改良Alu-PCR技术检测HepG2.2.15细胞HBV整合的研究

目的采用改良Alu-PCR技术检测HepG2.2.15细胞中HBV整合位点。方法对传统检测HBV整合的Alu-PCR技术进行改良简化,检测HepG2.2.15细胞中的HBV整合位点,HepG2细胞进行对照。RT-PCR定量检测HepG2.2.15细胞中检测到的HBV整合位点和cccDNA水平。结果在HepG2.2.15细胞中检测到一插入Alu重复序列的HBV整合位点,病毒结合端为1228 nt,嵌合片段有3bp的同源序列(CTG)。加入双氧水(H_(2)O_(2))的HepG2.2.15细胞中该整合位点水平为(-1.13±0.07)lg拷贝/细胞高于未加入H_(2)O_(2)的(-2.10±0.82)lg拷贝/细胞,差异有统计学意义(P<0.01)。加入H_(2)O_(2)的HepG2.2.15细胞中cccDNA水平为(-1.94±1.45)lg拷贝/细胞,未加入H_(2)O_(2)的为(-1.79±1.40)lg拷贝/细胞,差异无统计学意义(P=0.915)。该整合位点和cccDNA水平无显著相关性(P=0.463)。结论采用简易、经济的改良Alu-PCR技术检测HBV整合位点有效简化了实验步骤和节省实验费用,大大降低了HBV整合研究的门槛。对整合位点的定量检测显示肝细胞持续损伤可导致HBV整合细胞的优势克隆扩增。

HBV DNA整合诱发肝细胞癌分子机制的研究进展

肝细胞癌(HCC)是一种起源于肝细胞的恶性肿瘤,其病因尚未完全明确,目前已知乙型肝炎病毒(HBV)感染是其主要的病因。早期临床症状不明显,晚期主要以肝区疼痛、黄疸、进行性消瘦为特征,严重时甚至可以出现上消化道出血、肝性脑病。HBV整合是HBV不断将自身脱氧核糖核酸(DNA)整合入宿主基因组中,并且在一定程度上起到促癌的作用,在乙型肝炎相关HCC中,整合子可导致与细胞周期和生命活动有关的癌症相关基因上调,诱导染色体不稳定,产生病毒癌蛋白(HBX),导致其他(可能致癌的)病毒-人转录本融合(HBV-LINEⅠ)和激活端粒酶,这些机制可能单独或协同发挥作用,导致HCC的发生。本文就HBV DNA整合在乙型肝炎相关HCC中的作用机制及临床意义进行综述,有助于改善和提高现行的抗病毒治疗策略,提前采取有效措施,降低HCC的发生率。

肝癌细胞株-乙型肝炎病毒DNA整合事件的高通量靶向捕获测序分析

目的 采用探针捕获和高通量测序技术研究HepG2.2.15与HepAD38 2个乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)肝癌细胞系中病毒DNA在宿主基因组中的整合位点特征。方法 提取HepG2.2.15与HepAD38细胞基因组DNA,采用探针捕获和高通量测序策略对2个肝癌细胞株中整合的HBV DNA进行捕获测序,使用Trimmomatic、BBAP、BWA(Burrows-Wheeler Aligner)等生物信息学软件进行数据分析;最后通过聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)及克隆测序对病毒DNA整合特征进行验证。结果 利用探针捕获和高通量测序技术分别在HepG2.2.15与HepAD38细胞系中检测出12、7个HBV DNA整合事件,随机分布在chr1、chr2、chr7、chr9、chr16、chr17、chr19、chrX染色体上,整合位点上下游基因出现频率较高的有DPP7、TRIM56、GPC3等。结论 成功建立基于探针捕获和高通量测序技术检测HBV DNA在宿主基因组上的整合片段的方法,HepG2.2.15与HepAD38细胞系中HBV整合事件在染色体上随机发生,大部分整合位点发生在HBV基因组上的X基因区域。

整合的HBV DNA在慢性乙型肝炎患者病毒复制及慢性感染维持中的潜在作用

慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染是我国病毒性肝炎、肝硬化和肝细胞癌(HCC)的主要病因。慢性感染的各个阶段都存在频繁的HBV DNA整合至宿主肝细胞基因组中的事件发生。但现阶段对HBV整合的认识多集中在其促HCC的发生上。监管整合的HBV DNA无法转录出超基因组全长的、支持病毒逆转录复制的前基因组RNA(pgRNA),但其是否能够通过产生和提供病毒包膜蛋白HBsAg及羧基端缺失的HBx蛋白等参与支持病毒复制,特别是在HBV慢性感染维持中是否具有潜在作用,仍然未知。本文回顾现有的与HBV DNA整合相关的知识体系,尤其关注其在病毒复制及慢性感染维持中的意义。

慢性HBV感染者HBsAg血清学清除后为什么还发生肝细胞癌?

本文综述了慢性HBV感染者HBsAg血清学清除后发生肝细胞癌的风险、机制及启示。

论慢性乙型肝炎临床治愈

乙型肝炎病毒(HBV)感染仍是我国慢性乙型肝炎、肝硬化、肝衰竭及肝细胞癌的主要病因。HBV基因组有多种存在形式,其中共价闭合环状DNA一方面可作为HBV复制的模板,使得感染得以建立及维持;另一方面可与整合的双链线性DNA持续表达HBsAg,在慢性感染过程中导致宿主HBV特异性免疫的耗竭。因此,未来亟需研制发挥更强效抑制病毒复制、加速耗竭cccDNA的直接抗病毒作用及不良反应更小的特异调节抗HBV宿主免疫的新药,以期实现慢性乙型肝炎的临床治愈。

乙型肝炎病毒整合DNA在慢性乙型肝炎中的作用研究进展

乙型肝炎病毒(HBV)慢性感染会导致患者发生肝硬化、肝细胞癌的概率大大增加。现有的抗病毒治疗方案虽然对延缓病情进展,改善预后有一定的作用,但仍不能有效地达到功能性治愈。整合HBV DNA可能是造成该现象的原因之一。因此,现就整合HBV DNA在维持肝脏慢性炎症,逃避现有的抗病毒治疗手段并且诱导肝细胞癌的可能作用机制进行综述,进一步加深对整合HBV DNA在慢性乙型肝炎发生和发展中作用的认识,为制定更优治疗策略提供思路和参考。

早期积极抗HBV治疗有益于降低肝癌发生风险及HBV特异性T淋巴细胞免疫功能重建

作者以为《扩大慢性乙型肝炎抗病毒治疗的专家意见》[1](以下简称《专家意见》)中最大的亮点为:对于血清乙型肝炎病毒(HBV)DNA阳性者,无论丙氨酸转氨酶(ALT)水平高低、是否合并家族史,只要年龄>30岁,即建议抗病毒治疗。慢性HBV感染患者是否需要进行抗病毒治疗主要取决于HBV是否对肝细胞造成了损害以及不良预后的风险大小。一般情况下,对于没有或者极轻肝脏炎症的患者,不管HBV DNA载量多高,过去均认为不需要抗病毒治疗[2]。这一时期也被称为"免疫耐受期"。现在研究已证实"免疫耐受期"的高载量HBV虽未造成肝脏明显炎症及纤维化,但其HBV DNA会与肝细胞基因组发生整合,增加肝癌的发生风险[3]。因此,携带高载量HBV DNA的慢性HBV感染患者在"免疫耐受期"已发生肝细胞损害,只是这种损害可能仅存在于分子层面。

乙型肝炎病毒在弥漫性大B细胞淋巴瘤发生发展中的作用

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)属于嗜肝病毒科,感染人体后,病毒基因能与宿主基因发生整合,其遗传物质共价闭合环状DNA(covalent close circle DNA,cccDNA)能长期与宿主共存,难以完全清除。流行病学研究表明,HBV与非霍奇金淋巴瘤(non⁃Hodgkin´s lymphoma,NHL)密切相关,尤其是NHL中的弥漫性大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)。HBV在DLBCL发生发展过程中的作用主要涉及三种理论:慢性抗原刺激、HBV直接感染B淋巴细胞、隐匿性HBV感染。这些理论与载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽(apolipoprotein B mRNA⁃editing enzyme catalytic polypeptide⁃like,APOBEC)家族介导的癌基因突变、HBV DNA的整合、宿主中HBV的进化密切相关。本文就HBV感染在DLBCL发生发展中的作用进行综述,以期为HBV相关DLBCL研究提供新思路。

乙型肝炎病毒垂直传递的研究

应用分子杂交方法对24对夫妇乙肝患者（夫妇中至少有一个是乙肝患者、的流产绒毛、胎肝、胎儿内生殖系统组织进行HBV DNA检测和研究。22例绒毛DNA中检测出1例整合型合并游离型HBV DNA,阳性率为4.5％,2例胎肝DNA中检测出1例整合型合并游离型HBV DNA。从胎中检出整合型HBV DNA,从分子生物学角度证实了HBV宫内感染的存在;从绒毛中检出整合型HBV DNA,除证实上述传递途径外,并高度提示:HBV DNA存在经生殖细胞垂直传递子代的可能,还提出了只要病原微生物（细菌或病毒）DNA,整合到宿主生殖细胞,并垂直传递子代,传染性疾病就可以“遗传”的假说。