基于TCGA分析HAVCR2基因在食管癌中表达及其与免疫微环境的关系

目的利用TCGA数据库中转录组数据分析HAVCR2基因在食管癌中的表达及其与临床特征、免疫微环境的关系,为改进食管癌的治疗方法提供一定的理论依据。方法从TCGA公共数据库中获取食管癌组织及正常食管黏膜组织的RNA测序数据和食管癌组织所对应的临床数据。通过非参数检验分析HAVCR2在食管癌组织和正常食管组织的表达差异。根据TCGA-ESCA数据库中总生存期数据绘制HAVCR2高低表达组的Kaplan-Meier生存曲线,并进行Log-rank检验。通过单因素Cox回归分析初步找出影响食管癌患者生存状态的主要因素。最后评估HAVCR2表达与肿瘤免疫微环境之间的关系。结果HAVCR2基因在食管癌组织中表达上调,但HAVCR2基因表达与食管癌患者的总生存期无关,不能够作为食管癌的预后因子。单因素Cox回归分析显示,有淋巴结转移的食管癌患者预后较差。在肿瘤微环境的分析中,HAVCR2高表达的食管癌中免疫成分和基质成分更高,但肿瘤纯度较低。HAVCR2高表达时,肿瘤微环境中免疫细胞种类及数量增多,免疫功能可能处于激活状态。高低表达组之间免疫细胞差异和免疫检查点基因表达差异显著。富集分析显示差异表达基因主要富集于与免疫相关的通路。结论HAVCR2基因在食管癌样本中表达高于正常食管黏膜组织,与临床特征的关系并不显著,在肿瘤免疫微环境中发挥作用,表明HAVCR2基因可以为食管癌的治疗和诊断提供一定的思路。

HAVCR2基因沉默对辐射诱发基因组不稳定肝细胞凋亡及细胞周期的影响

目的研究HAVCR2基因沉默对辐射诱发基因组不稳定肝细胞凋亡及细胞周期的影响.方法利用慢病毒介导的RNA干扰（RNAi）技术沉默辐射诱发基因组不稳定肝细胞中HAVCR2基因的表达,通过流式细胞术检测HAVCR2基因沉默对细胞周期及凋亡的影响;利用实时荧光定量PCR方法检测HAVCR2基因沉默后p53基因的表达变化.结果 慢病毒介导的RNAi技术能有效沉默HAVCR2基因的表达（=19.21,P＜0.05）,与对照组相比,HAVCR2基因的沉默可导致基因组不稳定肝细胞G2期阻滞（t=-3.41,P＜0.05）,细胞凋亡率降低（=3.65,P＜0.05）;实时荧光定量PCR检测结果表明,HAVCR2基因的沉默诱发基因组不稳定肝细胞p53基因的表达下调（t=4.82,P＜0.05）.结论HAVCR2 siRNA使辐射诱发基因组不稳定肝细胞凋亡率降低,使基因组不稳定肝细胞发生G2期的阻滞.

^(60)Co γ射线诱发人正常肝细胞HL-7702 HAVCR2和MXR7基因表达变化研究

目的探讨电离辐射诱导人正常肝细胞HL-7702甲型肝炎病毒受体2(HAVCR2)和MXR7基因的表达变化,为寻找辐射致肝脏损伤早期诊断标志物提供实验依据。方法将对数生长期的人正常肝细胞HL-7702分为10组,利用中国辐射防护研究院钴-60(60Co)照射装置对各组肝细胞照射,吸收剂量率为1.29 Gy/min,吸收剂量分别为0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 Gy,利用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术检测肝细胞HL-7702 HAVCR2和MXR7基因的变化,分析剂量-反应关系。结果 HAVCR2基因表达在照射后4、24 h总体上调;其中,0.2～0.8 Gy剂量组在照射后24 h基因相对表达量与照射剂量具有很好的剂量-反应关系,满足回归方程:y=0.14x2-0.48x+1.34;1.0～3.0Gy剂量组在照射后24 h,基因相对表达量与照射剂量呈现很好的剂量-反应关系,满足回归方程:y=0.44 x+0.56。MXR7基因表达在照射后4、24 h较对照组显示出明显差异;其中,0.2～0.8 Gy剂量组MXR7基因表达在照射后4 h与对照组相比总体上调,但随照射剂量增大,上调幅度降低;照射后24 h,其基因表达未见明显规律;1.0～5.0 Gy剂量组MXR7基因表达在照射后24 h整体上调,且基因的表达与照射剂量呈现一定的剂量相关性,满足方程为y=0.57x+0.43。结论电离辐射可以诱导人正常肝细胞HL-7702 HAVCR2和MXR7基因的差异表达,且基因表达与照射剂量存在一定的剂量相关性。

TIM-3/galectin-9参与慢性淋巴细胞白血病患者T细胞的负性调控

目的探讨慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者T细胞免疫球蛋白和黏蛋白结构域分子3/半乳糖凝集素9(TIM-3/galectin-9)信号通路对调节性T细胞(Treg)及Th17细胞的调控作用及临床意义。方法采用流式细胞术检测36例健康体检者和40例初诊CLL患者外周血Treg、Th17细胞及其上TIM-3的表达,用ELISA检测血清中白细胞介素10(IL-10)、IL-17及galectin-9的水平。结果与健康对照组相比,CLL组TIM-3^+Treg、Treg/Th17细胞比值、TIM-3^+Treg/TIM-3^+Th17比值、IL-10、galectin-9水平及IL-10/IL-17比值增加;CLL患者T细胞上TIM-3、galectin-9的表达,IL-10/IL-17比值随Binet分期增加而增加。结论TIM-3/galectin-9信号通路参与CLL T细胞的负性调控。

利用TCGA数据库筛选食管鳞状细胞癌免疫相关mRNA

目的筛选食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)的免疫和预后相关特征基因。方法基于单样本基因集富集分析(ssGSEA),将TCGA数据库中的ESCC序列和临床资料分为3个免疫浸润组。应用表达数据(ESTIMATE)算法对ESCC组织中的基质细胞和免疫细胞进行分组效应评估,并应用加权基因共表达网络分析(WGCNA)筛选与免疫表型相关的共表达基因模块,挑选最相关模块中的节点基因,分析其与患者预后的相关性。结果利用ssGSEA算法,81例肿瘤样本分为高免疫组(14例)、中等免疫组(46例)和低免疫组(21例),并用HLA-I和PD-L1基因验证了分组效果。利用WGCNA获得了与免疫相关的模块,在此模块中找到6个免疫相关hub基因,其中HAVCR2 mRNA与ESCC患者生存相关。结论HAVCR2作为免疫相关基因,可能参与了ESCC的发生、发展,是ESCC潜在预后标志物。

新型免疫检查点在肿瘤治疗中的研究进展

免疫治疗在肿瘤治疗中显示出强大的生命力,其中免疫检查点的研究引起广泛关注。程序性死亡蛋白1(PD-1)和细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA4)已在肿瘤治疗中取得较好的成果。此外,一些新型检查点,如腺苷酸A2A受体(A2AR),B7同源物3(B7-H3),吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO),淋巴细胞激活基因3(LAG-3),T细胞免疫球蛋白及黏蛋白结构域蛋白3(TIM-3)/CD366和T细胞活化的Ig可变区结构域抑制物(VISTA)等正处于研究中。其中,LAG-3、TIM-3和VISTA这三个检查点的抗瘤研究较多,阻断它们也可以取得抑制肿瘤细胞增殖、增强免疫细胞活化和提高生存率等效果。另外,这三个检查点阻滞剂可以和PD-1阻滞剂等联合使用,并且已经在临床试验中取得较好疗效。我们主要总结了各新型免疫检查点的研究进展及其在肿瘤治疗中的优缺点。