大鼠下丘脑HAP1表达的年龄变化及禁水对下丘脑-神经垂体HAP1表达的影响

本研究在应用免疫组织化学技术观察了享廷顿蛋白相关蛋白1(huntingtin associated protein 1，HAP1)在大鼠脑内分布特征的基础上，比较了下丘脑HAP1表达的年龄变化，观察了下丘脑视上核、室旁核HAP1与加压素(vasopressin，VP)间的关系，HAP1在神经垂体中定位，并观察了禁水对下丘脑和神经垂体中HAP1表达的影响。

大鼠视网膜中HAP1的免疫组织化学定位及不同光照条件对HAP1表达的影响

目的 探讨亨廷顿蛋白相关蛋白 1(huntingtinassociatedprotein 1,HAP1)是否存在于视网膜内及是否与视觉有关。方法 对正常大鼠眼球壁用ABC法进行免疫组织化学染色 ,观察HAP1在视网膜中的定位 ;用半定量免疫印迹方法(Westernblotting)检测不同光照条件对大鼠视网膜中HAP1表达的影响。结果 HAP1较广泛地分布在大鼠视网膜各层 ,但以内核层及外核层中免疫反应较强 ,阳性反应产物主要定位在节细胞层和内核层 /外核层中部分细胞胞体内 ;其余各层中 ,HAP1免疫反应较弱 ,阳性产物呈弥散分布 ,未见明显的阳性胞体。在连续处于黑暗环境中 72小时大鼠视网膜中 ,HAP1表达较常规光照动物明显减少 ,而连续光照 72h大鼠视网膜内HAP1表达无明显变化。结论 HAP1在视网膜中的存在及不同光照条件对视网膜HAP1表达的影响表明 ,HAP1可能与视觉活动有关。

Hap1基因氧化还原功能区I64V变异体在大肠癌中意义的探讨

目的:探讨Hap1基因氧化还原功能区I64V变异体的功能意义。方法:免疫组化方法检测具有和不具有I64V变异体的大肠癌细胞增殖指数;TUNEL法测定肿瘤细胞凋亡指数。结果:具有I64V变异体病例与不具该变异体病例的细胞增殖数分别为39.89±16.10和36.60±16.03;凋亡指数分别为2.53±0.91和2.78±1.28,均无统计学差异(p>0.05)。结论:Hap1基因氧化还原功能区I64V变异体不影响细胞的增殖与凋亡活性。

胃溃疡对大鼠胃中HAP1表达的影响

建立冰乙酸性大鼠胃溃疡模型,采用ABC法进行免疫组织化学染色,观察并探讨胃溃疡对胃壁中HAP1(huntingtin as-soc iated protein 1,HAP1)表达的影响。结果溃疡组大鼠胃壁中HAP1阳性细胞数目及光密度与正常进食的大鼠相比显著增多。

中国5个民族人群中HAP1基因编码区遗传多态性分布的研究

目的:研究中国5个民族健康人群中HAP1基因多态性分布,为建立中华民族特色的DNA修复基因多态性数据库提供基础资料。方法:PCR—SSCP分析及银染检测后,进行DNA序列测定。结果:所有样本的PCR—SSCP分析及银染检测均显示所测片段不存在多态性位点,DNA测序结果与Genebank中已知序列完全一致。结论:本实验条件下,未发现中国南方地区汉族人群及几个少数民族健康人群HAP1基因3、4。

HAP1与pro-BDNF胞吞关系的机制研究

目的:探讨HAP1与pro-BDNF胞吞的相关性和可能机制。方法:NGF诱导分化PC12细胞,利用脂质体lipofectamine2000将提取的荧光质粒HAP1A-CFP和(或)pro-BDNF-ds-red转染进入细胞,培养48h后在含有BDNF、p75NTR或sortilin抗体的DMEM/10%FCS中培养,激光共聚焦显微镜观察荧光的表达情况及其在细胞中的定位;利用培养的小鼠皮质神经元(正常型和HAP1基因敲除型)在生物素标记pro-BDNF的培养基中孵育60min,激光共聚焦显微镜观察皮质神经元免疫荧光的效果。结果:共转染HAP1A-CFP和pro-BDNF-ds-red质粒的细胞,以及pro-BDNF-ds-red荧光蛋白培养基孵育的转染HAP1A-CFP质粒的细胞,pro-BDNF与HAP1蛋白的共定位比例高达93%～97%;抗BDNF培养基孵育的共转染2种质粒的细胞,以及pro-BDNF-ds-red荧光蛋白+抗p75NTR/抗sortilin培养基孵育的转染HAP1A-CFP质粒的细胞,2种荧光蛋白的共定位比率下降近一半;pro-BDNF-ds-red荧光蛋白+抗BDNF培养基孵育的转染HAP1A-CFP质粒的细胞几乎未显示2种蛋白的共定位;正常新生小鼠皮质神经元内可见内吞的pro-BDNF免疫荧光,HAP1基因敲除小鼠的皮质神经元内未见。结论:pro-BDNF的胞吞必需HAP1的表达和参与。

慢性复合应激对大鼠胃幽门HAP1表达的影响

目的:探讨慢性复合应激大鼠胃幽门内分泌细胞亨廷顿蛋白相关蛋白1(HAP1)表达的变化及其意义.方法:大鼠12只随机分为慢性复合应激组和正常对照组.应激组动物进行6wk的垂直旋转、睡眠剥夺、捆绑(6h/d)和夜间光照等慢性复合性应激试验;实验结束后,所有动物采用免疫组织化学和Western Blot等方法检测胃幽门内分泌细胞内HAP1蛋白表达的变化.结果:HAP1在大鼠胃幽门主要表达在胃泌素细胞中.与对照组相比,慢性复合应激组大鼠胃幽门内分泌细胞内HAP1的表达增强(P<0.05).结论:慢性复合性应激大鼠HAP1在胃幽门胃泌素细胞的表达加强.

HAP1基因对人乳腺癌MDA-MB-231细胞裸鼠移植瘤放射敏感性的影响

[目的]研究HAPJ基因对人乳腺癌MDA-MB-231细胞裸鼠移植瘤放射敏感性的影响及作用机制。[方法]取对数生长期已构建好的MDA-MB-231／HAP1和MDA-MB-231／Pb稳转细胞株（5×106），接种于5周龄BALB／C雄性裸鼠左腹股沟部皮下，建立人乳腺癌裸鼠移植瘤模型，21d裸鼠皮下肿瘤长径到达0．6～0．9cm时，分为4组（n=5）：MDA-MB-231／Pb组，MDA-MB-231／HAPl组，MDA-MB-231／Pb＋放射组和MDA-MB-231／HAP1十放射组。放射组在第21d给予5Gyx线照射一次后继续饲养3周左右。期间每隔4d测量1次肿瘤的长径及短径，计算肿瘤体积。第6周时处死各组裸鼠统计瘤重。免疫组织化学方法分析Cleaved—easpase-3和Cleaved—easpase-9表达，TUNEL分析细胞凋亡。[结果]MDA-MB-231／HAPI＋放射组裸鼠肿瘤生长明显迟缓，平均体积小于其他3组（P均〈0．01），MDA-MB-231／HAP1＋放射组平均瘤重明显小于其他3组（P均〈0．01）。TUNEL凋亡实验结果表明，MDA-MB-231／Pb组细胞平均凋亡率为3．27％±1．51％．MDA-MB-231／HAP1组为36．77％±3．78％．MDA-MB．231／Pb＋放射组为46．27％±2．98％．MDA-MB-231／HAP14-放射组为83．07％±0．21％，MDA-MB-231／HAP1＋放射组凋亡率明显高于其他3组（P〈0．05）。免疫组织化学染色评分结果显示，MDA-M-231／Pb组，MDA-MB．231／HAP1组．MDA-MB-231／Pb4-放射组．MDA．MB-231／HAPl4-放射组中凋亡蛋白Cleaved．caspase-3平均积分分别为1．67±0．47，6．00±1．63，7．00±1．41和14．67±1．89，凋亡蛋白Cleaved．caspase-9平均积分分别为2．00±0．82，4．67±0．94，5．33±0．94和11．00±1．41；Cleaved—easpase3和cleaved．caspase9在MDA-MB-231／HAP11＋放射组中的水平明显高于其他3组（P〈0．05）。[结论]HAPl基因可能通过调控肿瘤细胞的凋亡来增强人乳腺癌细胞对放射治疗的敏感性。

HAP-1在慢性复合应激大鼠肾上腺的表达

目的探讨慢性复合应激大鼠肾上腺髓质细胞亨廷顿蛋白相关蛋白1(Huntingtin-associated protein 1,HAP-1)表达的变化及其意义。方法36只大鼠随机分为两组:慢性复合应激组和对照组。应激组动物进行6周的垂直旋转、睡眠剥夺、捆绑(6h/d)和夜间光照等慢性复合性应激试验;实验结束后,所有动物采用免疫组织化学、Western-blot以及RT-PCR等方法检测肾上腺髓质细胞内HAP-1蛋白和mRNA水平的变化。结果与对照组相比,慢性复合应激组的大鼠肾上腺髓质中HAP-1的表达明显增强(P<0.05),HAP-1 mRNA水平明显升高(P<0.05)。结论6周慢性复合性应激大鼠HAP-1在肾上腺髓质区的表达加强,mRNA水平提高。提示HAP-1在慢性复合应激促进肾上腺功能中可能发挥一定作用。

亨廷顿蛋白相关蛋白1在脊髓发育中的表达变化

目的观察亨廷顿蛋白相关蛋白1(huntingtin-associated protein 1,HAP1)在正常大鼠脊髓发育过程中的表达变化。方法采用免疫组织化学ABC法。结果免疫组织化学结果显示:在胚胎期HAP1阳性细胞主要分布在脊髓腹侧,背侧数量较少;随着胚龄的增加,HAP1阳性细胞在脊髓灰质中分布广泛,腹侧阳性细胞体积较小,分布较密集,背侧阳性细胞体积较大,分布较稀疏。在生后早期HAP1阳性细胞呈蝶形广泛分布在脊髓灰质内,阳性细胞体积较小,分布比胚胎期稀疏;在成年期HAP1阳性细胞主要分布在脊髓背角灰质内,背角浅层的HAP1阳性细胞体积较小,数量较少,细胞为圆形,越靠近深层阳性细胞数量越少,HAP1阳性细胞有明显的胞体和突起,胞体为圆形或椭圆形,突起细长。结论 HAP1的表达贯穿脊髓发育过程中,HAP1的表达随着胚龄的增加而发生规律性变化;生后大鼠脊髓内的HAP1阳性细胞分布与脊髓灰质的分化一致。