HBV-YMDD变异患者与中医虚实辨证关系初探

目的 :初步探讨服用拉米夫定后HBV -YMDD变异患者中医辨证虚证、实证之间的关系。方法 :对服用拉米夫定半年以上的乙型慢性病毒性肝炎患者采用联合基因集团上海博华基因技术有限公司出品的迈科锐乙型肝炎病毒突变检测基因芯片 ,进行HBV -YMDD变异检测。出现HBV -YMDD者 ,根据中医基础理论 ,将其分为实证、虚证 ,来探讨HBV -YMDD变异患者中医虚、实辨证的关系。结果 :HBV -YMDD变异患者中实证变异率(38/ 4 8)明显高于虚证 (10 / 4 8) ,具有统计学意义。结论 :HBV -YMDD变异与虚、实辨证之间具有相关性。

拉米夫定治疗前后YMDD变异与HBV—DNA水平相关性分析

目的：通过对慢性乙型肝炎（CHB）患者血液中HBV—DNA、谷丙转氨酶（ALT）、r-谷氨酰转移酶（r—GT）的检测，了解CHB患者经拉米夫定（3TC）治疗前后HBV—YMDD变异情况，分析HBV—YMDD变异与HBV—DNA、ALT、r—GT相关情况，探讨3TC治疗CHB的效果以寻找最佳治疗方案。方法：对71例治疗前CHB患者，检测HBV—YMDD变异株；选择64例HBV-YMDD的CHB患者经治疗1年后，检测HBV—YMDD变异株；选择36例患者经治疗后仍然是YMDD;13例经治疗后由YMDD变为YIDD；5例治疗后由YMDD变为YVDD的；9例经治疗后由YMDD变异为YMDD＋YVDD混和型的CHB进行检测HBV—DNA、ALT、r—GT含量。结果：71例CHB用3TC治疗前已有7例存在变异现象，其中2例是YVDD型；3例是YIDD型；2例是YMDD＋YVDD混合型；64例治疗前为YMDD型的患者，用3TC治疗后36例没有变异、5例变异为YVDD、13例变异为YIDD、9例变异为YMDD＋YVDD、1例变异为YMDD＋YIDD；36例治疗前后DNA没有变异的CHB，治疗前后的HBV-DNA、ALT、r—GT含量差异有显著意义；13例治疗后由YMDD变为YIDD，治疗前后的HBV—DNA含量差异有显著性，而ALT、r—GT含量在治疗前后差异无显著意义；5例治疗后由YM-DD变为YVDD和9例经治疗后由YMDD变异为YMDD＋YVDD混和型，治疗前后HBV—DNA、ALT、r—GT含量差异无显著意义。结论：CHB用3TC治疗前已经存在着9.85％变异率。64例YMDD用3TC治疗1年后，有43．75％发生变异，变异的类型以YIDD为主。HBV—YMDD没有变异时，经3TC治疗CHB后患者的HBV-DNA、ALT、r—GT含量比治疗前有较大降低，效果明显。YMDD变异为YIDD时，经治疗后患者血液中的HBV-DNA含量比治疗前有较大降低，而血液中ALT、r—GT含量比治疗前降低不大。YMDD变为YVDD时，其血液中的HBV—DNA量高于治疗前，ALT、r-GT含量比治疗前降低不大。YMDD变为YMDD＋YVDD混和型时，经治后CHB患者血液中的HBV—DNA量比治疗前稍高，ALT、r-GT含量比治疗后降低不大。

拉米夫定耐药与HBV YMDD变异关系的研究

探讨拉米夫定耐药与HBVYMDD变异之间关系。对拉米夫定治疗的慢性乙型肝炎进行肝功能、乙肝病毒血清学指标、YMDD耐药基因变异检测。 10 2例慢性乙型肝炎血清中 ,HBVDNA阴性 6 3例 (6 1 8% ) ,39例阳性 ,其中HBVYMDD变异 2 2例 ,变异率为 5 6 4 % ,并与用药时间长短有关 ,9- 17个月和 18- 30个月变异检出率分别为5 1 7%和 70 % ,HBVYMDD变异组ALT为 (5 9 94± 8 6 0 )U/L ,显著高于无HBVYMDD变异组的 (5 0 6 0± 6 12 )U/L。基因芯片技术检测HBVYMDD变异有一定的临床意义 ,YMDD变异是HBV对拉米夫定耐药的原因之一。

HIV/HBV合并感染者经含拉米夫定的HAART治疗后YMDD变异

目的探讨HIV/HBV合并感染者接受含拉米夫定(3TC)的高效抗反转录病毒治疗(highly active antiretroviral therapy,HAART)后诱导乙型肝炎病毒YMDD变异的情况和变异影响因素,从而为合并感染者的治疗提供研究基础.方法采用Singer法DNA直接测序法对64例HIV/HBV合并感者HBV YMDD序列进行检测.结果 20例HIV/HBV合并感染者血清标本中,检测出存在HBV YMDD变异8例,检出率40%,其中YIDD 2例(25%),YVDD 6例(75%),且均伴rt L180M位点变异.在YMDD变异株中发现其他几个高频变异位点:rt Y221F,rt T222A,rt V224I,rt N238H,rt I269L等.YI/VDD+L180M变异中有7例同时伴随Y221F+V224I+N238+I269L变异,检出率87.5%.在HIV/HBV合并感染者中,YMDD变异组的抗病毒治疗时间显著长于未变异组(P<0.05),而在患者的社会人口学特征、HIV感染的途径和时间、抗病毒治疗前的肝功(ALT、AST)和免疫状态(CD4、CD8)、是否合并HCV感染、当前HBV-DNA含量以及最近1次随访的肝功和CD4、CD8细胞学计数中2组差异无统计学意义(P>0.05).结论在HIV/HBV合并感染者中,HBV YMDD的变异率发生较高,变异的类型较为复杂.YMDD变异随含3TC的HAART治疗时间的延长,耐药的发生率增高,因此动态监测YMDD变异情况,有助于治疗过程中及时发现变异情况,以调整治疗方案.YMDD变异对疾病的影响尚不清楚,对于发生YMDD变异的患者应密切观察其肝功能变化,及时加强保肝治疗.

基因芯片检测拉米夫定治疗慢性乙型肝炎后引起的HBV YMDD变异

目的 建立乙型肝炎病毒变异基因诊断芯片对拉米夫定治疗慢性乙型肝炎过程中出现的肝炎病毒P基因区YMDD变异进行快速准确的检测诊断方法。方法 设计特异性寡核苷酸探针数组 ,特别处理芯片载体 ,用点样法制备乙型肝炎病毒变异基因诊断芯片。选择 30例服用拉米夫定后 ,HBVDNA转阴 ( <5 0 0copies/ml) ,6 8周后又反跳≥ 5 0 0copies/ml的病人进行基因芯片杂交检测分析。同时用PCR直接测序法对病人血清标本进行双盲HBVDNA聚合酶活性区域测序对照。结果 30例服药后HBVDNA反跳病人中 ,基因芯片测得HBVYMDD变异 2 1例 ,其中YVDD变异11例 ,YIDD变异 10例。HBVDNAPCR直接序列测定结果为有核苷酸A741变为G ,使氨基酸由蛋氨酸 5 5 2变为缬氨酸 (氨基酸基序由YMDD变为YVDD) ,6例核苷酸A669变为C ,氨基酸由亮氨酸5 2 8变为蛋氨酸 ;核苷酸G743 变为T ,使氨基酸由蛋氨酸 5 5 2变为异亮氨酸。 (氨基酸基序由YMDD变为YIDD)。其中有 3例伴有核苷酸T781变为C ,使氨基酸由亮氨酸 5 6 5变为脯氨酸。标本阳性变异序号与基因芯片检测结果完全一致。结论 乙型肝炎病毒变异基因诊断芯片可以同时检测YVDD、YIDD变异 ,与PCR直接测序法比较 ,准确率达 10 0 %。

未经拉米夫定治疗HBVYMDD变异的临床分析

目的分析未经拉米夫定治疗的HBV病毒YMDD变异出现的情况,探讨HBV病毒YMDD变异出现可能的机理,了解以YMDD自然变异的慢性HBV感染患者的肝损害情况。方法对140例HBVDNA阳性,未经拉米夫定治疗的慢性HBV感染者进行YMDD检测,同时检测谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、血清总胆红素(TBIL)、白蛋白(ALB)、发病年龄、HBeAg与抗HBe等临床相关指标。结果140例未经拉米夫定治疗的慢性乙肝病毒感染者中20例自然发生YMDD变异,YMDD变异组与未变异组引起的肝损害无显著性差异(P>0.05)。YMDD变异与HBeAg与抗HBe的阳性表达无明显差异(P>0.05)。结论HBV病毒YMDD变异株作为一个准种与野毒株同时存在感染个体,YMDD变异对肝损害严重性无关,YMDD变异与HBeAg阳性率与抗HBe阳性率无明显差异。

乙型肝炎病毒基因型、YMDD变异与拉米夫定治疗后HBV DNA反弹关系的研究

目的探讨HBV基因型、YMDD变异与拉米夫定抗病毒治疗后HBV DNA反弹的关系。方法应用多引物对巢式PCR法、PCR-序列分析法检测拉米夫定治疗的27例乙型肝炎患者和19例从未用过抗病毒治疗的患者HBV基因型和P区(YMDD)的突变位点。结果在27例HBV DNA反弹的患者中,13例(48.15%)检出YMDD变异,而对照人群无YMDD变异(P<0.05)。YMDD变异的位点为rtM204V/(IC区)±rtL180M(B区);在治疗组YMDD变异的患者中,B、C基因型构成比(46.15%和59.26%)与对照组(53.85%和68.42%)比较无显著性差异(P>0.05)。结论YMDD变异是拉米夫定治疗后出现耐药导致HBV DNA反弹的主要原因;YMDD变异的常见位点依然为rtM204V/I(C区)±rtL180M(B区);YMDD变异在B、C基因型病人中无差别。

基因芯片技术检测HBV HCV及HBV YMDD变异株

目的:探讨基因芯片技术在乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)及HBVYMDD变异株检测中的应用.方法:采用HBV、HCV联合基因芯片检测40份血清标本,并与HBV,HCV基因定量检测方法比较;采用HBVYMDD变异株芯片检测20份血清标本,并与错配PCR及DNA序列测定方法比较.结果:HBV,HCV联合基因芯片与HBVDNA定量检测的符合率为85%(34/40),HBV检出率为83%(19/23),假阳性率为12%(2/17);与HCVRNA定量检测的符合率为85%(34/40),HCV检出率为58%(7/12),假阳性率为4%(1/28).HBVYMDD变异株芯片与本室设计的错配PCR符合率为70%(14/20),5份芯片检测的标本与DNA序列测定结果一致,该芯片尚可检测出不同病毒体或变异体的混合感染.结论:HBV,HCV联合基因芯片对HBV的检测有较高的敏感性,但存在一定程度的非特异性;对HCV的检测敏感性偏低,但特异性较高.HBVYMDD变异株芯片敏感性和特异性均较高,同时能检测出病毒变异体的共生现象.

乙肝肝硬化发生HBV YMDD自然变异的意义探讨

目的探讨乙肝肝硬化情况下,乙肝病毒发生YMDD自然变异的几率及对肝硬化发展的影响。方法对106例未应用过抗病毒药物的乙肝肝硬化病例,检测其YMDD变异,乙肝病毒载量,HBVM,肝功;根据YMDD变异情况,分为YMDD变异组与未变异组,进行对比分析。结果106例乙肝肝硬化患者中检出YMDD自然变异株者28例(26.41%),发生YMDD变异组与未变异组比较,在性别、HBeAg、病毒载量方面未显示有差异性,而肝功能指标中ALT及AST高,二组有显著性差异。结论在乙肝肝硬化患者中存在着HBV YMDD自然变异株,发生YMDD变异的患者肝内炎症稍重。

拉米夫定治疗慢性乙型肝炎过程中HBV发生YMDD变异的检测

目的建立乙型肝炎病毒Ｐ基因区ＹＭＤＤ变异的检测方法，对用拉米夫定治疗５２周出现耐药的病人进行检测。方法从８８例治疗病人中选择１０例服用该药后ＨＢＶＤＮＡ转阴（＜１．６ｐｇ／ｍｌ），５２周时又反跳≥２０ｐｇ／ｍｌ的病人，用 ＰＣＲ后直接测序的方法，分别对 ０周和 ５２周标本进行 ＨＢＶ ＤＮＡ聚合酶活性区域的测序。结果 １０例服药５２周后ＨＢＶ ＤＮＡ反跳病人中７例测得ＨＢＶ ＹＭＤＤ变异。其变异分为两种类型：第一种类型为ＹＶＤＤ有５例，有核苷酸Ａ７４１→Ｇ，均伴有Ａ６６９→Ｃ的变异。第二种类型为ＹＩＤＤ有２例，有核苷酸Ｇ７４３→Ｔ，其中１例还有Ｔ７８１→Ｃ。结论少数病人在拉米夫定治疗过程中出现耐药，可能和ＨＢＶ ＹＭＤＤ变异有关。

HBVP基因YMDD变异的检测及临床应用的初步研究

目的采用错配PCR扩增方法进行HBVP基因YMDD变异的检测,对其临床意义进行初步的研究。方法应用分子克隆方法,构建YMDD、YVDD和YIDD变异的阳性质粒,并对该方法进行敏感性及特异性试验。对65例未经抗病毒治疗的乙型肝炎患者检测YMDD变异情况。结果经PCR方法、酶切鉴定及直接测序鉴定出YMDD、YVDD和YIDD质粒构建成功,且该方法具有较好的敏感性和特异性。65例未经拉米夫定治疗的乙型肝炎患者存在YMDD变异,出现变异6例,阳性率为9.07%;其中YIDD和YI/YMDD各1例,YVDD3例,YV/YMDD1例。结论本检测方法简便、实用,在未经抗病毒治疗的患者中可存在YMDD变异,其与野生株一样是自然存在的,抗病毒药物压力不是导致HBVYMDD变异的唯一因素。

乙型肝炎患者HBV-DNA载量及基因型与YMDD变异的相关性研究

慢性持续性乙肝病毒（mV）感染，可导致严重肝病，并可进一步发展为肝硬化和肝癌。拉米夫定具有抑制HBV复制，使肝功能正常化、肝组织病理学改善、副作用小等优点。但服用拉米夫定后，将诱发HBV-DNA聚合酶活性区酪氨酸-蛋氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸（YMDD）发生变异，从而导致机体产生耐药，并且这种变异与服药时间的长短有关。作者对128例经拉米夫定治疗20-96周后的乙肝患者进行回顾性分析，检测治疗前后HBV-DNA水平及基因型分析，以及治疗后YMDD变异情况，旨在探讨病毒变异与血清HBV-DNA水平及基因型的相关性，并初步探讨其临床意义。

使用/未用拉米夫定HBV慢性感染者中YMDD基序变异的检测

目的 探讨接受拉米夫定治疗的慢性乙型肝炎病毒 (HBV)感染者YMDD基序变异的分子生物学机理。方法 以RFLP法筛选HBVYMDD基序变异 ,阳性者作直接测序的方法 ,分别检测 1 9例正在应用拉米夫定治疗的慢性乙型肝炎患者以及 86例未用拉米夫定的HBV感染者的血清标本。结果 1 9例正在应用拉米夫定治疗的患者中检测出 2例YMDD基序变异 ,测序结果分别为YIDD和YVDD变异。在 86例未用拉米夫定或其他抗病毒药物治疗的HBV感染者中检测出 3例YMDD基序变异 ,测序结果分别为YIDD 1例和YVDD 2例。结论 在未用拉米夫定的HBV感染者中同样存在着YMDD基序变异 。

子午流注针法对减少慢性乙型肝炎HBV-YMDD变异的临床观察

目的观察运用子午流注针法对减少乙型肝炎病毒YMDD变异的临床疗效。方法将220例慢性乙型肝炎患者随机分为对照组88例,治疗组132例,分别给予拉米夫定口服,治疗组在此基础上加用子午流注针法联合治疗24个月,分阶段观察患者ALT复常率、HBeAg阴转率、HBV-DNA阴转率,及治疗12个月、18个月、24个月的YMDD变异率。结果治疗组较对照组在ALT复常率、HBV-DNA阴转率、HBeAg阴转率、治疗24个月时YMDD变异率方面均明显优于对照组(P<0.05)。结论运用子午流注针法联合拉米夫定治疗慢性乙型肝炎,对改善患者肝功能,提高拉米夫定抑制病毒复制具有良好的作用,并可减少病毒YMDD变异。

HBeAg转阴与HBV基因型分布和YMDD变异位点的相关性分析

目的研究感染乙型肝炎病毒患者的乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)转阴与长期应用拉米夫定诱发的YMDD变异和病毒基因型的相关性。方法选取本院确诊的慢性乙型肝炎患者1 200例,其中HBeAg血清学转阴患者577例,未转阴患者623例,检测患者HBeAg、乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA)和HBV基因型,并比较和探讨3者的关系。结果 577例HBeAg阴性患者中有233例(40.38%)存在病毒复制(HBV-DNA≥103);对233例基因分型显示,A、B、C、D基因型分别为163例(69.96%)、57例(24.46%)、11例(4.72%)、2例(0.86%);YMDD突变检测发现,233例患者中106例(45.49%)发生YMDD突变,其中Ⅴ突变68.87%,Ⅰ突变22.64%,Ⅰ/Ⅴ共生突变8.49%。在106例YMDD突变患者中A、B、C、D基因型分别为0例(0.00%)、72例(67.92%),27例(25.47%),7例(6.60%)。结论本院所在地区HBeAg血清转阴的慢性乙型肝炎患者病毒复制仍保持一定的活力,持续监测病毒拷贝数、YMDD突变和基因型对于此类患者治疗非常必要。

慢性HBV携带者YMDD自然变异的追踪研究

目的探讨慢性HBV携带者YMDD自然变异随时间的推移发生变化的情况。方法随机选择未经抗病毒治疗的慢性HBV携带者103例,分别在开始、1年、2年时观察血清HBV DNA、HBV血清学标志物、肝功能、YMDD变异的变化情况。结果在开始检测的103例慢性HBV携带者中,YMDD阳性27例,观察2年后4例转为非活动性HBsAg携带者且YMDD转为阴性;76例YVDD变异阴性的患者中,观察2年后1例病毒水平增高并出现YMDD变异。结论 YMDD自然变异株在慢性HBV携带者中相对较稳定,YMDD自然变异株可随野生株的消失而消失。

慢性乙型肝炎患者HBV DNA YMDD变异的检测及意义

目的 了解慢性乙型肝炎患者HBVDNAYMDD变异的存在情况及意义。方法 检测 90例慢性乙型肝炎患者HBVDNAYMDD变异 ,对发生HBVDNAYMDD变异的 2 0例患者的肝功能、HBeAg、HBVDNA及HBVDNAYMDD变异情况进行分析。结果 90例慢性乙型肝炎患者中检出HBVDNAYMDD变异共 2 0例 (阳性率 12 0 0 % ) ,已服用拉米夫定者 3 6例 ,检出YMDD变异 9例 (2 5 0 0 % ) ,未服用拉米夫定患者 5 4例 ,检出YMDD变异 11例 (阳性率 2 0 3 7% )。在 2 0例YMDD变异患者中有 5例HBeAg阴性 ;2 0例YMDD变异患者HBVDNA在 3 0 2 1× 10 5～ 2 3 69× 10 8(5 41× 10 7± 7 75× 10 7)copies/ml ,ALT 3 4～ 12 16(2 88 2 0± 3 3 8 0 7)IU/L ,TB 8 9～ 3 2 6 7(4 8 74± 72 2 0 ) μmol/L。 结论 YMDD变异株可在拉米夫定治疗过程中出现 ,也可天然存在 ,YMDD变异可与前C基因变异同时存在 ,提示HBV的变异常常是多位点的 ;YMDD变异株HBV复制处于中～高度水平 ;YMDD变异株的致病性轻重不等 ,肝功能可为正常 ,也可是轻度～高度等不同程度异常。

HBVP基因YMDD变异的检测及临床应用的研究

目的 采用错配PCR扩增方法进行HBVP基因YMDD变异的检测 ,对其临床意义进行初步的研究。方法 应用分子克隆方法 ,构建YMDD、YVDD、YIDD变异的阳性质粒 ,并进行敏感性及特异性试验。对 44例经拉米夫定治疗 1年HBVDNA持续阳性的乙型肝炎患者检测YMDD变异情况。结果 经PCR方法、酶切鉴定及直接测序鉴定出YMDD、YVDD、YIDD质粒构建成功 ,且该方法具有较好的敏感性和特异性。 44例拉米夫定治疗 1年HBVDNA持续阳性的乙型肝炎患者存在YMDD变异 ,半年出现变异 5例 ,变异率为 11 . 3 6%:1年出现变异 7例 ,变异率为 15 . 91%。结论 本检测方法简便、实用 ,抗病毒药物压力是导致HBVYMDD变异的重要因素。

阿德福韦酯联合拉米夫定治疗HBV-YMDD变异的研究

目的比较阿德福韦酯联合拉米夫定和单用阿德福韦酯治疗YMDD变异的慢性乙型肝炎的疗效和安全性。方法将112例在拉米夫定治疗过程中出现YMDD变异的慢性乙型肝炎患者随机分为两组(各56例),治疗组:继续接受拉米夫定100mg·d-1治疗,全程联合阿德福韦酯10 mg·d-1;对照组:拉米夫定100 mg·d-1和阿德福韦酯10 mg·d-1联合治疗12周后单用阿德福韦酯10 mg·d-1,疗程96周。结果两组患者治疗后ALT、AST水平均较治疗前显著改善(P<0.05);治疗组治疗48周,96周时肝功能ALT、AST改善优于对照组(P<0.05);HBV DNA转阴率显著高于对照组(P<0.05)。结论阿德福韦酯对YMDD变异的慢性乙型肝炎患者有良好的疗效和安全性,联合拉米夫定临床疗效更显著。