乙二胺修饰法标记生物素化HBVDNA探针及其应用

采取将核酸用乙二胺作化学修饰后标记生物素的方法制备了生物素化ＨＢＶＤＮＡ探针．该探针的检测敏感性达到０．２５ｐｇ。用它作斑点杂交检测血清ＨＢＶＤＮＡ，结果４１份ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ阳性的血清有３６份显示斑点阳性；在９份ＨＢｓＡｇ阳性而ＨＢｅＡｇ阴性的血清中，有２份显示斑点阳性；而在５份ＨＢｓＡｇ阴性的正常人血清中未检出ＨＢＶＤＮＡ。

生物素标记HBVDNA探针原位杂交碱性磷酸酶过氧化物酶显色检测肝内HBVDNA

本研究应用国产生物素标记HBVDNA探针,于福尔马林固定,石蜡包埋肝组织切片上,建立了碱性磷酸酶过氧化物酶显色的原位杂交技术,在此过程中发现,蛋白酶的消化是杂交能否成功的关键因素,酸、三乙醇酐、洋地黄的预处理,能促进探针参入,降低非特异背景,减低蛋白酶作用浓度或作用时间,因而提高实验稳定性、特异性。并用这一技术检测了34例肝活检和4例尸检肝组织,结果:尸肝组织均检出了HBV—DNA,其中2例核型见于肝硬化,肝癌旁组织,而2例浆型HBV—DNA见于慢活肝,亚重肝。34例肝活检组织中,只检出12例浆型HBV—DNA,其中CAH—CPH无症状携带者中检出率分别为42.9％,38.8％,33.3％,均明显高于肝硬化组织(16.7％)(P<0.05)。由此可见浆型HBV—DNA分布同病变轻重程度的关系可能并不密切,不同分布型的HBV—DNA可能只反映HBV的复制状态。

新法标记HBV基因探针

乙型肝炎病毒(HBV)在我国的感染率极高,提高HBV检测水平是控制HBV感染的重要措施。目前主要靠检测血清HBV抗原、抗体诊断HBV感染。