HBsAg和抗HBs抗体同时阳性患者病毒学特征分析

目的分析HBsAg和抗HBs抗体同时阳性的HBV感染者病毒学特征及其临床意义。方法总计13 080例HBsAg阳性病例中,HBsAg与抗HBs抗体同时阳性476例,分析资料完整的113例患者(研究组)HBV血清标志物(HBVM)和HBVDNA定量、抗HBc IgM抗体及ALT结果,并与76例普通HBV感染者(对照组)进行比较。结果研究组与对照组在年龄、男女性别比及HBeAg阳性率间差异无统计学意义。研究组HBsAg水平显著低于对照组(P<0.05)。研究组抗HBc IgM抗体阳性率为30.9%,抗HBc IgM抗体阳性患者的血清HBsAg与HBV DNA水平、HBeAg阳性率及ALT水平均显著高于抗HBc IgM抗体阴性患者(P<0.05)。结论 HBsAg与抗HBs抗体同时阳性感染者HBsAg水平显著低于普通感染者,提示患者体内的抗HBs抗体可能仍起到一定作用;约30%患者可能处于HBV急性发作状态,应对其进行随访,观察疾病转归。

重组人抗HBs-Fab抗体的纯化及结构分析

目的研究重组人抗HBs-Fab抗体的纯化工艺,并对其结构等特性进行分析。方法采用离子交换-分子筛层析法分离纯化由酵母工程菌(GS115/Fab)发酵的重组人抗HBsAg Fab抗体,并经ELISA检测其抗体活性,等电聚焦电泳法检测其等电点(pI),基质辅助激光解吸飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)检测其相对分子质量和肽质量图谱。结果纯化的重组Fab抗体的纯度可达90%以上,经Sephacryl-100进一步层析后,纯度达99%以上,总收率可达80%以上。Fab抗体具有较好的抗体活性,其pI值为7·6,为一碱性蛋白,相对分子质量为50494,比其理论值约多2579·35,经Endoglycosidase H内切酶消化后的相对分子质量为49609,证明Fab的一级结构中有糖基化现象,且分布于Fab抗体的H链和L链上。胰酶酶解肽段中有21个与理论肽段相符,另检测到1对二硫键正确。结论已建立了重组人抗HBs-Fab抗体的稳定的纯化工艺,且Fab抗体的一级结构正确。

人源抗-HBs Fab与IFN-α融合蛋白的克隆与原核表达

目的:构建人源单克隆抗-HBs Fab-IFN-α表达载体,探讨该融合蛋白原核表达的可行性及其生物学活性。方法:用PCR体外扩增目的基因IFN-α,单酶点插入已含人源抗-HBs Fab基因的载体,插入点位于轻链基因3′未端。利用酶切、PCR鉴定筛选正确插入的阳性克隆,转化大肠杆菌,挑选单克隆表达、纯化目的蛋自,用ELISA 方法检测融合蛋白IFN-α的抗原性及其抗体亲和性,用WISH细胞检测IFN-α生物学活性。结果:利用插入了人源抗-HBs Fab基因及IFN-α基因的pBAD／gⅢA原核表达系统,成功表达了具生物活性的λ轻链与IFN-α的融合蛋白,其既具有与抗-HBs Fab相近的HBsAg的亲和力,又具有干扰素的活性。结论:λ轻链与IFN-α融合蛋白的成功表达表明,应用原核系统能够同时表达某些特异抗体和其介导的部分生物活性因子,是一种经济、有效的方法,为特异抗体及其介导融合蛋白的制备和临床应用提供了线索。

72例HBs—Ab单项阳性合并HBV—DNA阳性的临床分析

目的 了解乙肝表面抗体（HBs—Ab）单项阳性时HBV—DNA含量及其复制情况，明确其是否具有传染性，探讨其可能意义。方法 采用ELISA法检测乙肝病毒标志物（HBV—M）1486例，然后用荧光定量聚合酶链反应（FQ—PCR）技术检测HBV—DNA，同时常规检测肝功能。结果 共检测出单项HBs—Ab（＋）72例，HBV—DNA阳性率为22．22％（16／72）。14例既往有乙肝疫苗注射史，HBV—DNA阳性率为0％；58例未注射乙肝疫苗，HBV—DNA阳性率为27．59％（16／58）。HBV—DNA（＋）的16例中定量小于105cop／mL占68．75％（11／16），105—107cop／mL的占31．25％（5／16），〉107cop／mL的为0。结论 注射乙肝疫苗组单项HBs—Ab（＋）确为机体产生的保护性抗体。未注射乙肝疫苗组单项HBs-Ab（＋）病例中大部分HBV复制停止．HBs—Ab也确为机体产生的保护性抗体；但有少数病例HBV仍呈低、中度复制，具有一定的传染性，可能成为隐匿感染源，在选择血源和器官移植供体时应引起高度重视。

用蛋白Ⅷ在噬菌体表面展示抗体分子效果的观察

目的 观察抗体分子通过丝状噬菌体主要外壳蛋白Ⅷ（ｃｐⅧ）和次要外壳蛋白Ⅲ（ｃｐⅧ）在噬菌体表面呈现效果的差异。方法 分别构建通过ｃｐⅧ或ｃｐⅧ展示抗乙肝表面抗原（ＨＢｓ）Ｆａｂ、ＳｃＦＶ和抗角蛋白（Ｋｅｒ）Ｆａｂ的表达载体，制备噬菌体抗体，比较其抗原结合活性和Ｆａｂ呈现水平。用多种方法尝试提高ｃｐⅧ 介导的噬菌体展示效果。结果ｃｐⅧ对不同特异性抗体Ｆａｂ段和不同形式的小分子抗体（Ｆａｂ和ＳｃＦｖ）的展示效果均低于ｃｐⅧ的展示，增加 ｃｐⅧ-Ｆａｂ对野生型 ｃｐⅧ的表达比例、试用不同菌株、在Ｆａｂ和ｃｐⅧ之间插入间隔序列及换用控制更为严密的启动子等措施，均未能改善ｃｐⅧ介导的噬菌体展示。结论 以前所报道的通过ｃｐⅧ多价展示Ｆａｂ段不是普遍存在的现象，对有些抗体基因不能达到多价展示。

夫妇双方肝功损害的差别

为了解夫妇间肝功损害及病毒性肝炎的关系,文章对健康检查资料调查结果进行了报道。 调查对象为225对夫妇,男方平均年龄为48±4.6岁,女方为46±4.4岁。检查对比项目:ZTT、GOT、GPT、γ—GTP、HBs抗原抗体、HCV抗体。肝功损害诊断标准:ZTT】12.1单位、GOT】41KU、GPT】36KU、γ—GTP】611U/L者。 结果 男女方ZTT平均值(单位)分别为7.4±3和10.1±3.6,GOT(KU)分别为21±12.0和18±8.8,γ—GTP(IU/L)分别为26±39.7和12±11.6,HBs抗体(+)