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HBV PreS2-MBP融合蛋白在大肠杆菌中表达条件的优化 被引量:4
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作者 刘照惠 邵丽君 +5 位作者 李猛 金立杰 李利 谷丽娟 赵晓琳 杨屹 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2007年第6期435-438,共4页
目的优化HBV PreS2-MBP融合蛋白在大肠杆菌中的表达条件。方法通过改变重组质粒的宿主菌、培养基、诱导温度、诱导剂、诱导剂浓度、诱导时间等条件,利用SDS-PAGE和BandScan凝胶分析软件,分析以上条件改变对表达产物表达量的影响。将重... 目的优化HBV PreS2-MBP融合蛋白在大肠杆菌中的表达条件。方法通过改变重组质粒的宿主菌、培养基、诱导温度、诱导剂、诱导剂浓度、诱导时间等条件,利用SDS-PAGE和BandScan凝胶分析软件,分析以上条件改变对表达产物表达量的影响。将重组质粒连续传100代,检测融合蛋白的表达稳定性。结果重组质粒在大肠杆菌BL21菌株、GS培养基、28℃、0.5mmol/L IPTG或1.5mmol/L乳糖诱导4h时,目的蛋白的表达量最高,占菌体总蛋白的43.5%。重组质粒传代100代,融合蛋白的表达稳定。结论已确定出了融合蛋白在大肠杆菌中表达的最佳条件。 展开更多
关键词 hbv pres2-mbp融合蛋白 大肠杆菌 表达条件
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HBV PreS2-MBP融合蛋白质粒构建及在大肠杆菌中的表达 被引量:2
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作者 邵丽军 刘照惠 +5 位作者 金立杰 李利 李猛 谷丽娟 赵晓林 杨屹 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2006年第3期255-258,共4页
目的在大肠杆菌pMALP2x系统中表达HBVPreS2MBP融合蛋白,并对其进行鉴定和纯化。方法利用DNA重组技术,将全长的HBVPreS2蛋白基因克隆至原核表达载体pMALP2x中,转化大肠杆菌DH5α,IPTG诱导表达。表达产物经SDSPAGE和Westernblot检测,并经... 目的在大肠杆菌pMALP2x系统中表达HBVPreS2MBP融合蛋白,并对其进行鉴定和纯化。方法利用DNA重组技术,将全长的HBVPreS2蛋白基因克隆至原核表达载体pMALP2x中,转化大肠杆菌DH5α,IPTG诱导表达。表达产物经SDSPAGE和Westernblot检测,并经阴离子交换层析、AmyloseResin亲和层析纯化。结果成功构建了重组载体pMALP2x/S2,诱导蛋白为MBP标记的可溶性的PreS2MBP融合蛋白,具有良好的抗原性,可经AmyloseResin亲和层析纯化。结论pMALP2x系统可成功表达PreS2MBP融合蛋白。 展开更多
关键词 hbv pres2-mbp融合蛋白 pMAL-P2x系统 原核表达 大肠杆菌
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HBV PreS2-MBP融合蛋白在大肠杆菌不同部位的表达 被引量:1
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作者 刘照惠 邵丽军 +1 位作者 金立杰 李利 《生物技术》 CAS CSCD 2006年第3期17-19,共3页
目的:分析比较HBV PreS2蛋白在大肠杆菌细胞周质和细胞质中的融合表达情况。方法:构建大肠杆菌细胞周质中融合表达HBV PreS2蛋白的载体pMAL-P2x/S2和细胞质中融合表达载体pMAL-C2x/S2,IPTG诱导表达,产物经SDS-PAGE和Western Blot检测,分... 目的:分析比较HBV PreS2蛋白在大肠杆菌细胞周质和细胞质中的融合表达情况。方法:构建大肠杆菌细胞周质中融合表达HBV PreS2蛋白的载体pMAL-P2x/S2和细胞质中融合表达载体pMAL-C2x/S2,IPTG诱导表达,产物经SDS-PAGE和Western Blot检测,分析HBV PreS2-MBP融合蛋白在菌体不同部位的表达情况及表达产物的存在形式。结果:细胞周质中表达的融合蛋白有一部分被降解了,而细胞质中表达出了完整的融合蛋白。细胞质中表达的融合蛋白以包涵体和可溶性蛋白两种形式存在。结论:HBV PreS2-MBP融合蛋白适合在大肠杆菌细胞质中表达。 展开更多
关键词 hbv pres2-mbp融合蛋白 原核表达 pMAL-P2x pMAL-C2x
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IL-2/IFN-γ融合蛋白质粒增强HBV DNA疫苗免疫原性的实验研究(英文) 被引量:2
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作者 杨富强 陈光明 +5 位作者 饶桂荣 徐宇虹 赵勇刚 何晓嫱 孙希海 侯金林 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期838-842,846,共6页
目的评价IL-2/IFN-γ融合蛋白基因质粒(pFP)增强HBV DNA疫苗(pS2.S)免疫原性的佐剂作用。方法构建IL-2/IFN-γ融合蛋白和HBV包膜中蛋白(PreS2+S)编码基因的重组真核表达质粒,根据pFP编码的目的基因序列分子模拟IL-2/IFN-γ融合蛋白的空... 目的评价IL-2/IFN-γ融合蛋白基因质粒(pFP)增强HBV DNA疫苗(pS2.S)免疫原性的佐剂作用。方法构建IL-2/IFN-γ融合蛋白和HBV包膜中蛋白(PreS2+S)编码基因的重组真核表达质粒,根据pFP编码的目的基因序列分子模拟IL-2/IFN-γ融合蛋白的空间结构,检测质粒体外转染细胞表达目的基因产物及其生物活性;体内实验采用提高质粒转染效率的在体电脉冲(EP)技术免疫健康BALB/c小鼠,分别以ELISA及免疫酶联斑点(ELISPOT)方法检测小鼠血清抗HBs及脾脏HBsAg特异性分泌IFN-γ的淋巴细胞应答水平。结果pFP能够以融合蛋白的形式正确表达IL-2和IFN-γ,其活性域保持相对独立,其分子模拟的结果得到了质粒体外细胞转染检定实验的证实。EP介导的HBV DNA免疫反应中,pS2.S+pFP组血清抗-HBs[(51.2±50.5)mIU/mL,89%]及HBsAg特异性分泌IFN-γ的淋巴细胞应答[(207±103)IFN-rT细胞SFCs/3×105脾细胞,78%]水平和阳性率均显著高于pS2.S+pcDNA3.1组[抗-HBs:(14.8±7.6)mIU/mL,64%;IFN-γT细胞:(84±70)SFCs/3×105脾细胞,28%](P<0.05)。结论实验结果提示Th1型细胞因子IL-2和IFN-γ的融合蛋白基因表达质粒可提高HBV DNA疫苗的免疫效果,并促进初始T细胞向Th1方向分化。 展开更多
关键词 DNA疫苗 乙型肝炎病毒(hbv) 白细胞介素-2(IL-2)/γ-干扰素(IFN-γ)融合蛋白表达质粒(pFP) 在体电转染(EP)
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Expression of an HBV PreS1 Fusion Protein in Escherichia coli
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作者 金冬雁 曾庆 +1 位作者 周园 侯云德 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 1994年第1期80-85,共6页
The large protein of the hepatitis B virus (HBV) envelope was subdivided intothe preSl region with 108-115 amino acids, the preS2 region with 55 amino acidsand the S region with 226 amino acids. It was believed that t... The large protein of the hepatitis B virus (HBV) envelope was subdivided intothe preSl region with 108-115 amino acids, the preS2 region with 55 amino acidsand the S region with 226 amino acids. It was believed that the preSl region cotainedthe hepatocyte attachment sites of the virus as well as multiple highly immunogenicT-cell and B-cell epitopes. The antibody response to the preSl peptide was also oneof the most important serological markers of HBV infection. 展开更多
关键词 hepatitis B virus (hbv) pres1 protein EXpresSION of CLONED genes fusion protein protein sequencing.
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A modified hepatitis B surface antigen carrying both preS1 and preS2 epitopes
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作者 惠静毅 李光地 +1 位作者 孔玉英 汪垣 《Science China(Life Sciences)》 SCIE CAS 1998年第1期56-63,共8页
The DNA fragments coding for preS2(120 146) and preS1(21 47) amplified by PCR were fused to both 5′ and 3′ ends of S gene at the position of amino acid 223. The fusion gene was placed downstream of the promoter P7.5... The DNA fragments coding for preS2(120 146) and preS1(21 47) amplified by PCR were fused to both 5′ and 3′ ends of S gene at the position of amino acid 223. The fusion gene was placed downstream of the promoter P7.5 of the universal vaccinia viral vector pGJP 5 and the recombinant vaccinia virus vS2SS1 was then selected by \%in vivo\% homogeneous recombination. Fusion protein S2SS1 could be expressed in the mammalian cells infected with vS2SS1. The investigation of expression, secretion, antigenicity and particle assembly of the S2SS1 protein demonstrated that S2SS1 protein could be assembled into particles which presented preS1, preS2 and S antigenicity and be efficiently secreted from the cells. It also showed that the level of its expression and secretion approached to that of the S protein expressed by the recombinant vaccinia virus. 展开更多
关键词 HEPATITIS B surface ANTIGEN (HBsAg) pres1 and pres2 EPITOPES fusion protein particle recombi nant VACCINIA virus.
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