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HBV-HCC中HBx与免疫微环境的交互作用
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作者 刘青青 王祥旭 +2 位作者 纪洪辰 艾丽萍(综述) 张红梅(审校) 《西部医学》 2024年第3期464-468,共5页
乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)是乙型肝炎病毒X基因(HBX)将自身DNA整合至人基因组,进而合成的多功能蛋白。HBX基因的表达受肝细胞免疫、微环境和机体免疫的监视和调控,其表达的蛋白也可通过激活肝星状细胞、参与机体免疫调节、调控炎性细胞因... 乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)是乙型肝炎病毒X基因(HBX)将自身DNA整合至人基因组,进而合成的多功能蛋白。HBX基因的表达受肝细胞免疫、微环境和机体免疫的监视和调控,其表达的蛋白也可通过激活肝星状细胞、参与机体免疫调节、调控炎性细胞因子和诱导细胞外基质重塑等参与肝细胞癌(HCC)抑制性免疫微环境的形成。HBx与免疫微环境的相互作用是影响乙肝病毒相关肝细胞癌(HBV-HCC)发生、发展的主要因素之一。深入研究HBx与免疫微环境相互作用机制,探索促进HBV-HCC抑制性免疫微环境形成的机制,有助于开发新型抗HCC药物,改善患者预后。本文就HBx与HBV-HCC免疫微环境的研究进展进行综述。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒x基因(HBx) 乙型肝炎病毒x蛋白(HBx) 乙型肝炎病毒相关肝细胞癌(hbv-HCC) 肿瘤免疫微环境 交互作用
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Construction of eukaryotic expression vector of HBV x gene 被引量:10
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作者 GUO Shuang Ping 1, MA Zhou Sheng 2 and WANG Wen Liang 1 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 1999年第4期79-80,共2页
INTRODUCTIONChronicinfectionwithhepatitisBvirusiscloselyrelatedtoliverdiseases,includinghepatocelularcarcino... INTRODUCTIONChronicinfectionwithhepatitisBvirusiscloselyrelatedtoliverdiseases,includinghepatocelularcarcinoma.HepatitisBviru... 展开更多
关键词 hbv x gene carcinoma hepatocellular ExPRESSION VECTOR liver neoplasms gene ExPRESSION
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THE EXPRESSIONS OF HBV X GENE AND ets-2, IGF-Ⅰ, c-myc AND N-ras ONCOGENES IN HUMAN HEPATOCELLULAR CARCINOMA AND TUMOR-ADJACENT TISSUES 被引量:1
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作者 连兆瑞 吴孟超 +3 位作者 万大方 徐国威 周筱梅 顾健人 《Chinese Journal of Cancer Research》 SCIE CAS CSCD 1990年第3期15-19,共5页
The expressions of HBV X gene and ets-2, IGF-I, c-myc and N-ras were studied in 7 pairs of human primary hepatocellular carcinoma (PHC) and tumor-adjacent tissues, using RNA hybridization and im-munoblot methods. The ... The expressions of HBV X gene and ets-2, IGF-I, c-myc and N-ras were studied in 7 pairs of human primary hepatocellular carcinoma (PHC) and tumor-adjacent tissues, using RNA hybridization and im-munoblot methods. The results showed that specific 17 and 28 kD HBV X gene products (HBxAg) were existed in a portion of PHC and tumor-adjacent tissues. The 17 kD HBxAg was detected in the sera of 3 patients who also had 17 kD HBxAg in their liver tissues. Multiple expressions of oncogenes such as ets-2, c-myc and N-ras were observed in PHC and tumor-adjacent tissues that had HBxAg expressed, indicating HBxAg might function as a transactivator in the course of intracellular proto-oncogene activation. It is also observed that in some tumor-adjacnet tissues the expressions of ets-2, c-myc and N-ras were higher than those in corresponding PHC. The relationship of HBxAg to the expression of est-2, IGF-Ⅱ, c-myc and their possible roles in the carcinogenesis of PHC are discussed. 展开更多
关键词 PHC IGF c-myc AND N-ras ONCOgeneS IN HUMAN HEPATOCELLULAR CARCINOMA AND TUMOR-ADJACENT TISSUES THE ExPRESSIONS OF hbv x gene AND ets-2 hbv
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Study of Hepatitis B Virus Genotypes and Mutation in 1762 &1764 Nucleotides of X Gene in Chronic HBV Patients from Golestan Province—Iran
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作者 Sareh Zhand Ghassem Rostamian +1 位作者 Alijan Tabarraei Abdolvahab Moradi 《Health》 CAS 2016年第13期1397-1401,共6页
Introduction: More than 350 million people are chronic carriers of HBV and many of them develop progressive diseases, including cirrhosis and hepatocellular carcinoma. Many of those infected develop persistent disease... Introduction: More than 350 million people are chronic carriers of HBV and many of them develop progressive diseases, including cirrhosis and hepatocellular carcinoma. Many of those infected develop persistent disease and a proportion goes on to develop liver failure and cancer. Researchers showed that double mutations of the x gene at position 1762 and 1764, have been found in chronic hepatitis B. These mutations were proposed to be associated with fulminant hepatitis B increasing risk of hepatocellular carcinoma. This project aimed to investigate mutation in the x gene region of HBV infected patients in Golestan province, Iran. Method: 100 patients were entered in this study. Hepatitis B viral DNA was extracted from plasma and PCR was performed using specific primers. Direct sequencing and alignment of x gene were applied using reference sequence from Gene Bank database (Okamoto, 1988;Accession number AB033559). Results: Among the chronic HBV patients 51% were male. The results showed that 49% of patients had A1762T, G1764A mutations changing AGG to stop codon TGA. 27% and 24% of cases were showed mutation only in A1762T and G1764A positions respectively. Conclusion: This study was shown presence of X gene mutation in HBV infected people in Golestan province, Iran. The rate of mutation in two positions 1762 and 1764 of HBV genotype D X gene was higher than the average rate of the world (34%). 展开更多
关键词 hbv x gene MUTATION GENOTYPE Iran
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PCR扩增HBV x基因特征序列检测乙肝病毒DNA 被引量:3
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作者 冯波 邓文斌 +3 位作者 肖文勇 唐波 赵耀宗 吴坤强 《湘潭大学自然科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期84-88,共5页
提出了通过扩增特征序列检测乙肝病毒DNA的新方法.根据乙肝病毒DNA保守区的特点,利用Primer Premier5.0设计出乙肝病毒x基因的特异性引物,并在以血清DNA为模板的聚合酶链反应体系中进行扩增,由此检测待测血清中是否存在乙肝病毒DNA.实... 提出了通过扩增特征序列检测乙肝病毒DNA的新方法.根据乙肝病毒DNA保守区的特点,利用Primer Premier5.0设计出乙肝病毒x基因的特异性引物,并在以血清DNA为模板的聚合酶链反应体系中进行扩增,由此检测待测血清中是否存在乙肝病毒DNA.实验结果表明,该方法较传统的酶联免疫法灵敏,可以检测出酶联免疫法所检测不到的乙肝病毒,具有与免疫印迹一样的准确度;通过与以乙肝病毒s基因为靶序列的PCR反应体系比较,发现乙肝病毒x基因比s基因在序列上更为保守,更适合做乙肝病毒DNA检测的特征序列. 展开更多
关键词 乙肝病毒 x基因 特征序列 聚合酶链反应 酶联免疫法
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HBV_x基因真核表达载体的构建及对肝癌细胞恶性表型的影响 被引量:7
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作者 郭双平 王文亮 翟宇强 《第四军医大学学报》 北大核心 2001年第13期1161-1165,共5页
目的 构建乙型肝炎病毒 x基因真核表达载体并在肝癌细胞中表达 ,以研究其对肝癌细胞恶性表型的影响 .方法 应用 PCR、基因克隆等方法构建乙型肝炎病毒 x基因真核表达载体 pc DNA3.1 -HBX,用基因转染的方法将 pc D-NA3.1 -HBX转染入肝... 目的 构建乙型肝炎病毒 x基因真核表达载体并在肝癌细胞中表达 ,以研究其对肝癌细胞恶性表型的影响 .方法 应用 PCR、基因克隆等方法构建乙型肝炎病毒 x基因真核表达载体 pc DNA3.1 -HBX,用基因转染的方法将 pc D-NA3.1 -HBX转染入肝癌细胞 HCC-92 0 4,筛选稳定表达乙型肝炎病毒 X蛋白的肝癌细胞 .MTT比色实验、平板集落形成实验检测肝癌细胞恶性表型 .结果 成功构建了乙型肝炎病毒 x基因真核表达载体 pc DNA3.1 -HBX并获得了稳定表达乙型肝炎病毒 X蛋白的肝癌细胞系 HCC-92 0 4细胞克隆 ,且MTT比色实验、平板克隆形成实验显示稳定表达乙型肝炎病毒 X蛋白的肝癌细胞恶性度增高 .结论 乙型肝炎病毒 X蛋白具有生长因子样作用 ,可刺激肝癌细胞生长 ,在肝癌细胞中稳定表达乙型肝炎病毒 X蛋白可增加肝癌细胞恶性表型 . 展开更多
关键词 原发性肝癌 乙型肝炎病毒x基因 真核表达载体 构建 基因克隆
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构建不同筛选特性的HBV X基因真核表达载体 被引量:2
7
作者 贺兴鄂 雷建华 +3 位作者 杨旭 王文龙 罗红雨 梁骏 《中西医结合肝病杂志》 CAS 2005年第5期274-276,共3页
目的:构建不同筛选特性的两个HBV X基因真核表达载体。方法:从质粒pEcob6中PCR扩增HBV X全基因,利用pCEP4和pcDNA3.1(+)两者多克隆位点的特点,选用pGEMR○-T Easy Vector构建中间载体pEasy-X,分别酶切后连接特异性片段构建载体pCEP4-X和... 目的:构建不同筛选特性的两个HBV X基因真核表达载体。方法:从质粒pEcob6中PCR扩增HBV X全基因,利用pCEP4和pcDNA3.1(+)两者多克隆位点的特点,选用pGEMR○-T Easy Vector构建中间载体pEasy-X,分别酶切后连接特异性片段构建载体pCEP4-X和pcDNA3.1(+)-X。结果:从质粒pEcob6成功PCR扩增出HBV X全基因并克隆至质粒pEasy-X,酶切、PCR及测序均证实真核表达载体质粒pCEP4-X和pcDNA3.1(+)-X构建成功。结论:具有不同筛选特性的两个HBV X基因真核表达载体业已成功构建。 展开更多
关键词 hbv x基因 真核表达载体 构建 基因真核表达载体 hbvx 筛选 PCDNA3.1(+) PCR扩增 载体质粒 特异性片段 多克隆
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HBV X基因在大肠杆菌中高效表达及血清抗X抗体检测 被引量:2
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作者 童贻刚 黄耀煊 邬光惠 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1993年第3期252-255,共4页
本文分别用大肠杆菌(E.colf)的Lpp启动子和M13噬菌体的geneⅡ启动子表达了分子量约为17 kDa的HBx蛋白,并以抗合成X多肽抗血清和抗X融合蛋白抗血清对该重组蛋白进行了分析鉴定(用ELISA法和Western印迹法),然后用重组X蛋白检测肝病病人血... 本文分别用大肠杆菌(E.colf)的Lpp启动子和M13噬菌体的geneⅡ启动子表达了分子量约为17 kDa的HBx蛋白,并以抗合成X多肽抗血清和抗X融合蛋白抗血清对该重组蛋白进行了分析鉴定(用ELISA法和Western印迹法),然后用重组X蛋白检测肝病病人血清中抗X抗体。我们采用一种改进的ELISA方法检测了212份血清标本,结果表明:肝硬化,慢活肝、肝癌、慢迁肝和急性乙型肝炎病人血清中抗X抗体阳性率分别为49.3%、47.6%、37.8%、29.6,6和40.0,6,高滴度的抗体主要存在于肝硬化和慢活肝病人血清中。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 基因表达 x抗体
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HBVX基因与肝细胞恶性转化相关性的初步研究 被引量:1
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作者 林松挺 杨玉珍 程斌 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2007年第1期36-40,共5页
目的研究HBVX基因对L02肝细胞生物学特性的影响,初步探讨HBVX基因在肝细胞恶性转化中的作用,为进一步研究HBx致原发性肝细胞癌(HCC)的机制及HCC新的防治策略奠定基础。方法构建稳定表达HBx的转基因细胞株L02/HBx,运用倒置相差显微镜、... 目的研究HBVX基因对L02肝细胞生物学特性的影响,初步探讨HBVX基因在肝细胞恶性转化中的作用,为进一步研究HBx致原发性肝细胞癌(HCC)的机制及HCC新的防治策略奠定基础。方法构建稳定表达HBx的转基因细胞株L02/HBx,运用倒置相差显微镜、四唑盐(MTT)比色试验、流式细胞仪观察和检测L02/HBx在形态学、增殖、凋亡和细胞周期等方面的变化。结果成功构建L02/HBx,观察发现细胞形态发生明显改变,MTT检测结果表明L02/HBx生长速度加快但经阿霉素(ADM)处理后凋亡速度加快。流式细胞仪(FCM)检测结果显示,与对照组细胞相比,L02/HBx凋亡率及G1期细胞比例降低,S期细胞所占比例增高,二倍体细胞比例降低,非整倍体细胞比例增高。经阿霉素处理后,L02/HBx细胞的凋亡率大大增加,G1期细胞的比例仍比对照组低,S期细胞的比例亦比对照组高,二倍体细胞的比例显著降低,非整倍体细胞的比例明显增加。结论HBx能引起细胞增殖失控而导致恶性转化,在凋亡因子的作用下,HBx抑制损伤DNA的修复而促进细胞凋亡,并可能引起细胞的变异而导致恶变。 展开更多
关键词 hbv x基因 肝细胞 恶性转化 HCC FCM
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乳糖化赖氨酸与反义x基因质粒复合物体外对HBV表达的抑制 被引量:1
10
作者 王学东 冯永堂 +3 位作者 陈相英 苗乃法 鞠吉雨 张灿 《中国生化药物杂志》 CAS CSCD 2005年第4期205-207,共3页
目的研制一种能把基因药物定向导入肝脏组织的小分子肝靶向药物载体。方法用还原氨化法合成乳糖化赖氨酸(Lac-Lys)共价结合物作为肝靶向药物载体。将含HBV反义x基因的质粒在一定条件下与Lac-Lys制成复合物后转染HepG2.2.15。用酶联免疫... 目的研制一种能把基因药物定向导入肝脏组织的小分子肝靶向药物载体。方法用还原氨化法合成乳糖化赖氨酸(Lac-Lys)共价结合物作为肝靶向药物载体。将含HBV反义x基因的质粒在一定条件下与Lac-Lys制成复合物后转染HepG2.2.15。用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清中的HBsAg和HBeAg。结果经红外光谱定性,成功制备出了Lac-Lys的共价结合物;此共价结合物能与质粒DNA形成复合物,经细胞培养观察可将质粒DNA载入细胞;抗原检测结果显示,含有反义xDNA的质粒在细胞内能有效抑制病毒的复制。xDNA与Lac-Lys的最佳比例是1∶5,最大抑制率是73.2%。结论合成的Lac-Lys可将反义x基因质粒定向载入细胞内,并有效抑制HBsAg和HBeAg的表达。 展开更多
关键词 乳糖化赖氨酸 合成 反义x基因 hbv
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两个不同筛选特性的表达HBV X基因肝癌细胞模型的建立
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作者 贺兴鄂 雷建华 +3 位作者 杨旭 王文龙 罗红雨 梁骏 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期636-639,共4页
目的:构建两个不同筛选特性的表达HBV X基因肝癌细胞模型。方法:应用脂质体介导转染克隆有HBV X全基因真核表达载体pCEP4-X和pcDNA3.1(+)-X入肝癌细胞HepG2,hygromyc in和neomyc in筛选单细胞克隆,传代培养一定时期后应用PCR,RT-PCR和W ... 目的:构建两个不同筛选特性的表达HBV X基因肝癌细胞模型。方法:应用脂质体介导转染克隆有HBV X全基因真核表达载体pCEP4-X和pcDNA3.1(+)-X入肝癌细胞HepG2,hygromyc in和neomyc in筛选单细胞克隆,传代培养一定时期后应用PCR,RT-PCR和W estern b lot方法鉴定HBV X基因的表达。结果:转染后成功筛选出耐hygromyc in或neomyc in的单细胞克隆,并能传代培养一定时期。PCR,RT-PCR和W estern b lot结果显示HBVX基因获得表达。结论:成功构建不同筛选特性的两个HBV X基因表达肝癌细胞模型。 展开更多
关键词 hbv x基因 真核表达载体 肝癌细胞
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HBV pre-X转染HepG2细胞后差异表达基因的筛选 被引量:2
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作者 柴艳云 张锦前 +2 位作者 赵龙凤 王琪 成军 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2008年第33期3724-3728,共5页
目的:检测HBV pre-X在真核表达载体pcDNA3.1-myc-his-HBV pre-X转染的HepG2细胞中的表达,并筛选其中的代谢相关差异表达基因.方法:将构建的真核表达载体pcDNA3.1-myc-his-HBV pre-X转染HepG2细胞后蛋白免疫印迹检测;将pcDNA3.1-myc-his-... 目的:检测HBV pre-X在真核表达载体pcDNA3.1-myc-his-HBV pre-X转染的HepG2细胞中的表达,并筛选其中的代谢相关差异表达基因.方法:将构建的真核表达载体pcDNA3.1-myc-his-HBV pre-X转染HepG2细胞后蛋白免疫印迹检测;将pcDNA3.1-myc-his-HBV pre-X和pcDNA3.1-myc-his载体分别转染HepG2细胞后,提取mRNA后逆转录为cDNA,运用基因表达谱芯片技术分析差异表达基因.结果:构建的真核表达载体经ApaⅠ、BstⅪ双酶切鉴定,转染HepG2细胞后HBV pre-X表达经蛋白免疫印迹证实;经基因表达谱芯片分析发现,其中基因表达水平显著上调和下调的分别是200个和62个.结论:筛选HBV pre-X转染HepG2细胞后的代谢相关差异表达基因,从而为乙型肝炎病毒合并糖尿病、脂肪肝等代谢性疾病的分子生物学机制的研究提供了重要依据. 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒前x基因 HEPG2细胞 基因芯片 差异表达基因
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在大肠杆菌中利用反义RNA抑制乙肝病毒(HBV)X基因的表达
13
作者 杨建琪 张锡元 +2 位作者 李文鑫 张晓刚 王平 《武汉大学学报(自然科学版)》 CSCD 1995年第4期475-481,共7页
将乙肝病毒(HBV)ayw株完整的X基因正向重组到原核表达质粒pBV-221的PL启动子下游,得到能表达X蛋白的重组质粒pBV-HBV(+);同时将X基因反向重组到原核表达质粒pBV-220的PL启动子下游,得到能转... 将乙肝病毒(HBV)ayw株完整的X基因正向重组到原核表达质粒pBV-221的PL启动子下游,得到能表达X蛋白的重组质粒pBV-HBV(+);同时将X基因反向重组到原核表达质粒pBV-220的PL启动子下游,得到能转录X基因反义RNA的重组质粒pBV-HBX(-).利用这两个质粒,构建出能同时转录X基因mRNA和反义RNA的重组质粒PEX.AN-HBX,并在原核水平上,证实了反义RNA对X基因的表达具有明显的抑制作用,从而为在真核水平上利用反义RNA对X基因进行调控的研究提供了有利的基础. 展开更多
关键词 RNA hbv x基因 乙型肝炎病毒 大肠杆菌 基因表达
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肝癌及肝硬化患者血清HBV X基因检测及序列分析
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作者 蒋向荣 陈治新 +1 位作者 李丹 王小众 《中西医结合肝病杂志》 CAS 2003年第S1期8-10,共3页
目的:了解肝癌及肝硬化患者血清HBV X基因的表达及其核苷酸序列的变异情况。方法:采用酚-氯仿抽提法抽提患者血清DNA,聚合酶链反应扩增血清HBV X基因,琼脂糖电泳观察结果,并对PCR产物行序列分析。结果:HBV X基因在肝癌患者血清的检出率... 目的:了解肝癌及肝硬化患者血清HBV X基因的表达及其核苷酸序列的变异情况。方法:采用酚-氯仿抽提法抽提患者血清DNA,聚合酶链反应扩增血清HBV X基因,琼脂糖电泳观察结果,并对PCR产物行序列分析。结果:HBV X基因在肝癌患者血清的检出率为32%(16/50),在肝硬化患者血清的检出率为46%(23/50)。经琼脂糖电泳及序列分析证实为HBV X基因。16例肝癌及15例肝硬化患者X基因序列分析显示患者的X基因均存在不同程度的点突变(1~13bp),未发现固定的突变部位与序列。结论:肝癌及肝硬化患者血清HBV X基因存在不同程度点突变,但无特异性突变序列。 展开更多
关键词 肝肿瘤 肝硬化 乙肝病毒 x基因
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探讨HBV X、TGF-alpha,c-myc及beta-catenin基因与高发区肝癌的相关性
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作者 许杨 徐立斌 +3 位作者 高纪东 冯志俊 吴志远 孙宗棠 《实用癌症杂志》 2004年第3期225-228,共4页
目的 研究HBVX基因、TGF alhpa、c myc、beta catenin等癌变相关基因及 2 49密码子突变的p5 3蛋白在高发区肝细胞癌癌变发生及其恶性表型维持所发挥的作用。方法 以肝癌高发区启东的肝癌细胞株 770 1和 770 3标本作为研究对象 ,以PCR... 目的 研究HBVX基因、TGF alhpa、c myc、beta catenin等癌变相关基因及 2 49密码子突变的p5 3蛋白在高发区肝细胞癌癌变发生及其恶性表型维持所发挥的作用。方法 以肝癌高发区启东的肝癌细胞株 770 1和 770 3标本作为研究对象 ,以PCR及DNA测序分析方法确定HBVX基因在细胞DNA水平的整合。以RT PCR及Western blot检测HBVX基因的转录与表达。用PCR RFLP方法确定 p5 3基因 2 49密码子的错义突变。应用免疫组织化学法分析TGF alhpa ,c myc ,beta catenin的表达。结果  2株细胞在DNA水平都存在HBVX基因片断的整合 ,但未见完整的转录和蛋白水平表达。序列分析显示 2株细胞的HBVX基因的序列各有特异性 ,并存在 13 0、13 1密码子的热点突变。PCR RFLP分析说明 2个细胞株中p5 3基因 2 49密码子均属野生型。免疫组化显示 2株细胞中TGF alpha ,c myc和beta catenin蛋白均有显著的积累。 结论 本实验的结果显示HBVX基因对这 2株细胞恶性表型的维持并不存在必然的关联 ,而是 1种HBV感染的遗传标志。未见HBVX基因蛋白表达 ,可能由于X基因 3′端缺失变异所致。免疫组化的结果显示TGF alpha ,c myc和beta catenin蛋白的显著积累 ,说明多种癌基因的相互协同 ,可能与肝癌的发生。 展开更多
关键词 hbvx TGF-alpha C-MYC beta-catenin基因 基因高发区 肝癌 肿瘤 肝细胞
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HBV X区基因部分序列的亚克隆与PCR检测
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作者 袁媛 陈强 +2 位作者 杨继红 熊国梅 刘中来 《现代生物医学进展》 CAS 2006年第8期4-6,9,共4页
目的:探讨HBV X区基因用于乙型病毒性肝炎早期诊断价值和意义。方法:设计特异性引物,将pBR322-HBV质粒X区部分序列PCR产物AT亚克隆至pBS-T载体,提取和纯化质粒DNA,再对HBV X区序列进行PCR扩增。结果:获得了预期希望的质粒。PCR的最佳退... 目的:探讨HBV X区基因用于乙型病毒性肝炎早期诊断价值和意义。方法:设计特异性引物,将pBR322-HBV质粒X区部分序列PCR产物AT亚克隆至pBS-T载体,提取和纯化质粒DNA,再对HBV X区序列进行PCR扩增。结果:获得了预期希望的质粒。PCR的最佳退火温度为51℃,灵敏度达到101拷贝/2μl,线性范围101-1010拷贝/2μl。讨论:pBR322-HBV质粒中的靶基因成功地被亚克隆至pBS-T载体。pBR322-HBV中X区目的序列扩增产物为57bp,该小片段勿需纯化就可直接AT亚克隆至新载体,有利于后续的常规PCR检测和TaqMan MGB荧光定量PCR检测。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 x区基因 亚克隆 灵敏度
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HBV X基因对肝癌细胞生物学行为的影响 被引量:2
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作者 马臻 《内蒙古医学杂志》 2008年第9期1160-1163,共4页
目的:构建可表达HBV X基因的重组腺病毒,观察HBV X基因对肝细胞生物学行为的影响。方法:构建可表达HBV X基因的重组腺病毒Ad-X及空病毒Ad0;重组腺病毒感染HepG2细胞,应用MTT、平板克隆形成试验、流式细胞术、TUNEL等方法观察HBV X基因... 目的:构建可表达HBV X基因的重组腺病毒,观察HBV X基因对肝细胞生物学行为的影响。方法:构建可表达HBV X基因的重组腺病毒Ad-X及空病毒Ad0;重组腺病毒感染HepG2细胞,应用MTT、平板克隆形成试验、流式细胞术、TUNEL等方法观察HBV X基因对肝细胞生物学行为的影响。结果:与HepG2组和Ad0组相比,Ad-X组细胞生长速度较快,其克隆形成率高于对照组,流式细胞分析显示Ad-X感染可加快HepG2细胞G1→S期细胞周期进程;Ad-X组细胞凋亡指数低于HepG2组及Ad0组,Ad-X感染HepG2细胞后可诱导c-myc mRNA的表达。结论:Ad-X可促进HepG2细胞的增殖并抑制其凋亡。 展开更多
关键词 hbvx基因 肝细胞癌 细胞周期 增殖 凋亡 C-MYC
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双拷贝和x基因缺失HBV DNA质粒的构建及其细胞转染
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作者 宋玉 万谟彬 +3 位作者 李闻捷 陈坚 方超平 薛惠斌 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第9期979-981,共3页
目的 :构建双拷贝和x基因缺失的HBV真核细胞复制表达质粒 ,并研究其在Hep3B肝癌细胞株中对HBV的复制表达效果。 方法 :利用含HBVDNA(adrⅠ )的质粒 ,酶切出HBVDNA片段 ,克隆入哺乳动物细胞表达载体pcDNA3,构建双拷贝HBVDNA的真核表达质... 目的 :构建双拷贝和x基因缺失的HBV真核细胞复制表达质粒 ,并研究其在Hep3B肝癌细胞株中对HBV的复制表达效果。 方法 :利用含HBVDNA(adrⅠ )的质粒 ,酶切出HBVDNA片段 ,克隆入哺乳动物细胞表达载体pcDNA3,构建双拷贝HBVDNA的真核表达质粒 pcDNA3 ES HBV2 ;将原始质粒通过插入人工合成DNA片段和基因重组破坏乙肝病毒x基因区 ,再克隆入pcDNA3,构建成 pcDNA3 KN F1F2真核表达质粒 ;用两质粒分别转染Hep3B肝癌细胞株 ,进行G4 1 8筛选的同时用荧光定量PCR法检测细胞培养上清液HBVDNA。 结果 :(1 )成功构建了x基因缺失的HBV真核表达质粒 pcDNA3 KN F1F2及含双拷贝HBVDNA的真核表达质粒 pcDNA3 ES HBV2 ;(2 )对两质粒成功进行细胞转染后 ,测得第 3、6、1 4天细胞培养上清液中HBVDNA均高表达 ,两质粒之间差别不明显。 结论 :构建的质粒可在Hep3B细胞株中表达并引起HBV的复制及分泌 ; 展开更多
关键词 双拷贝 x基因缺失 hbvDNA 质粒 构建 细胞转染 肝癌
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HBV X-HCV C融合基因重组腺病毒的构建及鉴定与表达
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作者 马臻 陈国民 《内蒙古医学杂志》 2007年第9期1043-1047,共5页
目的:应用重叠区扩增基因拼接法(gene SOEing)获得HBV X-HCV C融合基因,构建HBV X-HCV C融合基因重组腺病毒。方法:应用gene SOEing法扩增HBV X-HCV C融合基因并将其克隆至穿梭质粒pAdTrack-CMV,获得重组腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV-XC,... 目的:应用重叠区扩增基因拼接法(gene SOEing)获得HBV X-HCV C融合基因,构建HBV X-HCV C融合基因重组腺病毒。方法:应用gene SOEing法扩增HBV X-HCV C融合基因并将其克隆至穿梭质粒pAdTrack-CMV,获得重组腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV-XC,经PmeⅠ酶切线性化后电转化BJ/AdEasy菌,构建重组腺病毒质粒pAd-XC;鉴定正确的pAd-XC经Pac I酶切线性化后脂质体法转染293细胞进行包装,扩增,利用绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)监测病毒滴度和感染效率,Western-blot法检测目的蛋白的表达。结果:测序结果显示,pAdTrack-CMV-XC构建成功;PCR及Pac I酶切鉴定结果表明pAd-XC构建成功;经Pac I酶切线性化的pAd-XC转染293细胞后24 h即可观察到GFP的表达;回收的病毒可重复感染293细胞,Western-blot法检测到目的蛋白的表达,证实有感染能力且可表达目的蛋白的病毒颗粒包装成功。结论:HBV X-HCV C融合基因重组腺病毒构建成功,为进一步研究HBV X蛋白和HCV C蛋白的生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 hbv x基因 HCV C基因 融合基因 重叠区扩增基因拼接法 腺病毒
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HBV X基因转化人肝细胞的实验研究 被引量:1
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作者 吴传湘 刘国珍 +2 位作者 李涛 谭德明 刘洪波 《生命科学研究》 CAS CSCD 2008年第2期179-183,共5页
选取已稳定转染HBV X基因的QSG7701细胞(pCMV X/QSG7701),并以稳定转染空质粒pRc/CMV2的QSG7701细胞(pRcCMV2/QSG7701)及未转染的QSG7701细胞为对照,用免疫荧光方法检测pCMV X/QSG7701细胞中HBX蛋白的分布;用RT-PCR方法和免疫细胞化学... 选取已稳定转染HBV X基因的QSG7701细胞(pCMV X/QSG7701),并以稳定转染空质粒pRc/CMV2的QSG7701细胞(pRcCMV2/QSG7701)及未转染的QSG7701细胞为对照,用免疫荧光方法检测pCMV X/QSG7701细胞中HBX蛋白的分布;用RT-PCR方法和免疫细胞化学法分别检测细胞中c-Myc表达;用光镜及电镜观察细胞形态学变化,进一步研究乙肝病毒(HBV)X基因对永生化非瘤性人肝细胞QSG7701的转化作用.研究发现,乙肝病毒X(HBX)蛋白主要分布在细胞膜及细胞浆;c-Myc mRNA及c-Myc蛋白在3种细胞中均有表达,但转染了X基因的细胞中c-Myc的表达水平较其他两组明显升高(P<0.01);光镜和电镜下观察发现pCMV X/QSG细胞的胞核较大,核膜增厚,核仁肥大且增多,核/浆比例失调,可见少量多核巨细胞,pRc-CMV2/QSG7701细胞与QSG7701细胞核浆比正常,染色质分布均匀,胞核大小及形态正常.结果表明,HBVX基因成功转染了QSG7701细胞,HBV X蛋白主要分布于转染细胞的细胞膜和细胞浆中,HBX可能通过上调转染细胞中c-Myc蛋白的表达而使细胞具备恶性化生长的倾向. 展开更多
关键词 乙肝病毒 x蛋白 转化 人肝细胞
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