ALDH3A1通过IL-6/STAT3信号通路激活GMA诱导的恶性转化16HBE细胞上皮间充质转化

目的:甲基丙烯酸缩水甘油酯(GMA)作为一种广泛应用于各种复合材料合成和改性的化学物,已被国际癌症研究机构(IARC)归类为2A类致癌物,但其具体的致癌机制仍不明确。本研究拟探讨GMA诱导16HBE细胞发生恶性转化的关键分子机制是否与醛脱氢酶3A1(ALDH3A1)的表达变化相关。方法:在课题组前期建立的GMA诱导的恶性转化16HBE细胞模型中使用瞬时转染技术过表达ALDH3A1后,分别通过Western blot和qPCR法分析IL-6/磷酸化转录3激活剂(STAT3)通路及上皮间充质转化(EMT)过程标志物E钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、基质金属蛋白酶3(MMP3)、Snail的蛋白和mRNA表达情况。结果:Western blot和qPCR检测结果表明,与对照组相比,ALDH3A1过表达组细胞中E-cadherin表达增加,而IL-6、STAT3、p-STAT3、MMP3及Snail均表达降低(P<0.05),同时MMP3、Snail、Vimentin转录水平下调(P<0.05)。ALDH3A1通过抑制IL-6/STAT3通路激活,减弱了GMA诱导的恶性转化16HBE细胞中EMT过程多个关键蛋白的表达。结论:ALDH3A1与GMA诱导的16HBE细胞恶性转化过程密切相关,并且通过IL-6/STAT3通路激活促使细胞上皮间充质转化能力增强。本研究的结果将有助于阐明GMA的致癌机制,并为GMA暴露的健康效应评估提供了潜在的生物标志物。

CMIA与ELISA法检测慢性HBV感染者HBeAg/抗HBe双阳性现象的血清学特征和方法学差异

目的研究分析慢性乙型肝炎(Chronic hepatitis B virus infection,CHB)患者检出HBeAg(+)/抗HBe(+)结果的血清学特征及其方法学差异。方法收集2019年1月~12月在西安交通大学第二附属医院感染科就诊并接受治疗、临床实验室化学发光免疫分析(CMIA)法检测乙肝病毒血清标记物结果且呈HBeAg/抗HBe双阳性的CHB病例363例。另收集酶联免疫吸附(ELISA)法检测结果呈HBeAg/抗HBe双阳性样本87例。分析HBeAg/抗HBe双阳性的CHB病例的HBV-M血清学特征和病毒学特征,并比较CMIA和ELISA法检测HBeAg/抗HBe双阳性结果之间的方法学差异。结果CMIA法检出的363例HBeAg/抗HBe双阳性样本中HBsAg阳性率98.62%,HBsAg 3~4log10 IU/ml和2~3log10 IU/ml分别占63.36%和20.11%,HBsAg<0.05 IU/ml占1.38%;抗HBs≥10mIU/ml 32例,占8.82%;HBeAg均值5.27 S/CO,1~9.99 S/CO和10~19.99 S/CO水平分别占87.88%和9.09%;抗HBe均值0.61 S/CO,≥0.10 S/CO 95.87%;HBV-DNA≥6 log10病例8.39%,HBV-DNA≥2log10病例53.28%,不同HBV-DNA水平下HBeAg和抗HBe水平存在显著性差异。87例ELISA法初检HBV-M呈HBeAg/抗HBe双阳性样本经CMIA法检测阳性率3.45%;49例CMIA法检测HBeAg/抗HBe双阳性样本的ELISA法检测阳性率4.08%。结论CHB患者HBeAg/抗HBe双阳性时HBV-M水平多样,HBV-DNA水平多样,不同方法学之间存在明显差异,ELISA法检测结果假阳性较多,建议采用CMIA法复检。

慢性乙型肝炎患者抗病毒治疗过程中出现HBeAg/抗-HBe双阳性的临床意义

目的:分析慢性乙型肝炎(CHB)患者抗病毒治疗时发生HBe Ag/抗-HBe双阳性的临床意义。方法:回顾性分析115例CHB患者抗病毒治疗过程中出现HBe Ag/抗-HBe双阳性的CHB患者,其中50例接受聚乙二醇干扰素(PEG-IFN-α-2a)治疗,65例接受恩替卡韦(ETV)治疗。观察HBe Ag/抗-HBe双阳性发生时患者的生物化学、病毒学、血清学指标情况,以及临床转归。结果:115例患者纳入分析。PEG-IFN-α-2a组50例完成治疗后,6例(12.0%)发生HBs Ag阴转,31例(62.0%)患者发生HBe Ag血清学转换;ETV组无患者发生HBs Ag阴转,23例(35.4%)患者发生HBe Ag血清学转换,PEG-IFN-α-2a组HBs Ag阴转率和HBe Ag血清学转换率均高于ETV组(χ2=8.229,P=0.004;χ2=8.038,P=0.005)。结论:干扰素治疗出现HBe Ag/抗-HBe双阳性的CHB患者,最终发生HBs Ag阴转率和HBe Ag血清学转换率均高于ETV。

分泌抗-HBe和抗-HBc单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立和鉴定

应用具有 HBeAg 和 HBcAg 双抗原活性的基因工程菌表达产物的粗提物免疫 BALB/c小鼠后,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系 SP^2/0融合,分别筛选出4株抗 HBe 单克隆抗体杂交瘤细胞株(WHBe_1,WHBe_2,WHBe_3,WHBe_4)和4株抗 HBc 单克隆抗体杂交瘤细胞株( WH-Bc_1,WHBc_2,WHBC_3,WHBc_4)。经3个月连续培养,能稳定分泌效价高、特异性强的单克隆抗体。

HBeAg、抗-HBe、HBV DNA共存与PreC/C基因变异分析

目的分析HBeAg、抗—HBe、HBV DNA共存的产生原因、临床特点。方法 Abbott法检测HBV血清标志物,HBV DNA定量测定,PreC/C基因序列测定。结果本模式76％系HBV慢性感染,24％急性感染,均有活动性肝损害;HBV DNA定量中位数4.57 copies/ml,HBeAg(P/N)32.31±87.81,抗-HBe(P/N)0.55±0.26;PreC基因83,C基因14、104、158、203、233多位点基因变异,并产生2个终止码变异。结论检测灵敏度的提高、宿主免疫反应激活、病毒基因变异是产生本模式的原因。

高效液相色谱分析在HbE筛查中的应用价值

目的探讨高效液相色谱分析法在HbE病筛查中的价值。方法应用高效液相色谱分析仪对24 779例样本进行血红蛋白(Hb)分析,HbA2≥11%的样本进行HbE基因检测。结果 24 779例标本中检出129例HbA2≥11%的样本,含量为14.0%～75.2%(27.2%±9.4%)。经基因检测均确诊为HbE病,包括HbE杂合子、HbE/α-珠蛋白生成障碍性贫血、HbE/β-珠蛋白生成障碍性贫血、HbE/α-β-珠蛋白生成障碍性贫血和HbE纯合子,其HbA2含量分别为(26.1±1.3)%、(18.2±1.8)%、(45.9±8.0)%、38.6%和(73.9±1.8)%。经ROC曲线分析HbA2筛查HbE的临界值为11.7%。结论高效液相色谱不仅能有效地筛查HbE病,还可以通过HbA2含量区分HbE病突变类型及其复合珠蛋白生成障碍性贫血的类型,是筛查HbE病的有效方法。

回顾性分析拉米夫定联合阿德福韦酯治疗HBeAg阳性失代偿期乙肝肝硬化患者的临床疗效

目的探究拉米夫定联合阿德福韦酯治疗HBeAg阳性失代偿期乙肝肝硬化患者的临床疗效。方法回顾性分析2014年1月~2015年1月收治的HBeAg阳性失代偿期乙肝肝硬化患者,共100例,将给予拉米夫定初始治疗耐药后加用阿德福韦酯挽救治疗的50名患者作为对照组,同时选取给予拉米夫定加阿德福韦酯初始联合治疗的患者50例,作为观察组,比较分析2组治疗的临床疗效。结果观察组患者治疗后HBeAg血清学转阴率26.00%显著高于对照组4.00%（P〈0.05）;观察组患者治疗后12周（9.63±1.42）、24周（8.57±1.45）、48周（7.43±1.57）Child-Pugh分级评分分数显著低于对照组（9.74±1.21）、（9.45±1.33）、（8.57±1.04）（P〈0.05）;观察组患者治疗后血清中HBV-DNA载量（2.23±1.25）显著低于对照组（5.18±1.63）,且观察组治疗后（2.23±1.25）血清中HBV-DNA载量显著低于治疗前（6.47±1.55）（P〈0.05）。结论治疗HBeAg阳性失代偿期乙肝肝硬化患者采用初始联合拉米夫定和阿德福韦酯治疗,临床效果显著,HBeAg血清学转阴率高,且Child-Pugh分级评分分数降低,改善肝脏储备功能,血清中HBV-DNA载量降低。

HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者肝脏病理改变及相关因素分析

目的：探讨HBeAg阴性的慢性乙型肝炎（CHB）患者的肝脏病理特点及其相关因素。方法：选择134例符合抗病毒治疗条件的HBeAg阴性的CHB患者，行肝穿刺活检，常规苏木素一伊红染色及嗜银染色后．采用改良的Knodell HAI评分系统进行病理分析，并检测患者血清中丙氨酸氨基转移酶（ALT）、HBVDNA、乙型肝炎血清标志物以及乙型肝炎病毒基因型。均数比较采用t检验和方差分析，非参统计采用Kruskal—Wallis检验．用多元线性回归方法分析与肝脏炎症活动和纤维化相关的因素。结果：134例HBeAg阴性CHB患者炎症活动指数（HAI）按轻度（4～8分）、中度（9～12）和重度（13～18）炎症分组，3组中病例数分别为36例（26．9％）、35例（26．1％）、63例（47．0％）。纤维化评分〈3分和≥3分的病例数分别为25例（18．7％）和109例（81．3％）。患者血清ALT水平和肝脏纤维化是肝脏炎症活动度的相关因素（t=6．687，P〈0．01；t=3．478，P〈0．01）；而患者年龄和肝脏炎症活动度是肝脏纤维化的相关因素（t=3．587，P〈0．01：t=7．136．P〈0．01）。患者性别、乙型肝炎病毒载量、乙型肝炎病毒基因型和HBeAb状态与肝脏病理改变无明显相关。结论：本研究HBeAg阴性的CHB患者中，肝脏病理改变以中、重度肝炎居多，患者血清ALT水平越高．肝脏炎症活动越重，患者年龄越大，肝脏纤维化程度越重。

慢性乙型肝炎患者血清HBeAg水平对阿德福韦酯抗病毒疗效的影响

目的探讨血清HBe Ag水平对HBe Ag阳性慢性乙型肝炎患者应用阿德福韦酯抗病毒治疗疗效的影响。方法选取2012年6月至2014年11月我科诊治的96例HBe Ag阳性慢性乙型肝炎患者,按HBe Ag水平分为低水平组(HBe Ag<500 S/CO)和高水平组(≥500 S/CO),所有患者均口服阿德福韦酯治疗,观察24个月。结果在24月末,48例血清低水平HBe Ag组完全应答、部分应答和无应答率分别为47.9%、31.2%和20.8%,显著优于48例高水平组(分别为43.7%、12.5%和43.7%,P<0.05);低水平组HBe Ag转阴率(54.2%)、HBe Ag转换率(47.9%)、HBV DNA转阴率(93.7%)明显高于高水平组(分别为27.1%、25.0%、77.1%,P<0.05);高水平组患者肝功能指标恢复差于低水平组(P<0.05)。结论 HBe Ag阳性慢性乙型肝炎患者血清HBe Ag水平对阿德福韦酯抗病毒疗效会产生一定的影响,患者血清HBe Ag水平可能与机体清除HBV免疫反应有关。

氡对HBE细胞氧化损伤的研究

探讨不同浓度氡对永生化人支气管上皮细胞(HBE)氧化损伤的影响。体外培养HBE细胞,在氡浓度一定的条件下以不同染毒时间(20000Bq/m3,10min、20min、40min)染毒HBE细胞,检测氡对HBE细胞活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的含量的影响,同时通过单细胞凝胶电泳(SCGE)检测细胞DNA链断裂情况。结果表明:随染毒时间延长,MDA和ROS含量明显上升(p<0.05),SOD活力明显下降(p<0.05),SCGE研究发现,各组HBE细胞Olive尾距随染毒时间延长显著增加,且均呈现明显的剂量反应关系。氡可诱导HBE细胞产生大量自由基造成DNA损伤,从而对HBE细胞产生毒效应。

原核和真核细胞表达HBeAg的应用研究

目的 :将原核细胞和真核细胞分别克隆表达生产的 HBe Ag,经适当纯化后进行检测分析 ,并在乙型肝炎抗HBe检测中进行应用和比较。 方法 :分别用大肠杆菌和家蚕细胞表达生产 HBe Ag,并用 Saphacryl S- 2 0 0柱层析进行纯化 ;紫外分光光度法测定表达产物的蛋白含量 ;EIA法测定 HBe Ag和 HBc Ag效价及评估 HBe Ag的应用效果。 结果 :原核细胞 HBe Ag:比活性为 10 0 0 0 / m g,HBe Ag/ HBc Ag=5 0 ,用于抗 HBe的检测时特异性为 96 % ,灵敏度符合国家卫生部 panel要求。真核细胞 HBe Ag:比活性为 16 0 0 0 0 / m g,HBe Ag / HBc Ag =5 0 0 0 ,用于抗 HBe的检测时特异性为 10 0 % ,灵敏度高于国家卫生部 panel要求的 1～ 2个滴度。 结论 :真核细胞表达的 HBe Ag比活性高而 HBc Ag含量低 ,在抗

患者的ELISA一步法检测乙型肝炎抗-HBc、抗-HBe存在假阳性

为证实酶联免疫吸附试验（ELISA）一步法检测抗-HBc和抗-HBe之间的相互交叉反应，用国产试剂对166例临床标本及266例体检标本，采用一步法和两步法检测并与Abbott产品结果比较发现其相对特异性，抗-HBc依次为50％、67．7％和98．2％、97．5％。抗-HBe依次为89．3％、88．6％和98．8％、99．2％，一步法均明显低于两步法。将两法结果不符的再与Abbott产品结果比较，抗-HBc检测临床标本存在30％和体检标本存在16％的差异，抗-HBe也分别存在12．2％和11．9％的差异，这些差异主要是试剂特异性低引起的非特异性交叉反应。因此一步法检测抗-HBc和抗-HBe存在假阳性。

血常规、Child-Pugh分级、肝功能、HBV-DNA在HBeAg阴性及阳性乙肝肝硬化患者中的对比分析

目的探讨血常规、Child-Pugh分级、肝功能及HBV-DNA在HBe Ag阴性及阳性乙肝肝硬化患者中的区别,分析HBe Ag阴性及阳性与乙肝肝硬化患者疾病进展间的关系。方法选取2013年2月至2015年2月间收治的乙肝肝硬化患者215例,根据HBe Ag检测结果分成HBe Ag阴性组(137例)与HBe Ag阳性组(78例)。分别检测两组患者的血常规指标白细胞计数(WBC)、血小板计数(PLT)、血红蛋白(HB),肝功能指标丙氨酸氨基转移酶(ALT)、血清总胆红素(TBIL)、白蛋白(ALB)、前白蛋白(PA)、凝血酶原活动度(PTA)及HBV-DNA荧光定量PCR检测;并分别记录两组患者的性别构成比、年龄、病程及Child-Pugh分级。结果两组患者性别构成及病程方面比较差异无统计学意义(P>0.05);HBe Ag阴性组年龄显著大于阳性组,差异有统计学意义(P<0.05)。HBe Ag阴性组血常规指标WBC及PLT均显著低于阳性组,差异有统计学意义(P<0.05);HBe Ag阴性组肝功能指标ALT显著低于阳性组,差异有统计学意义(P<0.05);在Child-Pugh分级方面,HBe Ag阴性组B级患者比例显著低于阳性组,而C级患者比例显著高于阳性组,差异均有统计学意义(P<0.05);HBe Ag阴性组HBV-DNA荧光定量检测的阳性率显著低于阳性组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论与HBe Ag阳性肝硬化患者相比,HBe Ag阴性患者的肝硬化程度及炎症反应较为严重,且肝脏储备功能较差;但HBe Ag阳性患者应该更加积极地配合治疗,以防止HBV突变株的产生、肝硬化的加重及进展成为肝癌。

抗HBe阳性乙型肝炎和无症状携带者的HBVC基因启动子和前C基因变异

目的 研究抗HBe阳性乙型肝炎病人和抗HBe阳性无症状携带者 (AsC)的乙型肝炎病毒 (HBV)C基因启动子 (CP)和前C基因变异。方法 通过DNA扩增、基因序列分析检测 34例抗HBe阳性和 5 5例抗HBe阴性乙型肝炎病人及 2 8例抗HBe阳性AsC的血清HBVCP和前C基因序列。结果 (1 )抗HBe阳性肝炎组的前C终止变异 (nt1 896G→A)的发生率显著高于抗HBe阴性肝炎组 (6 1 8%和 1 4 5 %) ;而CP双变异 (nt1 76 2A→T和 1 76 4G→A)则在两组中无明显差异 (5 0 0 %和4 5 5 %) ;(2 )同抗HBe阳性AsC组比较 ,抗HBe阳性肝炎组的HBVDNA定量呈高水平 ,前C终止变异的发生率也显著增高 (6 1 8%和 2 8 6 %) ;(3)同抗HBe阳性慢性乙型肝炎 (CHB)组比较 ,抗HBe阳性重型乙型肝炎 (CSH)病人的前C终止变异发生率和CP双变异发生率无明显差异 (70 0 %和5 8 3%,5 0 0 %和 5 0 0 %) ,HBVDNA定量也无明显差异 ,而CPnt 1 75 2A→G变异发生率则显著增高 (80 0 %和 2 9 2 %)。结论 前C终止变异、nt1 84 6突变和病毒复制可能与抗HBe阳性乙型肝炎发病有关 ;而Cpnt1 75 2突变则可能与抗HBe阳性CSH发病有关。

干扰素、核苷(酸)类似物单独及二者序贯治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎的比较

目的探讨干扰素、核苷（酸）类似物单独及序贯治疗在乙型肝炎病毒e抗原（HBe Ag）阳性慢性乙型肝炎（CHB）患者中的临床应用价值。方法选取2009年10月至2013年10月四川省凉山州第一人民医院长安分院收治的120例HBe Ag阳性CHB患者为研究对象,根据其就诊顺序分成A、B、C3组,各40例。其中A组患者予以聚乙二醇化干扰素α-2a（Peg IFNα-2a）治疗方案,B组患者予以恩替卡韦治疗方案,C组患者予以恩替卡韦序贯Peg IFNα-2a治疗方案。行为期12个月的治疗,比对3组患者随访末次时HBe Ag血清学转换率、乙型肝炎病毒表面抗原（HBs Ag）清除率、乙型肝炎病毒基因（HBV DNA）低于检测下限率、乙型肝炎病毒表面抗体（抗-HBs）阳转率、乙型肝炎病毒e抗体（抗-HBe）阳转率及丙氨酸氨基转移酶（ALT）复常率差异,记录3组患者治疗前后ALT、总胆红素（TBil）、白蛋白（ALB）等肝功能指标变化情况,分析随访末次3组患者肝功能分级（ChildPugh）结果差异。结果 1随访末次时,3组患者除ALT复常率差异无统计学意义（χ~2分别为0.065、1.250、1.867,P分别为0.799、0.264、0.172）外,C组患者HBe Ag血清学转换率、HBs Ag清除率、HBV DNA低于检测下限率、抗-HBs阳转率及抗-HBe阳转率均为3组最高（P均〈0.01）;其中A组患者上述指标转换率均略高于B组患者,但差异无统计学意义（χ~2分别为2.581、0.457、0.208、0.157、0.238,P分别为0.108、0.499、0.648、0.692、0.626）;2治疗后,3组患者ALT、TBil及ALB等肝功能指标均较治疗前显著降低（P=0.000）,其中C组肝功能指标为3组最低,差异具有统计学意义（P均〈0.05）,A、B两组降幅对比无统计学意义（t分别为1.446、0.143、1.226,P分别为0.235、0.854、0.382）;3随访末次时,C组患者Child-Pugh评分为组间最低且A级率为55.0%,显著高于A、B两组（P均〈0.05）;A、B两组Child-Pugh评分及分级结果差异无统计学意义（χ~2=0.000,P=1.000）。结论对HBe Ag阳性CHB患者予以核苷（酸）类似物序贯干扰素方案,疗效确切,可有效降低血清HBs Ag水平,促进患者肝功能改善,值得临床推广。

乙肝疫苗对单项抗-HBc、抗-HBe及抗-HBc均阳性者抗-HBs产生的探讨

[目的]探讨接种乙肝疫苗对促进乙肝抗-HBc单项阳性及抗-HBe、抗HBc 2项同时阳性者产生抗-HBs的作用。[方法]对抗-HBc单项阳性及抗-HBe、抗HBc 2项同时阳性者,进行乙肝疫苗接种。接种全程结束后1个月,抽血作抗-HBs检查。[结果]接种乙肝疫苗后,抗-HBs总阳转率为92.59%,抗-HBc阳性者抗-HBs阳转率为94.74%,抗-HBe、抗-HBc 2项同时阳性者阳转率为87.5%。男性抗-HBs阳转率为93.33%,女性为91.67%。[结论]接种乙肝疫苗对抗-HBc单项阳性及抗-HBe、抗-HBc 2项同时阳性者,有促进抗-HBs产生的作用。

2例假性HbE纯合子的实验室鉴别诊断

ＨｂＥ是常见的异常Ｈｂ，ＨｂＥ纯合子偶有报道，假性Ｈｂ纯合子在区内尚未见报道，假性ＨｂＥ纯合子实质上是一组ＨｂＥ和β地贫双重杂合子复合α地贫１的临床综合征，现将２例假性ＨｂＥ纯合子的鉴别诊断报告如下。例１，男，３５岁，因生育的地贫患儿夭折而欲进行产前...