辛伐他汀调控RhoA对血管平滑肌细胞增殖与迁移及纤溶活性的影响

目的:探讨不同浓度辛伐他汀调控小G蛋白RhoA及下游激酶ROCK信号对人主动脉血管平滑肌细胞(HAVSMCs)增殖和迁移,以及组织纤溶酶原激活物(t-PA)和纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)表达的影响及作用机制。方法:应用不同浓度Simvastatin(0.1μmol/L、1μmol/L、10μmol/L)处理HAVSMCs,CCK-8法和"划痕实验"分别检查细胞增殖和迁移能力,RT-qPCR检测RhoA mRNA及下游ROCK mRNA表达,应用RT-qPCR和ELISA检测纤溶活性相关t-PA/PAI-1mRNA及蛋白活性变化。结果:辛伐他汀呈浓度依赖性显著抑制HUASMCs的增殖和迁移能力。辛伐他汀能够显著抑制RhoA/ROCK信号途径,诱导PAI-1 mRNA表达下调从而抑制蛋白分泌表达,同时上调t-PA mRNA表达从而增加蛋白分泌表达,以10μmol/L辛伐他汀组处理24 h效果最为显著。结论:辛伐他汀呈浓度时间依赖性抑制RhoA/ROCK信号途径,并且上调t PA以及下调PAI-1基因转录及蛋白表达,从而促进纤溶,抑制细胞增殖和迁移。

利伐沙班对血管平滑肌细胞增殖迁移的影响

目的探究利伐沙班对血小板生长因子BB(platelet growth factor BB,PDGF-BB)诱导的人主动脉血管平滑肌细胞(human aortic vascular smooth muscle cells,HAVSMCs)增殖迁移的影响。方法选取处于对数生长期的HAVSMCs,给予20ng/ml PDGF-BB刺激24h,再用8μm利伐沙班共孵育24h。MTT法和Edu染色检测各组HAVSMCs的增殖活性,流式检测细胞周期,Transwell和划痕实验观测细胞迁移情况,Western blot法检测迁移相关蛋白E-cadherin和N-cadherin的表达量。结果与对照组比较,HAVSMC+PDGF-BB组的细胞活力、迁移能力、S期细胞数量和N-cadherin表达量都明显增加,E-cadherin表达量明显减少;相较于HAVSMC+PDGF-BB组,HAVSMC+PDGF-BB+利伐沙班组的细胞活力、迁移能力、S期细胞数量和N-cadherin蛋白表达量都显著减少,E-cadherin蛋白表达量明显增加。结论利伐沙班能有效抑制PDGF-BB诱导的血管平滑肌细胞增殖迁移,为利伐沙班治疗动脉闭塞硬化症提供一定的实验基础。

4′-甲基-7-(2-萘磺酰基)大豆素的细胞吸收及代谢研究

对新型大豆素萘磺酸酯衍生物DD的细胞吸收和代谢变化进行研究,并根据实验结果预测其可能存在的体外代谢途径。利用高效液相色谱法对DD在人主动脉血管平滑肌细胞(HAVSMCs)内的吸收和利用率进行研究,并利用液相色谱-质谱联用技术考察其细胞代谢变化。HAVSMCs对DD的吸收率达到了74.3%,远远高于大豆素的细胞吸收率。细胞代谢研究表明,DD中4′-和7-位上的取代基影响其代谢途径和代谢产物。与4′-位的甲基相比,DD的7-位的萘磺酰基更容易水解。对药物分子进行适当的结构修饰和改造,可以增强药物分子的脂溶性,进而提高药物分子在细胞中的吸收利用率,说明药物的吸收利用率与其理化性质密切相关。