HBsAg真核表达质粒的构建和鉴定

目的 构建HBsAg真核表达质粒 .方法 用PCR的方法从质粒pEcob6中扩增出HBsAg基因 ,并定向克隆到真核表达质粒pcDNA3 .1(+) ,构建成重组质粒pcDNA3 .1-S ;然后用限制性内切酶消化和DNA序列测定鉴定 .结果 经酶切和DNA序列测定鉴定 ,证实重组质粒构建正确 .结论 真核表达质粒pcDNA3 .

不同时间采集的小牛血清对CHO-C_(28)细胞培养及表达的影响

通过研究小牛血清对CHO-C28细胞培养及HBsAg表达的影响,探讨小牛血清的不同采集时间对血清质量的影响。采集出生后4、8、12h(未进食)小牛的血清,对CHO-C28细胞进行传代、换液培养,并检测乙肝表面抗原(HBsAg)表达量。结果可见:①在细胞传代4次时,4h采集的血清细胞生长状态良好,8h采集的血清细胞出现明显的衰老,12h采集的血清细胞大面积死亡;②在细胞维持换液方面,4h采集的血清可维持细胞换液25次以上,8h采集的血清可勉强维持20次,12h采集的血清维持细胞换液10次时已大部分死亡;③乙肝表面抗原(HBsAg)表达量的检测结果,同批培养上清,4h采集的血清培养细胞表达量最高。可见,小牛出生后采集血清时间越早越好。

乙型肝炎病毒感染孕妇孕期及产后病毒载量与抗原表达的动态变化

目的：探讨妊娠对乙型肝炎病毒（HBV）感染孕妇病毒复制及抗原表达的影响。方法：选取2008年9月-2014年3月孕前肝功能正常的371例乙型肝炎表面抗原（HBsAg）阳性孕妇为研究对象,本研究共有5个不同的采血时期,分别为孕中期（孕25-28周）、分娩时（分娩前后各2天）、产后6-8周、产后7-12个月及远期随访〔平均（4.8±1.1）年〕,每例孕妇至少观察两个时间点。采用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测HBV血清学标志,采用实时荧光定量PCR法检测HBV DNA水平,应用S基因测序确定病毒基因型。结果：371例孕妇中,34例乙型肝炎e抗原（HBeAg）阳性孕妇在孕期或产后出现谷丙转氨酶（ALT）升高;孕中期或分娩时HBV DNA水平及HBsAg浓度与产后7-12个月比较,差异均无统计学意义（P〉0.05）,仅HBeAg浓度在产后7-12个月有所降低（P〈0.05）。337例ALT正常者中,77例孕中期HBeAg阳性孕妇及其产后7-12个月的HBV DNA均为7.94 log IU/ml,HBsAg分别为4.54 log IU/ml和4.61 log IU/ml,HBeAg分别为3.10 log S/CO和3.09 log S/CO（P〉0.05）。70例分娩时HBeAg阳性孕妇及其产后7-12个月的HBV DNA分别为7.73 log IU/ml和7.98 log IU/ml,HBsAg分别为4.46 log IU/ml和4.59 log IU/ml,HBeAg分别为3.09 log S/CO和3.08 log S/CO（P〉0.05）。173例HBsAg阳性孕妇孕中期与远期随访比较,其中HBeAg阳性28例,HBV DNA分别为8.06 log IU/ml和7.95 log IU/ml（P=0.973）,HBsAg分别为4.82 log IU/ml和4.79 log IU/ml（P=0.062）,HBeAg分别为2.96 log S/CO和2.94 log S/CO（P=0.414）;另145例HBeAg阴性孕妇孕中期与远期随访比较,其中HBV DNA分别为2.62 log IU/ml和2.82 log IU/ml（P=0.171）,HBsAg分别为3.45 log IU/ml和3.44 log IU/ml（P=0.055）。此外,对17例肝功能正常孕妇孕中期、分娩时、产后6-8周及产后7-12个月的动态观察结果显示：其HBV DNA水平在不同时期均无明显波动,HBsAg及HBeAg浓度也无明显变化（P〉0.05）。结论：不论肝功能正常与否,HBsAg阳性孕妇在不同孕期及产后时期,血清中HBV DNA水平和病毒抗原浓度均无明显变化,说明妊娠对HBV感染者体内病毒复制以及抗原表达无显著影响。

肝癌组织中HBsAg的特殊表现形式

湖南医科大学研究生周金莲,在导师梁英锐教授等指导下进行的肝癌及癌旁组织HBV-DNA原位杂交和HBsAg免疫组化双标记研究发现,HBsAg具有特殊表现形式。