携带HBV包膜大蛋白DNA疫苗的减毒沙门菌在小鼠诱导免疫应答

探索一种简便、有效的乙型肝炎病毒DNA疫苗免疫方法。将编码绿色荧光蛋白的真核表达质粒pEGFPN1转化到减毒鼠伤寒沙门菌SL72 0 7,灌胃饲服BALB c小鼠 ,流式细胞术检测出小鼠脾细胞内表达的绿色荧光蛋白 ;构建编码HBV包膜大蛋白的DNA疫苗pCI S1S2S ,分别以SL72 0 7为载体的口服途径或直接肌肉注射途径免疫BALB c小鼠 ,检测小鼠的血清抗体、T细胞增殖和细胞毒性T淋巴细胞反应 ,结果表明两种免疫途径均能在小鼠体内诱生细胞和体液免疫应答 ,但口服途径诱导免疫应答的强度明显强于肌肉注射途径。口服携带HBVDNA疫苗的减毒伤寒沙门菌可能代表一种简便。

HBV表面抗原大蛋白与人胰腺CDK5RAP3蛋白的亚细胞定位研究

目的 运用激光共聚焦显微技术对CDK5RAP3与LHBs进行亚细胞定位研究,为进一步研究HBV影响糖、脂类代谢的分子生物学机制提供一定的思路和方向。方法应用酵母双杂交系统筛选人胰腺cDNA文库中的LHBs结合蛋白基因,构建真核表达质粒pDsRed1-N1-CDK5RAP3,应用激光共聚焦显微技术对CDK5RAP3与LHBs进行亚细胞定位研究。结果成功构建真核表达质粒pDsRed1-N1-CDK5RAP3,转染了pDsRed1-N1-CDK5RAP3质粒的细胞,红色荧光信号较集中分布于细胞浆中,与经DAPI染色的细胞核无重叠。结论证实LHBs基因和CDK5RAP3基因在体内可以表达蛋白,并提示LHBs蛋白和CDK5RAP3蛋白均主要定位在细胞浆内。

哺乳动物双杂交技术验证HBV表面抗原大蛋白与人胰腺CDK5RAP3蛋白间的相互作用

目的验证HBV表面抗原大蛋白(LHBs)与人胰腺CDK5RAP3蛋白在细胞内是否存在相互作用关系,为进一步研究HBV影响糖、脂代谢机制奠定研究基础。方法构建真核表达质粒pACT-CDK5RAP3,哺乳动物双杂交技术验证LHBs与人胰腺CDK5RAP3蛋白之间的相互作用。结果实验组和各阴性对照组差别均有统计学意义(P<0.05)。结论LHBs与人胰腺CDK5RAP3蛋白在细胞内存在相互作用关系,且单独转染后没有自身激活作用。

HBeAg阴性的慢性乙肝患者血清中LHBs与HBV-DNA水平的关系

目的:探讨低水平HBV-DNA乙肝患者乙肝病毒外膜大蛋白(hepatitis B virus large surface protein,LHBs)的表达及其意义,从而探讨LHBs是否可以用作乙型肝炎e抗原(hepatitis B e antigen,HBeAg)阴性乙型肝炎患者病毒复制程度的判定指标。方法:对83例HBeAg阴性的慢性乙型肝炎患者血清,采用ELISA进行LHBs检测,全自动免疫分析仪检测HBeAg,实时荧光定量PCR方法检测HBV DNA。分析HBV DNA无拷贝数组、低拷贝数组及高拷贝数组中LHBs的检出率以及HBV DNA不同拷贝数组与LHBs的相关性。结果:在HBV DNA无拷贝数组,LHBs的阳性率为6.38%;低拷贝数组,LHBs的阳性率为56.25%,吸光度值与拷贝数对数值没有显著的相关性(r=0.25,P=0.36);高拷贝数组,阳性率为95%,吸光度值与拷贝数对数值有良好相关性(r=0.90,P<0.0001)。结论:检测HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者血清LHBs,有助于判断患者体内HBV的复制程度,但是否能够作为HBeAg阴性乙型肝炎抗病毒治疗终点的有效判定指标,尚有待进一步探讨。

乙肝病毒外膜大蛋白的临床检测及其意义

通过对乙型肝炎病毒外膜大蛋白(Hepatitis B virus large surface protein,HBV-LP)结构、功能的阐述,分析其检测技术的发展历程,让临床医生更深层次的了解其临床意义,为今后广泛的应用于临床做好铺垫。HBV基因组的S区分为preS1、preS2和S基因3段。HBV-LP即由S、Pre-S1及Pre-S2基因区所编码。大蛋白的前S区具有独特的立体构象拓扑结构,是HBV-LP发挥多种功能作用的依赖性结构。拓扑结构决定其具有反式激活作用。在HBV DNA阴性的患者中,HBV-LP阳性可能是肝内病毒继续复制和抗病毒治疗不彻底的标志。使用酶联免疫定量方法检测HBV-LP与HBV DNA的检测有良好一致性,是反映HBV复制活跃的可靠指标,可以作为HBV感染、复制和乙肝患者诊断、治疗和预后的重要标志物,具有较高的临床应用价值。

HBV表面抗原大蛋白与人胰腺突触角蛋白6之间的相互作用

目的验证HBV表面抗原大蛋白(LHBs)与人胰腺突触角蛋白6(STX6)在细胞内是否存在相互作用,为进一步研究HBV影响糖、脂代谢机制奠定研究基础。方法构建真核表达质粒pACT-STX6,采用哺乳动物双杂交技术验证LHBs与STX6之间的相互作用。结果实验组和各阴性对照组相对荧光素酶活性值均存在差异,且均具有显著统计学意义(P<0.01)。结论 LHBs与人胰腺STX6在胰腺细胞内存在相互作用。