HBV／HEV二价疫苗性抗原基因在E．coli中表达条件优化的初步研究

为有效提高由乙型肝炎的S抗原基因和戊型肝炎ORF2编码区羧基末端414—606氨基酸基因片段构建的高效表达载体质粒PTΩ-T7SE在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达效率,研究了质粒稳定性、葡萄糖质量分数、pH值、IPTG浓度、转接量、诱导时间、诱导温度、溶解氧对目的蛋白相对产量的影响,优化得到了较好的培养方法,使目的蛋白的相对含量达48.23%,菌体干重达0.5963g/L.结果表明,采用优化方法可制备较高纯度蛋白.本研究为大规模的发酵工艺提供了依据.

HBV/HEV二价抗原的载体构建与表达

为构建一个能够表达出乙/戊型肝炎二价疫苗抗原的大肠杆菌高效重组原核表达载体,采用PCR方法扩增出HBV的S基因,及HEV的ORF2编码区的羧基末端中的414-606aa的基因片段,经过T载体连接、菌落PCR、双酶切、测序鉴定后,将这两部分重组入含有增强子的pT-T7高效的E.coli表达载体中。构建了pT-T7SE表达载体并且表达出相应的目的蛋白。该实验结果为研制预防乙型和戊型肝炎双价疫苗提供了实验技术基础。