特异性加尾引物的浓度等PCR参数构建四重RT-PCR反应体系,并系统评价其稳定性、特异性和灵敏度。结果成功建立基于HAND系统的4种腹泻病毒一步法多重RT-PCR检测方法。特异性分析显示四种病毒间无交叉反应,灵敏度分析显示轮状病毒、诺如病毒、星状病毒和扎如病毒的检测下限分别达到48、9.6、1.92和48 pg。结论所建立的基于HAND系统的4种腹泻病毒多重RT-PCR检测方法简便快速、灵敏特异稳定、成本低廉,非常适用于基层医学实验室。

基于同源加尾系统的改良分子信标荧光PCR检测香港海鸥形菌方法的建立

目的针对香港海鸥形菌,利用同源加尾系统(Homo-Tag Assisted Non-Dimer,简称HAND)建立一种基于改良分子信标的荧光PCR检测方法,并对这种方法进行条件优化和评价。方法根据香港海鸥形菌的基因保守序列16SrDNA基因设计探针和特异性引物,并在引物的5’端加上同源尾巴序列,减少或避免引物二聚体的形成,通过优化通用尾巴引物和特异性加尾引物的浓度与反应温度等PCR参数构建荧光PCR的反应体系。结果建立的基于HAND系统的改良分子信标PCR的检测体系引物二聚体明显减少,检出限达到20CFU/ml。结论建立的基于HAND系统的改良分子信标荧光PCR检测方法具有检测时间短、灵敏度高、特异性好的优点,能够应用于香港海鸥形菌的快速筛查。

达芬奇与妙手机器人系统辅助直肠癌直肠全系膜切除短期疗效比较研究

目的对比妙手机器人系统(Micro Hand S)与达芬奇手术机器人系统在机器人辅助直肠全系膜切除(R-TME)的短期疗效,探讨Micro Hand S在R-TME中的临床应用价值。方法2017年5月至2018年12月期间,中南大学湘雅三医院前瞻性纳入连续68例接受直肠癌的病人,均接受了Micro Hand S或达芬奇手术机器人的RTME治疗。主要评价结果为直肠全系膜切除(TME)标本的完整性。次要评价结果是环周切缘(CRM)和远端切缘(DRM)、清扫淋巴结数目、术中失血量、手术时间、手术中转率、综合并发症指数(CCI)、术后泌尿功能国际前列腺症状评分(IPSS)和大便失禁程度Wexner评分。结果37例病人接受了达芬奇手术机器人R-TME治疗,31例病人接受了Micro Hand S R-TME治疗。两组之间的TME完整性差异无统计学意义(完全TME加几乎完全TME,分别为93.5%和94.6%,P=0.944)。年龄、性别、体重指数(BMI)、肿瘤分期、手术时间、失血率、VAS评分、GOALS评分、转化率、CRM、CRM阳性率、DRM、DRM阳性率、淋巴结数目、CCI、IPSS或Wexner评分差异均无统计学意义。Micro Hand S手术机器人的装机时间较达芬奇手术机器人中位装机时间明显延长[23(15~40)min vs.15(10~40)min,P=0.001]。结论da Vinci、Micro Hand S手术机器人在R-TME中的临床应用是安全且有效的。

改良分子信标-实时PCR快速检测4种食源性致病菌

目的建立高效、特异、简便、快速的四重实时荧光PCR（real—timePCR）检测体系同时检测沙门菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特菌、大肠杆菌0157：H74种常见的主要食源性致病菌。方法从GenBank数据库中下载沙门菌侵袭性基因ssaR、金黄色葡萄球菌肠毒素nuc基因、单增李斯特菌的hlyA基因、大肠杆菌0157：H7的rfbE基因序列，设计引物和探针，利用HAND系统和多色探针编码技术，通过对PCR反应的组分和条件进行优化，建立针对肉类食品中4种食源性致病菌四重实时荧光PCR体系。结果成功建立了检测肉类食品中4种食源性致病菌四重实时荧光体系，DNA和细菌纯培养的最低检测限达到1～100fg／PCR和1～6．25CF-U／PCR，特异性均达98％以上。结论本文利用HAND系统和多色探针编码技术相结合，构建了针对4种食源性致病菌四重实时荧光PCR体系。可用于食品中食源性致病菌的快速筛查和食源性疾病暴发的快速诊断。