HBV耐药：机制、检测和阐明（下）

5．对基因型和表型的阐明 从用多种抗病毒药物治疗过很长时间的患者身上分离到的病毒株常常存在多重耐药和代偿性突变的情况，在这种情况下从基因型预测表型可能很困难。对抗病毒药物的耐药和易感性是一种持续变异的结果而不能分开，会被复制适应度所改变也会改变复制适应度。

HBV耐药：机制、检测和阐明（中）

（接上期） 4．耐药性的检测 现在有了一系列检测HBV耐药性的不同方法，有的还能定量测定，因为现在对由不同方法得出的耐药性数据进行比较和解释有困难并且存在争议，所以这些技术还有待提高和标准化。耐药的HBV可以通过基因型和／或表型检测查出来。在体外只有表型检测可提供对特定药物耐药性的直接测定，但是每个方法都有其特有的优缺点。

基于CRISPR/Cas9点突变技术构建HIV-1基因型耐药检测质控品

目的人外周血淋巴细胞株8E5可分泌无感染性HIV-1病毒颗粒,靶向于8E5细胞株基因组整合的HIV-1前病毒基因POL区,基于CRISPR/Cas9点突变技术构建含有POL区耐药突变位点的单克隆细胞株,可用于制备一种安全稳定的新型HIV-1基因型耐药检测质控品。方法设计构建小向导RNA(single guide RNA,sgRNA)和Cas9共表达载体以及携带有目标突变位点的供体单链寡核苷酸(donor single-stranded oligonucleotides,Donor ssODN)共转染8E5细胞,通过流式微孔板分选获得转染成功的阳性单克隆细胞株,通过Sanger测序确认定点突变的编辑效果。对定点突变编辑成功的单克隆细胞株培养至第3代、5代和7代的细胞及细胞分泌到上清中的HIV病毒颗粒进行Sanger测序,验证定点突变的编辑效果。结果成功构建双sgRNA和Cas9共表达载体,与携带有耐药突变位点Q151M的Donor ssODN共转染8E5细胞株的效果良好。对分选获得的共转染阳性单克隆细胞株进行靶位点测序,结果显示成功构建了携带有定点突变Q151M的纯合子单克隆细胞株8E5Q151M。细胞株8E5Q151M多次传代后的细胞及细胞分泌的无感染性HIV-1病毒颗粒可被持续检测出Q151M突变位点。结论利用CRISPR/Cas9点突变技术成功构建稳定携带有Q151M耐药突变位点的细胞株8E5Q151M,为制备HIV-1基因型耐药检测质控品提供新的技术平台。

肿瘤细胞对氨甲蝶呤产生耐药生化机制的研究进展

氨甲蝶呤(MTX)作为一种广泛使用的抗肿瘤药物,几十年来人们一直在不断探讨其耐药的具体机制。随着相关检测技术的发展,最近几年对其耐药的理解更加深入,涉及谷氨酰合成酶(分胞浆型cFPGS和线粒体型mFPGS两种异构体)与MTX耐药机制、多药耐药相关蛋白与耐药、二氢叶酸还原酶与耐药间作用的机制。现从药物转运、谷氨酸化以及合成代谢途径认识引起MTX耐药的生化机制,并探讨其在临床的应用前景和意义。

兴国县乙肝防治一体化2项技术培训和应用推广效果的评价

目的评价兴国县乙肝防治一体化2项技术——"HBV耐药/分开型检测技术"和"肝脏瞬时弹性检测技术"的培训和应用效果。方法以2项技术的使用者、参与培训者和服务对象为调查对象,分别采用现场问卷调查和面访。结果调查对象共计425人,其中技术使用者61人,参与培训者102人,服务对象262人。参与技术培训人员中认为2项技术需要培训的分别为92.65%、97.06%,对2项技术教学方式满意的分别为98.53%、97.06%,对2项技术培训工作组织评价满意的分别为97.06%、94.12%;技术使用者中掌握2项技术的分别为86.05%、83.33%,有意愿推广2项技术的分别为93.02%、88.89%;服务对象对2项技术的综合满意度分别为94.36%、92.53%,能接受2项技术的分别为96.92%、92.54%。结论兴国县乙肝防治一体化中2项技术的培训和应用效果良好,且服务对象的满意度较高,有利于当地乙肝的诊疗,减轻群众的经济负担。

微测序技术在乙型肝炎病毒基因分型及耐药位点检测中的应用

根据全基因序列同源性〉92％及S基因系列同源性〉96％，可将HBV分为8种基因型，不同地域和种族的基因型分布及耐药特点不同，且直接影响疾病的临床表现及治疗效果。流行病学调查表明，我国以B、C基因型为主，北方以C基因型为主，少数地区存在A、D基因型。本研究采用PCR联合微测序技术检测B、C基因型及与拉米夫定、阿德福韦耐药相关位点的突变，评价微测序技术检测HBV分型和耐药突变基因的特异度和灵敏度。

HIV耐药性及检测方法最新进展

人类免疫缺陷病毒（HIV）基因组发生耐药突变导致的耐药性是抗病毒治疗失败的最主要原因。查明艾滋病患者体内耐药准种的变化并及时发现新的耐药突变位点，对于指导有效临床用药和研发新的抗病毒药物都有重要意义。HIV耐药检测主要分为基因型检测和表型检测。对这一领域的最新进展进行综述。