多聚嘧啶序列结合蛋白抑制HBV转录后调节元件的功能

目的探讨多聚嘧啶序列结合蛋白(polypyrimidine tract binding protein,PTB)对乙型肝炎病毒转录后调节元件(HBV posttranscriptional regulatory element,HPRE)功能的影响。方法采用pDM138-HPRE CAT(chloramphenicol acetyltransferase)报告体系,通过质粒瞬时转染细胞的方式来探讨PTB对HPRE功能的影响。结果CAT活性检测表明:PTB的过表达使HPRE介导的CAT表达活性下降,并且呈剂量依赖性。当去除质粒上游剪接供体位点时,PTB仍然可以降低CAT的活性。结论PTB抑制HPRE的功能,并且这种抑制作用不依赖于上游剪接供体位点。

多聚嘧啶序列结合蛋白(PTB)与HBV转录后调节元件(HPRE)结合抑制HBV表面抗原的基因表达

采用RT-PCR验证PTB与HPRE在体外的特异性结合。用HepG2.2.15细胞系、HBs-HPRE瞬时转染Hela细胞探讨PTB对HBV基因表达的影响。结果显示PTB能与HPRE特异性地结合。功能性研究证明PTB可以抑制HepG2.2.15细胞的HBsAg表达量,并呈浓度依赖性。由HPRE引起的HBsAg表达的增加也能被PTB所抑制。实验数据证明PTB通过与HPRE相互作用抑制HBsAg的基因表达。

多聚嘧啶序列结合蛋白的表达、纯化及其与HBV转录后调节元件RNA结合的分析

目的在大肠埃希菌中表达并纯化多聚嘧啶序列结合蛋白(polypyrimidine tract binding protein,PTB)-His融合蛋白,并鉴定PTB与HBV转录后调节元件(HBV posttranscriptional regulatory element,HPRE)RNA的体外结合。方法构建PTB-His融合蛋白的原核表达载体,经IPTG诱导表达后,用亲和层析的方法进行纯化。用磁珠结合与Western印迹的方法,验证PTB与HPRE RNA在体外的特异性结合。结果成功构建了PTB-His融合蛋白的原核表达载体,并在体外大量表达后用亲和层析的方法得到了高纯度的PTB-His融合蛋白。磁珠结合沉淀与Western印迹实验证明PTB与HPRE RNA在体外能特异性的结合。结论体外表达的PTB融合蛋白能与HPRE RNA特异性的结合。