HBV基因分型和耐药突变基因检测

目的探讨东营地区乙型肝炎病毒(HBV)基因型分布,乙型肝炎患者耐药情况,HBV基因型别与耐药以及突变位点关系。方法收集乙型肝炎患者血清300例,采用离心柱法提取HBV-DNA,聚合酶链反应(PCR)-反向点杂交法检测HBV分型和耐药突变。结果 300例HBV-DNA阳性患者中,检出B型、C型、B/C型及其他未检测出的基因型,未检出D型分型,检出结果中以C型为主,占81.8%;HBV患者耐药药物以拉米夫定和替比夫定的联合耐药为主,占43.6%;HBV耐药突变基因型主要为rt204I(24.35%)、rt204V(17.39%)及rt180M(17.39%);B型和C型的耐药突变率分别为30.77%和42.42%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论东营地区HBV基因C型多于B型,C型容易产生耐药,以rt204I,rt204V及rt180M基因突变型多见,拉米夫定和替比夫定的联合耐药多见,应根据基因分型和耐药突变结果对乙型肝炎患者选择适合的治疗方案。

乙型病毒性肝炎患者检测HBV基因分型、耐药变异的价值和意义

目的通过一体化鉴定探讨乙肝病毒肝炎患者HBV基因分型和耐药变异的临床价值与意义。方法选取本院收治的73例乙肝病毒肝炎患者,以拉米夫定为首选治疗药物,以阿德福韦酯和恩替卡韦为耐药患者替代治疗药物;所有患者均取清晨空腹静脉血,利用MassARRAY Assay和实时定量PCR技术进行基因分型和耐药变异测定,对其用药情况进行为期3年的追踪分析。结果基因分型:本组病例包括B型40例(54.79%)、C型32例(43.84%)、及D型1例(1.37%),未见其他基因分型患者。耐药变异:在为期3年的追踪治疗中,共发生耐药变异33例(45.21%),其中B型变异率27.5%(11/40),C型变异率68.75%(22/32),D型无变异,各基因型之间差异显著(P<0.05);治疗1、2、3年的耐药变异率分别为3例(4.11%)、9例(27.27%)、21例(63.64%),随着治疗时间的延长显著升高(P<0.05);B型基因以YVDD变异为主,占81.82%(9/11),其余2例为YIDD变异(18.18%),C型基因均为YIDD变异,其变异类型差异显著(P<0.05)。结论乙肝病毒肝炎患者HBV基因分型和耐药变异具有一定的相关性,对乙型病毒性肝炎的抗病毒治疗效果有一定影响,利用MassARR.AY Assay高通量技术建立HBV基因分型、耐药变异、前C区/BCP区突变检测技术,可为乙型病毒性肝炎的临床诊治提供指导性策略。

慢性乙型肝炎患者HBV基因分型与疾病严重程度的相关性研究

目的探讨慢性乙型肝炎患者HBV基因分型与病情严重程度的相关性。方法对105例慢性乙型肝炎患者血清HBV-DNA阳性的标本,采用PCR-反向点杂交法测定HBV基因分型,同时检测患者的肝功能指标丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBil)、谷氨酰转肽酶(GGT)。结果 105例HBV-DNA阳性的标本中B型、C型、非B非C型各为45例、45例和15例,分别占42.9%、42.9%和14.2%。各型在病情和肝功能指标ALT、AST、TBil、GGT的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论慢性乙型肝炎患者HBV基因分型与病情严重程度没有相关性。

乙型肝炎病毒(HBV)基因分型新近认识

乙型肝炎病毒属嗜肝DNA病毒科,是目前发现最小的DNA病毒,其基因组为双链不完全环行DNA,约3200个碱基对组成,有4个开放读框(ORF)即S,C,P,X,分别编码4个主要的病毒蛋白-多聚酶(P)、X蛋白、包膜(S)和核心蛋白(C).HBV基因分型的依据是以HBV全基因序列核苷酸差异≥8%作为标准,至今将乙型肝炎病毒株分为A至H 8种基因型.随着近年来HBV新基因型的发现,国内外学者从病毒学,流行病学和临床医学等方面进行了大量研究,对HBV基因型的地理性分布已基本明确,而HBV基因型与HBV引起的临床疾病的相关性研究有待进一步深入.

多位点ARMS-PCR法进行HBVS区检测分型

目的建立一种准确有效的PCR法HBV分型的实验方案。方法对80例包含了HBV不同型别(B/C/D型)的血清样本进行了HBV S区测序,通过分析国人HBV B/C/D型S区碱基固有差异位点,设计得针对各种HBV型别的高度特异性ARMS引物与探针,并用于另外120例HBV样本的PCR检测实验,同时进行测序进行检测准确度验证。结果多位点ARMS-PCR法与测序法的型别检出吻合率为99.5%,其中一例HBV B/C型混合感染由ARMS-PCR法检出并经追溯确认。结论经验证可见设计于S区型别固有差异位点之上的ARMS引物与探针于PCR检测中能以极高的特异性对HBV血清样本进分型,并能检出HBV混合型中的劣势病毒株。PCR法以其低成本、结果容易判定以及高灵敏度等优点,于临床HBV分型上是更为推荐的分子诊断学方法。

一种现场快速型HBV基因分型方法及装置

介绍一种现场快速型HBV(乙型肝炎病毒)基因分型方法及装置,包括生物传感器与手持式荧光检测仪。为了提高检测灵敏度与准确性,采用荧光标记法。荧光检测仪采用简化方法来快速读取侧向流试纸上各测试线及质控线的信号幅值,基于预先建立的HBV基因分型模式匹配模型,实现快速分型。对48份HBV血清样本进行检测,实验结果表明,基于荧光检测仪及侧向流试纸的分型检测结果与传统核酸分析方法的分型检测结果一致,分型准确率达100%。与传统方法相比,现场快速型基因分型方法及装置可降低HBV分型检测的复杂度,缩短检测时间,降低检测成本,对乙肝个体化用药与个性化治疗具有重要意义。

宁夏地区朝觐人员HBV感染者基因分型研究

目的了解宁夏地区朝觐人员乙型肝炎基因分布特点,为探讨宁夏地区朝觐人员乙肝流行趋势提供科学依据。方法采用ELISA法对宁夏地区2010至2012后采用荧光PCR检测方法,对乙肝病毒感染者进行基因分型。结果 90例乙型肝炎HBs Ag阳性者HBV DNA经荧光PCR方法分型,B型5例(5.56%),C型82例(91.11%),其他型3例(3.33%),经统计学分析不同基因型分布有统计学意义;HBV DNA基因型在性别中分布无差异,因此,认为性别与乙肝基因型不具有相关性。结论宁夏地区朝觐人员乙型肝炎患者HBV基因型分布基本符合我国北方的分布特点,以C型为主。

不同分析方法用于HBV基因分型的对比

LiPA及DNA测序均检测出63个D型病毒株、4个A型病毒株及13个A型及D型混合病毒株。基于PCR-RFLP方法正确检出了所有4个A型病毒株,但63个D型病毒株中仅正确检出56个。该7个未检出的D型病毒株被定为不确定型。通过对DNA测序结果进行比较,研究发现目标区域中的一处单核苷酸变异产生了一个新的NlaIV的限制性内切位点,从而影响到消减PCR-RFLP分析的准确性。另外,所有的A型及D型混合病毒株均被消减PCR-RFLP分析判定为A型病毒株。

核酸测序法与荧光PCR法测定HBV基因分型比对试验研究

探讨核酸序列测定法(以下简称核酸测序法)与荧光PCR法测定乙型肝炎病毒(HBV)基因分型的效果。方法 选择2020年5月至2021年6月期间在本院进行健康体检的185例体检者血样作为研究资料。留取体检者血样,分离血清后冷冻保存,样本均分为两份,分别采用核酸测序法与荧光PCR法测定HBV基因分型,对比两者各基因型检出情况,以核酸测序法为金标准,参照其检测结果,评估荧光PCR法检测的灵敏度、特异度和准确性。结果 核酸测序法检测结果显示:82例体检者为HBV携带者(阳性),阴性者103例。荧光PCR法检测显示:83例体检者为HBV携带者(阳性),阴性者102例。核酸测序法是HBV检测的金标准,以此为参照,荧光PCR法对HBV诊断灵敏度为98.78%、特异度为98.06%、准确率为93.38%。核酸测序法对HBV B型、HBV C型、HBV D型和HBV A型检出率与荧光PCR法比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 荧光PCR法对HBV基因分型的诊断准确性高,且具有灵敏度好、特异度高等优势,与核酸测序法比较,诊断结果一致性较好,可作为HBV筛查与分型检测的首选检测方法。

HBV基因型在不同临床感染者中的分析和干扰素治疗应答

目的:探讨山东地区HBV基因型在不同病情感染者之间的分布和基因型与干扰素治疗应答的关系。方法:随机选择249例慢性HBV感染者,用巢式PCR进行A-F基因型别分析,对其中126例慢性乙型肝炎患者采用α干扰素治疗,300万u/次,肌肉注射,3次/周,疗程6个月,所有患者均在治疗前、治疗期间及治疗后检测肝功能、HBV血清学指标及HBV DNA。结果:249例中无症状携带者53例,慢性肝炎126例,肝硬化38例,重型肝炎32例。在A-F基因分型中,无症状携带者组以B基因型为主28/53(52.8%),而C基因型则在活动性肝病中占优势:慢性肝炎69/126(54.8%);肝硬化20/38(52.6%);重型肝炎17/32(53.1%),差异有统计学意义(P<0.05)。在慢性肝炎组中,B基因型组HBV DNA定量及ALT水平均较C基因型组和B+C基因型组为低,差异有统计学意义(P<0.01)。不同基因型组间,年龄、性别差异无统计学意义(P>0.05)。126例慢性乙型肝炎患者用α干扰素治疗6个月,完全应答率:B型19/38(50%),C型9/69(13%),B+C型5/19(26.3%),与B基因型和B+C基因型相比,C基因型对干扰素抗病毒治疗应答率显著低(P<0.05)。结论:山东地区HBV C基因型在活动性肝病中占优势;HBV C基因型对α干扰素抗病毒治疗的完全应答率较低。

遵义地区慢性乙型病毒性肝炎少数民族患者检测基因分型与耐药变异的相关性和意义

目的研究2015年4月-2017年4月遵义地区苗族、仡佬族慢性乙型肝炎(HBV)患者63例基因分型和耐药基因变异相关性和意义。方法选择63例HBV DNA阳性慢性乙型病毒性肝炎少数民族患者,以拉米夫定为首选治疗药物,以阿德福韦醋和恩替卡韦为耐药患者替代治疗药物;所有患者进行HBV基因分型,并进行耐药变异测定,对其用药情况进行为期2年的追踪分析。结果基因分型:本组病例包括B型43例、C型19例、BC混合型1例。在为期2年的追踪治疗中,共发生耐药变异12例(19.04%),其中B型变异率11.62%,C型变异率36.84%,各基因型之间差异显著(P<0.05);治疗1年、2年的耐药变异率随着治疗时间的延长显著升高(P<0.05);B型基因YVDD变异为主,占80%,其余1例为YIDD变异占20%,C型基因均为YIDD变异。结论慢性乙型病毒性肝炎少数民族患者HBV基因分型和耐药变异具有一定的相关性,建立基因分型、耐药变异、前C区突变检测技术可为乙型病毒性肝炎的临床诊治提供指导性策略。

HBV基因型与干扰素抗病毒疗效的关系

目的:探讨HBV不同基因型对α- 干扰素抗病毒疗效的影响。方法:选取应用α-干扰素进行抗病毒治疗的慢性乙型肝炎患者作为研究对象,观察其抗病毒疗效。患者的HBV基因型采用PCR微板核酸杂交 ELISA方法检测;血清HBVDNA复制水平采用荧光定量PCR检测;HBV前C区和BCP (基础核心启动子)区基因位点变异采用HBV基因多态性芯片进行检测。结果:94例慢性乙型肝炎患者的HBV基因型以C型、B型为主,未发现A、E、F基因型。HBVDNA高复制水平明显与C基因型及混合基因型有关。B基因型对α- 干扰素抗病毒治疗的应答明显优于C、D型,而混合基因型对α- 干扰素的应答最不敏感。仅B基因型对α- 干扰素治疗产生完全应答。部分应答及无应答时HBeAg的转阴与HBV前C区nt 1 896位点变异、以及BCP区nt 1 76 2、nt 1 76 4双位点变异有关。C基因型HBV前C区及BCP区基因变异发生率明显高于B型。结论:HBV基因型与HBVDNA复制水平、HBV基因变异以及α-干扰素抗病毒疗效均有一定的相关性,提示HBV基因分型有重要的临床意义。

长春地区598例乙型肝炎病毒基因分型及耐药变异分析

目的研究长春地区598例乙型肝炎患者乙型肝炎病毒(hepatitis B virus)基因分型及耐药基因突变情况。方法收集598例HBVDNA高于检测下限(>1000拷贝/m L)乙型肝炎患者血清,PCR反向点杂交法检测HBV基因型和耐药变异位点。结果 598例样本中,B基因型35例(5.85%),C基因型525例(87.79%),BC混合基因型32例(5.35%),D基因型2例(0.33%),未分型4例(0.67%)。79例发生HBV耐药变异,总体变异率为13.21%,其中B基因型3例(3.80%),C基因型73例(92.41%),BC混合基因型2例(2.53%),未分型1例(1.27%);rt M204检出率最高75.94%(60/79),rt M204变异位点耐药突变模式有10种类型。结论长春地区HBV感染患者基因型以C基因型为主,HBV基因耐药以rt M204位点检出率最高,变异模式复杂。

拉米夫定对前C区变异乙肝的治疗与乙肝病毒基因分型的研究

目的:探讨前C区变异的乙型肝炎患者基因型与拉米夫定疗效的关系。方法:随机选择80例HbeA g阴性、血清丙氨酸氨基转氨酶异常的慢性乙型病毒性肝炎患者,检测其HBV基因分型,并给予拉米夫定治疗。于治疗后第1,3,6,9,12个月分别检测患者肝功能及乙肝病毒定量变化,治疗9个月后再次检测乙肝病毒基因分型。结果:前C区变异乙型肝炎患者HBV基因分型:B型6.25%,C型26.25%,D型52.5%,E型8.75%,CD混合型5%,F型1.25%。HbeA g阴性乙型肝炎患者口服拉米夫定HBVYM DD突变株(Y IDD/YVDD)多发生于HBV基因型D型、C型。前C区变异多发生于HBV基因型D型。结论:前C区变异多发生于HBV基因型D型,C型、D型对拉米夫定疗效依次降低。

HBV感染指标检测及在诊断治疗中的应用

传统的检测乙肝的方法为"乙肝两对半"和肝功能检测,但这两种方法均不能测定乙肝病毒在体内的含量及复制情况、传染程度,是否有必要继续服药,如果盲目给患者用药,恐因个体差异而引起治疗失败。致使病情延误,随着医疗技术水平的发展,乙肝两对半定性及定量、乙肝DNA定量、前S1抗原、HBV基因分型的检测,为临床诊断及治疗提供了可靠的依据,成为临床治疗疗效测定的依据。

乙型肝炎病毒基因分型的研究进展

自从1988年Okamoto等首次根据组间全基因序列差异≥8%对HBV进行基因分型以来,对HBV基因分型方法学上的改进、和其所存在的地域性、民族特异性、以及它的临床意义都展开了大量研究,这对从分子水平阐明不同基因型的流行势态,和对其病因学的研究,加强对HBV的防治有重要意义.基因型反映了HBV自然感染史发生的变异特点,是病毒变异进化的结果,对其分型标准的依据是全基因序列同源性≥92%或S基因序列同源性≥96%.大量HBV序列分析工作提示S基因序列稳定,不同基因型各开放读框中S基因异质性最大,而同一基因型中的各毒株S基因异质性最小,因而S基因适于基因型分型.目前HBV基因型分型方法学有4种,可将其分为A、B、C、D、E、F、G等7种.其分型方法包括1、全基因或S基因测序法,该方法是鉴定基因型的金标准,但工作量大.2、Lindh等创立的S基因的聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）法,可鉴定89%的基因型,国内文献[1]报道对PCR-RFLP方法进行了改进,可鉴定95%以上的标本,但PCR-PFLP分型法所需时间较长、步骤较多,且遇到混合感染或酶切不完全,就会出现复杂带型,因此目前建立的PCR-PFLP分型方法都不能鉴定100%的标本.3、多引物PCR分型方法[2],它是在对114例HBV全序列进行充分比较分析的基础上,找出每种基因型相对于其他各种基因型的独特序列,并根据这些独特序列设计出6对分别针对性A-F型的诊断引物,利用其仅需一次PCR可得出分型结果,理论上能鉴定100%的标本.4、单克隆抗体酶联免疫吸附法,该方法虽然简便,但要建立一套单克隆抗体则较为困难,且难以从基因水平上对HBV进行分型.HBV的基因型分布在不同地理区域有不同的特点.

汕头献血人群HBV DNA定量检测结果与乙肝两对半模式分析

目的分析献血人群中HBV DNA定量检测结果与乙肝两对半模式的关联。方法对于献血者血液筛查出来的HBs Ag阳性者进行乙肝两对半检测、HBV DNA荧光定量PCR检测,对于荧光定量PCR高于1000 IU/ml的进行DNA测序。结果所测样本存在9种HBV-M模式,各种模式都有一定比率的DNA活动性复制,测序标本均为HBV B型。结论献血人群的乙肝病毒携带者中存在较高的病毒活动性复制,应予以重视和进一步研究,HBV基因型全部为B型,可能是本地献血人群的分布特点。