7754例HBV标志物检测阳性表现模式分析

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)血清学标志表现模式及转归。方法应用酶标记免疫吸附试验技术检测乙型肝炎病毒血清学标志物,共7754例乙肝患者。按文献报道[1]设定血清病毒学标记检测项目1～5项的排列顺序为(1)HBsAg(2)抗-HBs(3)HBeAg(4)抗-HBe(5)抗-HBc。以出现阳性序号为模式代码。结果本组乙肝病毒血清学标记模式分感染期模式组和恢复期模式组,两组共29种模式。其中感染期模式以135,145为主占43.39%,恢复期模式组以2,245,24,25,5为主占30.8%。本组对176例患者进行跟踪检测,时间为2～11年,结果显示,145及15模式,除少数为趋向恢复模式外,大多为长期携带模式。结论本组HBV血清免疫学标志模式较为复杂,除试验误差外,产生少见模式的主要原因,可能与低滴度HBsAg、抗-HBc、抗-HBs及乙肝抗原抗体免疫复合物血症有关。HBV血清学免疫标志模式可分为恢复期转换及HBV感染后长期携带的免疫状态固定模式。恢复期模式转换为e及s抗原转换、消失,继而产生高滴度抗-HBc,抗-HBe,抗-HBs。最终抗-HBc、抗-HBe相继消失从而表现为抗-HBs保护性抗体的模式。

探讨HBsAg/Annexin V检测在HBV宫内传播中的意义

目的 :揭示乙肝病毒 (hepatitisBvirus,HBV)感染胎盘滋养层细胞的可能方式 ,探讨乙肝表面抗原 /膜联蛋白V(HBsAg/AnnexinV)检测在HBV宫内传播机制研究的意义 .方法 :收集血清学HBsAg阳性孕妇足月胎盘组织 39例 ,经SABC免疫组化方法在其中 2 3例中检测到HBsAg ,随机选取 7例采用免疫荧光双标记方法结合激光共聚焦技术检测HBsAg/An nexinV .结果 :血清学HBsAg阳性孕妇足月胎盘组织中HB sAg/AnnexinV共存于滋养层细胞胞质中 .结论 :提示在HBV宫内传播机制方面存在着这样一种可能 ,即AnnexinV结合并携带HBV进入滋养层细胞 ,从而使滋养层细胞受到HBV感染 .

肝癌死亡率显著差异地区肝癌病例HBV标记对比

[目的]随着病毒环境基因组研究的进展,已发现HBV基因组序列存在明显地理差异,本研究对我国肝癌死亡率最高地区之一的江苏省启东市和肝癌死亡率一般性地区之一的江西省南昌市的生活原地肝癌病例的HBV感染免疫学标记进行对比分析,从HBV感染机制上探索我国肝癌死亡率具有显著差异的原因,为我国HBV并肝癌的遗传性环境基因组研究开拓思路。[方法]选择启东与南昌生活原地的肝癌病例,采集HBV感染免疫学标记(HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-Hbe、抗-HBc)阳性数据,随机输入SPSS10、0软件程序,排列出感染模式,用卡方检验方法对两地区模式标记及单项标记进行对照性统计学分析。[结果]南昌高于启东的模式有:I型HBsAg(+)、HBeAg(+)抗-HBc(+),Ⅱ型HBsAg(+)、抗-HBe(+)、抗-HBc(+)及Ⅲ型HBsAg(+)、抗-HBc(+)。启东高于南昌的模式有:IV型HBsAg(+)、HBeAg(+),V型抗-HBe(+)抗-HBc(+)及VI型抗-HBc(+),均P﹤0.05。5项免疫标记单列进行比较统计,HBsAg(+)存在统计学差异(P﹤0.05),南昌高于启东。[结论]南昌与启东肝癌病例的HBV感染模式存在明显差异,关键是启东肝癌病例HBsAg表达率极低。

改良荧光定量PCR同步检测HBV-DNA含量及其熔解温度

目的通过改进荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)的单荧光标记,建立灵敏、特异的HBV-DNA含量及其熔解温度(Tm)的同步检测方法。方法根据荧光标记物质的不同,将FQ-PCR分为TaqMan+SYBR GreenI双标记(T+S组)、TaqMan探针单标记(T组)和SYBR GreenI染料单标记(S组)三种,同时检测HBV-DNA已知浓度为108.48、105.70、103.70和<1×103.00(copies/ml)的血清中HBV-DNA含量及Tm,每组FQ-PCR检测每份血清时1次做5个平行管。结果T+S组检测的HBV-DNA阳性血清均为阳性,其平均含量为108.55±0.32、105.79±0.29、103.81±0.30,与T组的108.49±0.31、105.69±0.30、103.72±0.25copies/ml对应浓度值取10对数比较,无统计学意义(t=0.31、0.54和0.27,P>0.05);与S组的108.41±0.35、105.21±0.34和103.26±0.26copies/ml(不含未检出的两次血清)比较,除高浓度外,中低浓度有统计学意义(t=2.90和2.62,P<0.05)。T+S组和S组阳性血清均出现明显熔解曲线,Tm分别为71.8℃、72℃和79.8℃,阴性血清未出现扩增曲线和Tm值。T+S组、T组和S组的灵敏度分别为102.70、102.70和103.00copies/ml。结论改良的SYBR GreenI和TaqMan探针双标记的FQ-PCR检测HBV-DNA时,兼有TaqMan探针标记FQ-PCR的灵敏度高、特异性强和SYBR GreenI标记FQ-PCR的Tm分析的优点,能达到同步检测HBV-DNA含量及其Tm的目的,为HBV-DNA含量及其多态性分析,尤其是为HBV-DNA含量及其基因分型同步检测提供了新思路。

地高辛标记探针与生物素标记探针用于斑点杂交检测HBV DNA的初步研究

为研究地高辛标记和生物素标记核酸探针斑点杂交检测HBVDNA的敏感性、特异性和稳定性，用两种探针和(32)P标记探针进行平行检测对照．结果表明，地高辛探针检测灵敏度为0．1Pg，已达到(32)P中标记探针水平。生物素探针为1～10Pg。两种探针与32P标记探针相比。符合率分别96．65％和89．13％；敏感性分别为94．44％和83．33％；特异性分别为96．43％和92．86％。两种探针在－20℃存放6月后检测结果前后一致。研究结果表明，地高辛标记探针和生物素标记探针斑点杂交检测HBV．DNA都具有较高的敏感性、特异性和稳定性，其中以地高辛标记探针更优。

新法标记HBV基因探针

乙型肝炎病毒(HBV)在我国的感染率极高,提高HBV检测水平是控制HBV感染的重要措施。目前主要靠检测血清HBV抗原、抗体诊断HBV感染。

用微量指血法检测HBV标志物的实验研究与临床应用

采用酶联免疫试剂盒测定了２７４人微量指血乙肝病毒（ＨＢＶ）５项标志物（ＨＢｓＡｇ，抗－ＨＢｓ，ＨＢｅＡｇ，抗－ＨＢｅ，抗－ＨＢｃ），与自身静脉血（常规法）进行了比较。结果表明：１００例正常献血员总符合率达１００％，Ｎ／Ｃｕｔｏｆｆ值均＜１．００。３６例阳性确诊患者，各项标志物检测总符合平均＞９４．０％，阳性的Ｎ／ｃｕｔｏｆｆ值均≥１．００。１３８例随机患者各项标志物的总符合率分别为９４．２％、９４．９％、９０．３％、９８．６％和９６．Ｏ％。两种方法测得各项标志物结果差异无显著意义（均Ｐ＞０．０５）。

330例乙肝病毒免疫标志物与HBV-DNA检测的关系探讨

目的 探讨乙肝病毒免疫标志物与 HBV- DNA之间的相关关系 ,为临床诊断和确定治疗的方案疗效观察提供有价值的依据。 方法 用 ELISA法检测血清免疫标志物 ,荧光定量聚合酶链反应( PCR) HBV- DNA,并对其进行探讨。 结果 HBs Ag、HBe Ag、HBc Ab均阳性组 ,HBs Ag、HBe Ab、HBc Ab均阳性组 ,HBs Ab、HBe Ab、HBc A b均阳性组 ,HBc Ab阳性组 ,全阴组中 ,H BV- DNA阳性检出率分别为 10 0 % ,6 1.3% ,51.9% ,15.4 % ,6 3% ,12 .5% ,6 .7%。 结论 FQ- PCR检测乙肝病毒在体内感染和复制 ,对临床诊断 。

化学发光免疫分析定量检测乙肝病毒标志物方法学研究

采用碱性磷酸酶标记 ,金刚烷衍生物发光 ,自动化学发光分析仪测量等 ,进行乙肝病毒五种标志物化学发光免疫分析 (CLIA)方法学研究。结果表明这五种标志物CLIA方法的精密度、灵敏度、回收率和临床符合率等技术参数均达到方法学和临床诊断的要求。CLIA方法比ELISA和RIA更简便、快速而实用 ,为临床诊断和科研工作提供了一种有用的检测手段。

金标法和ELISA法检测乙型肝炎病毒血清标志物的比较

目的探讨金标法检测乙型肝炎病毒(HBV)HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb五项血清标志物的敏感性、特异性。方法采用ELISA法和金标法对256例血清样本同时进行HBV五项血清标志物的检测,并且对结果进行对比分析。结果 256例样本中:ELISA法"全阴性"(HBsAg,HBsAb,HBeAg,HBeAb,HBcAb均阴性)结果模式,金标法结果相同;ELISA法HBsAg、HBeAb、HBcAb阳性,HBsAb、HBeAg阴性(简称模式1);HBsAg、HBeAg、HBcAb阳性,HBeAb、HBsAb阴性(简称模式2)结果模式,金标法检测样本的结果模式发生改变。256例样本两法各单项指标检测结果经χ2检验:HBsAb和HBeAg两项结果的差异无统计学意义(P>0.05);HB-sAg,HBeAb,HBcAb三项结果的差异有统计学意义(P<0.05),少数ELISA法阳性或OD为临界值的样本金标法检测结果为阴性;无ELISA法阴性而金标法为阳性的标本。结论两种方法对HBV五项血清标志物测定的特异性相近,但是金标法敏感性不如ELISA法。

地高辛素标记乙型肝炎病毒DNA探针的制备及应用

采用随机引物法以地高辛素标记的脱氧尿嘧啶核苷三磷酸(dig-II-dUTP)标记克隆的乙型肝炎病毒(HBV)DNA adw/pAM6,制得高特异性和高敏感性的HBV DNA探针。用于斑点杂交检测HBV DNA,最大敏感度为0.lpg。用于检测HBsAg阳性血清,HBV DNA阳性率为82.7％(91/110),与市售同类药盒相比,阴阳结果一致,与缺口翻译的生物索探针相比,检出率有显著提高(P<0.01)。用于肝癌组织与血清HBV DNA研究,与既往用~32P探针所得结果相符。该探针操作简单、使用方便、出结果快速、价格便宜又无需特殊设备,故适于在临床单位尤其是基层医疗单位应用推广。

交叉置换扩增联合纳米生物传感器检测乙肝病毒方法的建立与应用

目的建立一种敏感、特异的乙肝病毒(HBV)快速检测方法,并评价其应用。方法基于多交叉置换扩增(MCDA)技术和纳米生物传感(LFB)检测技术,以HBV特异性S基因为检测靶标,建立HBV-MCDA-LFB方法,优化反应温度和时间等实验条件,并应用临床样本进行评价,同时与实时PCR(RT-PCR)进行比较。结果HBV-MCDA-LFB能在30 min内完成HBV检测,最佳反应温度为60℃,其特异性良好,未与其他病毒、细菌发生交叉反应。此外,该方法的检出限低至1×101拷贝/反应,且能准确检测临床样本的HBV,检测灵敏度优于RT-PCR方法。结论本研究建立了一种特异、敏感、便捷的乙肝病毒快速检测方法,即HBV-MCDA-LFB,其诊断效率优于临床采用的RT-PCR方法,可作为临床快速诊断HBV感染的替代方法。

丁型肝炎病毒感染对乙型肝炎病毒复制的影响研究

用ＥＬＩＳＡ测定１８１例各型ＨＢＶ感染者血请中ＨＤＶ标志物，结果ＨＤＶＭ阳性５７例，阳性率为３１．４９％。各型肝炎间ＨＤＶ感染卒的差异有显著性（Ｐ＜０．０５），依次为ＳＨ＞ＬＣ＞ＣＡＨ＞ＣＰＨ＞ＡＨ＞ＡＳＣ。用异羟基洋地黄毒试元标记的ＨＢＶＤＮＡ探针测定其中５７例ＨＢＶ／ＨＤＶ及单纯ＨＢＶ感染病人血清中ＨＢｖＤＮＡ及其含量，结果ＨＢＶＤＮＡ的检出率在ＨＢＶ／ＨＤＶ组（６７．９２％）明显低于单纯ＨＢＶ感染组（８４．６２％）（Ｐ：０．０１５２），且前组中ＨＢＶＤＮＡ含量也明显低于后组（Ｐ＜０．０５）。以上结果提示：ＨＤＶ感染多见于严重的及慢性肝脏疾病；在ＨＢＶ／ＨＤＶ感染的急性期，ＨＢＶ复制受到抑制；而在重症型、慢性期和肝硬化时则未见这种抑制现象，说明在ＨＢＶ／ＨＤＶ感染的不同阶段可表现出不同的病毒复制现象。

Preparation of Digoxigenin labelled Probe and Detection of HBV DNA in Liver and Extrabepatic Tissue with in Situ Hybridization

A new rapid technique for intrahepatic and extrahepatic HBV DNA detection by using digoxigenin labelled probe with in situ hybridization was developed.This technique has the advantage of being non-radioactive and a quick procedure yielding stable results and showing a clear background.