硫代磷酸反义寡脱氧核苷酸抗HBV细胞的实验研究

针对ＨＢＶ的５个基因位点作为靶序列，设计合成硫代反义寡聚核苷酸（Ｓ－ａｓＯＤＮ）．应用ＥＬＩＳＡ方法、ＭＴＴ比色法、电子显微镜等手段，观察Ｓ－ａｓＯＤＮ对ＨｅｐＧ２２２１５细胞ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ抗原的表达，及细胞的毒性、细胞形态和超微结构的影响．结果显示不同靶位点的Ｓ－ａｓＯＤＮ对ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ表达都有显著的抑制作用，且表现为序列特异性、剂量相关性、联合协同性和一定的抗核酸酶性，在浓度为２０μｍｏｌ／Ｌ时，对细胞无明显杀伤作用，对细胞的超微结构无显著的改变．结果提示Ｓ－ａｓＯＤＮ有望发展为抗ＨＢＶ的有效药物，但靶序列的选择、透细胞膜性及联合用药配伍等仍值得进一步研究和解决．

HBV相关肝细胞癌患者放射性肝损伤的影响因素

目的分析HBV相关肝细胞癌患者放射性肝损伤的影响因素。方法回顾性分析2020年9月至2022年9月常州市武进中医医院收治的200例接受SBRT的HBV相关肝细胞癌患者的临床资料,其中36例发生放射性肝损伤(发生组),164例患者为未发生组。比较两组临床资料,并作多因素分析。观察发生组患者放疗前、放疗2周、放疗4周达峰时间、曲线上升斜率、曲线下面积。结果发生组年龄>50岁、肿瘤直径>5 cm、Child-Pugh分级为C级的分别为86.1%(31/36)、47.2%(17/36)、63.9%(23/36),大于未发生组的68.3%(112/164)、25.0%(41/164)、35.4%(58/164)。白细胞计数为(3.5±1.5)×10^(9)/L,低于未发生组的(5.4±1.7)×10^(9)/L,(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,年龄>50岁、肿瘤直径>5 cm、Child-Pugh分级为C级、白细胞计数减少均为影响HBV相关肝细胞癌患者接受SBRT后放射性肝损伤的独立危险因素(OR=4.614、4.968、5.233、5.496,P<0.05)。与放疗前相比,放疗2周、4周发生组患者达峰时间明显延长,曲线上升斜率、曲线下面积明显缩小(P<0.05)。结论HBV相关肝细胞癌患者接受SBRT后可能出现放射性肝损伤,与高龄、肿瘤直径过大、肝脏储备功能差、白细胞计数减少有关。

HBV相关肝细胞癌患者PPP2R3A基因的表达与预后相关性分析

目的探讨蛋白磷酸酶2A调节亚基B″α(PPP2R3A)基因在HBV相关肝细胞癌患者中的表达水平以及与预后的关系。方法利用免疫组织化学方法检测PPP2R3A蛋白在82例乙肝相关性肝癌和21例良性肝病组织中的表达,采用RT-PCR方法检测mRNA水平。结果PPP2R3A在肝癌组织中的表达水平(95.12%)明显高于癌旁组织(43.9%)(P<0.05)。PPP2R3A蛋白的表达强度与肝癌患者的AFP值相关,具有统计学差异(P<0.05)。RT-PCR检测结果显示,肝癌组织中PPP2R3A mRNA中位表达水平为0.183(0.008~0.667),明显高于癌旁组织的0.098(0.004~0.583)(Z=6.839,P<0.05)。通过分析随访肝癌患者的生存期资料,结果发现PPP2R3A高表达组患者的总生存期(OS)的中位生存期为46.6个月,与低表达组的82.9个月比较差异有统计学意义(P<0.05)。PPP2R3A高表达组患者的RFS的中位生存期为18.3个月,低于低表达组的42.6个月(P<0.05)。PPP2R3A高表达组患者的PFS的中位生存期为15.9个月,低于低表达组的34.4个月(P<0.05)。PPP2R3A高表达组患者的DSS的中位生存期为70.5个月,低于低表达组的84.7个月(P<0.05)。结论PPP2R3A蛋白在HBV相关肝细胞癌组织及血清中呈高表达,且与肝癌的临床病理特征有相关性,PPP2R3A的高表达可能与肝癌的不良预后有关。

CD34、8-OHdG和Ki67在HBV相关肝细胞癌组织中的表达及对预后的意义

目的探讨CD34、8-OHdG和Ki67在HBV相关肝细胞癌组织中的表达情况及其与临床病理特征和预后的关系。方法对入组的HBV-HCC患者每3月随访一次,随访生存期5年。通过对HBV-HCC组织标本行免疫组织化学染色,检测CD34、8-OHdG和Ki67的表达情况。结果在HBV-HCC组织中,CD34、8-OHdG、Ki67均呈阳性表达,CD34在HBV-HCC组织中表达显著高于正常肝组织。CD34、8-OHdG和Ki67在HBV-HCC组织中的表达彼此呈正相关关系。多因素分析显示CD34、8-OHdG和Ki67是HBV-HCC患者预后的独立因素。结论 CD34、8-OHdG和Ki67可以作为评价HBV-HCC患者预后的指标。

热休克蛋白90α在HBV相关性肝细胞癌中表达的意义

目的:探讨热休克蛋白90α(HSP90α)在不同转移潜能人肝癌细胞株及HBV相关性肝细胞癌(HCC)患者血清中表达的临床意义。方法:采用Western blotting、ELISA技术检测不同转移潜能肝癌细胞株及HBV相关性肝癌患者、良性肝病患者和健康对照者血清中HSP90α表达水平;回顾性分析HSP90α表达与临床病理资料间的关系。结果:HSP90α在高转移潜能MHCC97H细胞中的表达水平显著高于无转移潜能HepG2细胞(P=0.0002)。肝癌患者及良性肝病患者血清中HSP90α表达水平均明显高于健康对照者(P=0.0001),但肝癌与良性肝病患者间差异无统计学意义(P=0.990)。肝癌患者血清HSP90α表达水平女性高于男性(P<0.05),患者年龄、HBeAg是否阳性、AFP水平、HBV DNA水平及TNM分期均无统计学差异(P>0.05)。结论:HSP90α与HBV相关性HCC转移潜能相关,可望成为HCC侵袭转移、预后评估及区分HBV相关性肝病与健康者的标志物之一。

HBV肝细胞内靶向转录调控研究进展

本文就近年有关反式调控

HBV特异性T淋巴细胞输注治疗慢性乙型肝炎临床研究

目的 :为探讨HBV特异性T淋巴细胞疗法的抗病毒疗效。方法 :应用此疗法治疗慢性乙型肝炎 15例 ,观察治疗后肝功能、乙肝病毒标记物 (HBVM)、细胞免疫、可溶性白细胞介素 2受体 (sIL - 2R)水平变化 ,并追踪随访 1年。结果 :经该疗法治疗后患者HBsAg、HBeAg、HBVDNA滴度均有下降 ,以随访 6个月时最明显 (P <0 .0 5 )。随访 12个月时HBeAg转阴 6例(4 0 .0 0 % ) ,HBVDNA转阴 6例 (4 0 .0 0 % )。治疗后CD8明显升高 (P <0 .0 5 ) ,完全反应者 ,sIL - 2R水平明显升高 (P <0 .0 5 )。结论 :HBV特异性T淋巴细胞输注疗法有抗病毒作用及近期疗效。

非HBV和HCV相关性肝细胞癌患者临床特征及预后影响因素分析

目的了解非HBV、HCV相关性肝细胞癌(NBNC-HCC)的临床特征及预后。方法2010年1月至2017年6月解放军总医院第三医学中心收治的HCC患者94例。其中血清HBsAg、抗-HCV均为阴性HCC患者26例(NBNC-HCC组);血清HBsAg或抗-HCV为阳性HCC患者68例(非NBNC-HCC组)。多因素Logistic回归分析NBNC-HCC发生的影响因素。结果NBNC-HCC组患者年龄(69.7±12.3)岁,非NBNC-HCC组年龄(62.4±8.3)岁,差异有统计学意义(t=12.40,P<0.05);NBNC-HCC组患者AFP 90.5(65.8,234.0)ng/mL,非NBNC-HCC组AFP 219.5(95.0,318.3)ng/mL,差异有统计学意义(Z=13.83,P<0.05);NBNC-HCC组患者ALT(26.6±14.7)U/L,非NBNC-HCC组ALT(38.5±1.7)U/L,差异有统计学意义(t=5.41,P<0.05);NBNC-HCC组患者Child-Pugh A级23例(88.5%),Child-Pugh B级3例(11.5%),非NBNC-HCC组患者Child-Pugh A级46例(67.6%),Child-Pugh B级22例(32.4%),差异有统计学意义(χ^(2)=4.17,P<0.05);NBNC-HCC组患者有血管侵犯3例(11.5%),无血管侵犯23例(88.5%);非NBNC-HCC组患者有血管侵犯29例(42.6%),无血管侵犯39例(57.4%),差异有统计学意义(χ^(2)=8.11,P<0.05);NBNC-HCC组患者肿瘤边界界清17例(65.4%),肿瘤边界界不清9例(34.6%);非NBNC-HCC组患者肿瘤边界界清17例(25.0%),肿瘤边界界不清51例(75.0%),差异有统计学意义(χ^(2)=13.29,P<0.05);NBNC-HCC组患者有肿瘤包膜22例(84.6%),无肿瘤包膜4例(15.4%);非NBNC-HCC组患者有肿瘤包膜32例(47.1%),无肿瘤包膜36例(52.9%),差异有统计学意义(χ^(2)=10.85,P<0.05)。多因素logistic回归分析得出AFP、Child-Pugh分级、血管侵犯、肿瘤边界及肿瘤包膜是NBNC-HCC发生的独立危险因素。结论AFP、Child-Pugh分级、血管侵犯、肿瘤边界及肿瘤包膜是影响NBNC-HCC发生的独立危险因素。

GSK-3β在HBV相关肝细胞癌中的作用

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染是肝细胞癌发生的最主要原因,尽管治疗方式多样,但其复发率高仍是肝细胞癌治疗的重大难题。本综述主要通过总结HBV感染后糖原合成酶激酶-3β(glycogen kinase synthase-3β,GSK-3β)分子的上游调节因子和下游靶向分子,介绍GSK-3β在HBV感染相关的肝细胞癌发生发展中的作用,阐述靶向GSK-3β分子方法在延缓乙型肝炎进展,降低乙型肝炎病毒引起肝细胞癌发生率中潜在的价值。

HOTAIR、Snail和Wnt3a在HBV相关肝细胞癌组织中的表达及对预后的影响

目的观察HOX转录反义RNA(HOTAIR)、锌指转录因子(Snail)和Wnt3a在乙型肝炎病毒(HBV)相关肝细胞癌(HCC)中的表达及其对患者预后的影响。方法收集2012年6月—2014年12月于复旦大学附属上海市公共卫生临床中心病理科经手术切除并经病理确诊的HBV相关肝细胞癌组织样本82份和正常肝组织样本35份,收集相关临床资料,采用qRT-PCR检测HOTAIR,免疫组织化学检测Snail和Wnt3a,分析三者与临床病理学特征、预后相关因素的关系。结果HOTAIR、Snail及Wnt3a在HBV相关肝细胞癌组织中的阳性表达率显著高于正常肝组织(χ^2=46.582、37.861、46.896,P均=0.000)。HOTAIR在患者不同TNM分期、组织分化程度、淋巴结转移及肿瘤直径方面比较,差异均有统计学意义(χ^2/P=11.267/0.001、14.858/0.001、6.165/0.013、7.736/0.005);Snail在不同TNM分期和淋巴结转移方面比较,差异均有统计学意义(χ^2/P=16.125/0.000、4.086/0.043);Wnt3a在不同TNM分期、组织分化程度及肿瘤直径方面比较,差异均有统计学意义(χ^2/P=9.208/0.002、32.377/0.000、7.360/0.007)。HOTAIR、Snail及Wnt3a的表达在HBV相关肝细胞癌组织中均呈正相关(HOTAIR与Snail:r/P=0.281/0.011,HOTAIR与Wnt3a:r/P=0.296/0.007,Snail与Wnt3a:r/P=0.285/0.009)。除TNM分期高、组织分化程度低、淋巴结转移及肿瘤直径大以外,HOTAIR、Snail及Wnt3a高表达也是影响HBV相关肝细胞癌预后的危险因素(P均<0.05)。HOTAIR、Snail及Wnt3a阳性患者的5年生存率均显著低于阴性患者(χ^2/P=5.380/0.020、5.937/0.015、5.385/0.020)。结论HBV相关肝细胞癌中HOTAIR、Snail及Wnt3a均高表达且互为显著正相关性,参与癌症的恶性进展,是导致患者预后不良的关键风险因素。

从HBV特异性免疫细胞角度谈慢性乙型肝炎功能性治愈

慢性乙型肝炎(CHB)患者实现功能性治愈代表患者获得了持久的病毒学抑制和免疫学控制,是目前国内外最新CHB防治指南推荐的理想治疗目标。CHB患者长期直接抗病毒治疗可获得病毒学抑制,但仅有极少数患者能获得功能性治愈,提示迫切需要抗病毒药物和免疫治疗的联合疗法。目前最佳治疗策略是靶向精准清除HBV感染的肝细胞,减少肝组织损伤;但这依赖于肝脏中HBV特异性免疫细胞。因此恢复或增强HBV特异性T淋巴细胞和B淋巴细胞的功能是实现CHB功能治愈的关键策略。

FGA、HSP90α、SPP1联合对HBV相关性肝细胞癌的早期诊断价值

目的探讨FGA、HSP90α、SPP1联合对HBV相关性肝细胞癌的早期诊断价值。方法纳入早期HBV相关性肝细胞癌患者70例为肿瘤组、肝硬化患者70例为肝硬化组、健康体检者70例为对照组;检测肿瘤组、肝硬化组和对照组血清中FGA、HSP90α、SPP1的表达量;用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)的AUC分析FGA、HSP90α、SPP1检测在HBV相关性肝细胞癌中的诊断意义。结果HBV相关性肝细胞癌患者血清中FGA、HSP90α、SPP1的表达量均显著高于肝硬化患者(P<0.05)和健康体检者(P<0.05);肝硬化患者血清中FGA的表达量高于健康体检者(P<0.05)。区分早期HBV相关性肝细胞癌患者与健康体检者的FGA、HSP90α、SPP1的灵敏度分别为87%,80%,83%,特异度分别为83%,87%,83%。血清中FGA、HSP90α、SPP1联合对HBV相关性肝细胞癌的诊断的的灵敏度为88%,特异度为90%,准确度为89%。结论血清中FGA、HSP90α、SPP1的表达量可作为诊断早期HBV相关性肝细胞癌的潜在标志。

恩替卡韦联合胸腺五肽治疗HBV相关肝细胞癌

目的探讨恩替卡韦联合胸腺五肽对HBV相关肝细胞癌的治疗效果。方法随机选取本院2015年2月—2017年2月收治的70例HBV相关肝细胞癌患者为研究对象,依照治疗方式分成对照组和观察组。对照组用胸腺五肽,观察组上加用恩替卡韦,对比治疗情况。结果观察组治疗总有效率明显高于对照组,差异存在统计学意义(P<0.05);两组治疗前丙氨酸氨基转移酶(Alanine aminotransferase,ALT)、乙肝病毒的脱氧核糖核酸(HBV-DNA)和生命质量差异无统计学意义(P> 0.05),两组治疗后上述指标差异有统计学意义(P<0.05)。结论恩替卡韦联合胸腺五肽治疗HBV相关肝细胞癌效果好,应用价值高。

HBV相关肝细胞肝癌微脉管癌栓局部免疫微环境对患者术后预后的影响

目的:探讨HBV相关肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)微脉管侵犯(microvascular invasion,MVI)癌栓局部免疫微环境对患者预后的影响。方法:入选2012年3月至2013年11月初诊HBV相关HCC患者。所有入选病例均有HBV感染史且无其他肝脏疾病基础,患者接受单纯手术治疗,术后均未接受介入、放化疗等其他治疗方案。所有病例均定期随访,末次随访至2018年11月30日,主要终点事件为术后HCC相关死亡或HCC复发,记录患者总生存期(overall survival,OS)及无复发生存期(relapse free survival,RFS)。根据术后病理结果将入选患者分为MVI组及无MVI组,采用单因素、多因素分析探讨MVI对患者预后的影响。进一步对MVI患者术后病理进行分析,采用数字病理切片定量分析癌栓T淋巴细胞、B淋巴细胞等免疫细胞数量,探讨癌栓局部免疫微环境对患者预后的影响。结果:共175例患者纳入研究,包括MVI组68例,无MVI组107例,截至随访终点有35例死亡、88例复发。单因素分析和多因素分析均显示,MVI是HCC患者术后RFS的危险因素(P<0.05)。ROC分析表明,MVI癌栓局部CD4+及CD8+T细胞对患者术后RFS具有预测价值(P=0.031、0.036),截断值分别为0.208、0.465。基于上述截断值分组后的生存分析结果表明,癌栓CD4+T和CD8+较高表达组患者术后RFS长于对应的较低表达组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:MVI是HBV相关HCC患者RFS重要且独立的影响因素,其癌栓内CD4+/CD8+T细胞数量可能与首发HCC患者术后复发风险负相关。

HBV/HCV协同感染后与HBV持续相关的急性期HBV特异性T细胞应答

To characterize acute-phase hepatitis B virus (HBV)-specific T cell responses associated with self-limited and persistent HBV infections, we compared a patient with acute HBV/HCV coinfection, who was able to control HCV but developed chronic hepatitis B, with patients who resolved acute HBV infection spontaneously. Acute-phase CD4 responses were efficient in self-limited infections but undetectable in the coinfected patient with HBV persistence. CD8 responses were multispecific irrespective of the outcome of infection, but the CD8 repertoire associated with HBV persistence lacked the most dominant specificities detectable in self-limited infections. In conclusion, insufficient CD4 help and defective CD8 repertoire may play a role at the early stages of infection in influencing HBV persistence.

恩替卡韦联合胸腺五肽治疗HBV相关肝细胞癌疗效观察

目的探讨恩替卡韦联合胸腺五肽应用于HBV相关肝细胞癌合并皮肤病患者的治疗效果。方法选择2013年1月至2015年12月在我院住院的晚期HBV相关肝细胞癌患者60例,所有受试患者随机分为实验组与对照组。结果与对照组比较,联合应用恩替卡韦及胸腺五肽的患者在治疗期间HBV DNA水平和AFP水平均呈下降趋势,两组患者的Child-Pugh评分均呈逐渐上升的趋势,但是与对照组比较,治疗组上升的趋势较为缓慢。结论恩替卡韦联合胸腺五肽治疗HBV相关肝细胞癌,能够延长患者的生存期,改善患者生活质量,并且毒副作用小,患者易于接受,是一种安全有效的治疗方法,值得推广。

乙型肝炎病毒感染患者的临床特征与预后的相关性

目的:回顾性分析乙型肝炎病毒感染(CHB)患者的临床特征与预后的相关性。方法:以2022年1月至2024年1月期间在郑州大学第五附属医院的CHB患者为研究对象,共入组152名CHB患者,以是否发生HBV-HCC为预后评价指标,对患者的临床特征进行了回顾和统计分析;通过对本研究患者的年龄、性别、吸烟史、酗酒、高脂血症、糖尿病史、PT、INR、AST、ALT、血小板、GGT、总胆红素、HBV DNA和肌酐等因素进行logistic回归分析,分析患者肝癌发生率的危险因素。接着采用ROC曲线寻找GGT对HBV-HCC的最佳预测阶段值,并验证GGT对患者患HCC的预测能力。结果:年龄、性别、吸烟史、嗜酒、糖尿病史、高血脂症、HBVDNA、PT、INR、血小板、AST、ALT、总胆红素以及肌酐(P>0.05),但GGT(P<0.001)、酗酒(P=0.004)、AST(P=0.007)、ALT(P=0.020)在两组间存在统计学差异(P<0.05);且多因素分析显示,GGT是HBV患者患HCC的危险因素(P<0.05);Pearson相关系数分析显示,GGT水平与HBV患者患HCC呈正相关(P<0.05);使用ROC曲线分析发现,当GGT水平最佳截断值为75U/L时,GGT预测HBV患者患HCC的AUC值为0.915。结论:GGT对HBV-HCC的最佳预截断段值为75 u/L,GGT对患者患HCC有预测价值。

阿德福韦酯治疗慢性乙肝后细胞免疫水平的临床研究

目的探讨阿德福韦酯治疗慢性乙肝(CHB)患者后免疫应答和细胞免疫状态。方法采用时间分辨法检测乙型肝炎病毒(HBV)血清标志物,酶联免疫吸附法检测白细胞介素-21(IL-21)水平,荧光定量聚合酶链反应检测血清HBV-DNA,流式细胞术检测HBV特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)和滤泡辅助性T淋巴细胞(Tfh)的变化。结果阿德福韦酯治疗72周后HBV-DNA水平下降,血清IL-21水平、外周血HBV特异性CTL和Tfh水平高于治疗前(P<0.05),治疗后HBV-DNA转阴组和HBe Ag转阴组中血清IL-21水平、外周血HBV特异性CTL、Tfh水平高于未转阴组(P<0.05),而HBV-DNA转阴组和HBe Ag转阴组各检测指标比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论阿德福韦酯治疗CHB可提高血清IL-21、HBV特异性CTL及Tfh水平,该变化可能与CHB患者抗病毒治疗后病毒性应答有关。

乙型肝炎病毒特异性细胞毒T细胞实验研究技术进展

由于乙型肝炎病毒(HBV)感染中抗原特异性细胞毒T细胞(CTL)在病毒清除和肝细胞损害中的重要作用,使其成为研究热点之一。本文对HBV抗原特异性CTL的实验研究技术进展作一综述。涉及的实验方法包括51Cr释放实验,乳酸脱氢酶释放法,有限稀释法,MHC-I类分子-肽四聚体,酶免疫斑点技术和流式细胞技术等。上述方法分别用于对HBV抗原特异性CTL表达频率,细胞毒功能,以及CTL表达与分泌细胞因子功能的测定。