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HBV靶向核糖核酸酶基因的原核表达和纯化及多克隆抗体的制备 被引量:8
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作者 李英辉 刘军 +3 位作者 赵亚 薛采芳 丁劲 黄豫晓 《医学研究生学报》 CAS 2005年第4期295-297,301,共4页
目的:旨在获得HBV靶向核糖核酸酶,并制备其兔的多克隆抗体。方法:将构建好的HBV靶向核糖核酸酶基因克隆入原核表达载体pET32a(+),转化入大肠杆菌BL21(DE3),以IPTG诱导6×His融合蛋白的表达并经Ni2+亲和层析纯化。通过SDS PAGE和West... 目的:旨在获得HBV靶向核糖核酸酶,并制备其兔的多克隆抗体。方法:将构建好的HBV靶向核糖核酸酶基因克隆入原核表达载体pET32a(+),转化入大肠杆菌BL21(DE3),以IPTG诱导6×His融合蛋白的表达并经Ni2+亲和层析纯化。通过SDS PAGE和Westernblot鉴定后,用纯化的蛋白免疫家兔,制备多克隆抗体,并以复性的蛋白作为抗原,用ELISA测定抗体的效价。结果:成功地纯化和复性了HBV靶向核糖核酸酶,获得了较高效价的抗血清。结论:获得纯化并复性的HBV靶向核糖核酸酶和多克隆抗体,为进一步研究奠定了基础。 展开更多
关键词 hbv靶向核糖核酸 原核表达 多克隆抗体
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一种构建HBV聚合酶特定位点多种突变的方法 被引量:1
2
作者 刘亚 杨柳青 +2 位作者 张文露 黄爱龙 胡接力 《重庆医科大学学报》 CSCD 北大核心 2017年第7期771-775,共5页
核苷(酸)类似物[neocleot(s)ide analogues,NUCs]在治疗乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染的过程中常见的一个问题就是耐药的产生。耐药的产生与HBV逆转录酶(reverse transcriptase,RT)区特定位点突变具有直接关系。现有的体外... 核苷(酸)类似物[neocleot(s)ide analogues,NUCs]在治疗乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染的过程中常见的一个问题就是耐药的产生。耐药的产生与HBV逆转录酶(reverse transcriptase,RT)区特定位点突变具有直接关系。现有的体外表型分析方法存在固有的限制。本文提出一种构建HBV聚合酶特定位点多种突变的新方法,即位点特异性随机突变,通过一轮聚合酶链式反应扩增,在RT区特定位点引入多种突变形式,再结合golden-gate克隆法以及片段替换反应(fragment substitution reaction,FSR)将包含不同突变的DNA片段克隆到相应载体中以进行下一步分析。通过这种方法,构建了阿德福韦(adefovir,ADV)耐药位点rt181和rt236位点的多种突变形式。 展开更多
关键词 克隆 生物工程方法 核苷类似物 耐药 hbv聚合
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HBV-DNA定量与乙肝标志物及谷丙转氨酶结果对比分析 被引量:2
3
作者 柳婉琼 《当代医学》 2009年第33期81-82,共2页
目的探讨血清中HBV-DNA定量与乙肝标志物(HBV-M)及谷丙转氨酶(ALT)之间的关系及临床意义。方法采用荧光定量聚合酶链式反应法(FQ-PCR)和ELISA法分别检测578例病人的血清HBV-DNA含量和HBV-M,自动生化分析仪检测ALT并对结果进行对比分析... 目的探讨血清中HBV-DNA定量与乙肝标志物(HBV-M)及谷丙转氨酶(ALT)之间的关系及临床意义。方法采用荧光定量聚合酶链式反应法(FQ-PCR)和ELISA法分别检测578例病人的血清HBV-DNA含量和HBV-M,自动生化分析仪检测ALT并对结果进行对比分析。结果HBsAg(+)、HBeAg(+)、HBcAb(+)组血清HBV-DNA检出率83.3%(259/2311),平均拷贝数1.1×108/ml。HBsAg(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+)组血清HBV-DNA检出率33.5%(44/132),平均拷贝数5.9×106/ml。HBsAg(+)、HBcAb(+)组血清HBV-DNA检出率24.2%(14/58),平均拷贝数1.9×106/ml。HBeAb(+)、HBcAb(+)组血清HBV-DNA检出率7.8%(1/15),平均拷贝数3.5×103/ml。全阴性组血清HBV-DNA检出率5.3%,平均拷贝数2.0×103/ml。HBsAg(+)、HBeAg(+)组的HBV-DNA阳性率高、定量值高,而HBsAg(+)、HBeAg(-)组HBV-DNA阳性率较低、定量值也较低,二者差异有显著性;HBsAg(-)者亦可检出HBV-DNA;HBV感染者ALT阳性的概率增大,但二者在数量上无相关性。结论同时检测血清乙肝标志物和HBV-DNA及谷丙转氨酶,对临床HBV感染、复制及传染性的判断具有重要意义。 展开更多
关键词 hbv—DNA荧光定量聚合链式反应 乙肝标志物 ALT
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泛素结合酶基因生物信息学与功能分析 被引量:4
4
作者 姚杨 苏杰 +2 位作者 魏迪 朱星枚 成碧萍 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2014年第11期1156-1159,共4页
目的:生物信息学的发展为通过在线软件预测新基因的相关信息提供了众多有重要价值的参考信息。文中利用生物信息学方法预测泛素结合酶2S( ubiquitin-conjugating enzyme 2S, UBE2S)生物学功能。方法以人肝癌HepG2细胞为材料,从构建... 目的:生物信息学的发展为通过在线软件预测新基因的相关信息提供了众多有重要价值的参考信息。文中利用生物信息学方法预测泛素结合酶2S( ubiquitin-conjugating enzyme 2S, UBE2S)生物学功能。方法以人肝癌HepG2细胞为材料,从构建的cDNA文库基因组中筛选和克隆了UBE2S基因。利用NCBI的BLAST在线分析工具分别对GenBank的非冗余核酸数据库和非冗余蛋白质数据库序列进行比对分析;采用NCBI ORF finder在线分析工具预测开放阅读框;利用ExPASy在线工具ProtParam统计基因中各种氨基酸含量,并预测理论分子量和等电点;应用ProtScale程序进行蛋白质的疏水性分析;蛋白质亚细胞定位采用在线工具( nibb.ac.jp/form.html)预测,通过NCBI数据库GenBank分析蛋白质保守结构域;采用Protfun在线工具预测UBE2S的功能分类;采用同源模型服务软件SWISS-MODEL预测UBE2S的三维结构;采用MEGA5.05软件进行系统进化树的构建。结果 UBE2S基因编码241个氨基酸,预测相对分子质量为23770,理论等电点为8.81。跨膜结构域分析表明,UBE2S蛋白不含跨膜位点;亚细胞定位预测,UBE2S蛋白具有生长因子、离心通道、结构蛋白功能的概率为8.904、0.313和0.291。同源性比较分析结果表明,其碱基序列与已经报道的其他12个物种的相似率为90%~97%,且符合种属之间的进化关系。结论 UBE2S蛋白结构和功能的分析不仅丰富了其家族基因信息,还将为后续肝癌发生发展的分子机制实验研究奠定基础。 展开更多
关键词 肝癌 生物信息学分析
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遵义市核苷类似物干预下慢性乙型病毒性肝炎患者乙型肝炎病毒多聚酶区基因突变检测分析
5
作者 杨开余 《中国社区医师》 2022年第20期93-95,共3页
目的:探讨遵义地区慢性乙型病毒性肝炎患者在核苷类似物治疗干预过程中乙型肝炎病毒(HBV)多聚酶区(P)基因的突变类型及发生率。方法:选取2018年12月-2019年12月在贵州航天医院就诊的102例慢性乙型病毒性肝炎患者为研究对象,分析患者在... 目的:探讨遵义地区慢性乙型病毒性肝炎患者在核苷类似物治疗干预过程中乙型肝炎病毒(HBV)多聚酶区(P)基因的突变类型及发生率。方法:选取2018年12月-2019年12月在贵州航天医院就诊的102例慢性乙型病毒性肝炎患者为研究对象,分析患者在核苷类似物治疗干预后HBV多聚酶区基因的突变类型、突变位点等情况。结果:102例慢性乙型病毒性肝炎患者HBV多聚酶区基因突变类型共19种,其中以单纯rtM204I突变最多(38.24%);核苷类似物耐药率以拉米夫定最高(59.80%)。结论:慢性乙型病毒性肝炎患者HBV多聚酶区基因突变种类较多,且核苷类似物耐药率较高,检测患者HBV多聚酶区基因突变情况有助于指导临床治疗。 展开更多
关键词 核苷类似物 慢性乙型病毒性肝炎 hbv多聚 基因突变
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HBV infection decreases risk of liver metastasis in patients with colorectal cancer:A cohort study 被引量:19
6
作者 Hai-Bo Qiu Zhao-Lei Zeng +5 位作者 Zhi-Qiang Wang Hui-Yan Luo Rajiv Prasad Keshari Zhi-Wei Zhou Rui-Hua Xu Li-Yi Zhang 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2011年第6期804-808,共5页
AIM:To evaluate the effect of hepatitis B virus (HBV) infection on liver metastasis of colorectal cancer.METHODS:A total of 1298 colorectal cancer patients were recruited from January 2001 to March 2005 in this study.... AIM:To evaluate the effect of hepatitis B virus (HBV) infection on liver metastasis of colorectal cancer.METHODS:A total of 1298 colorectal cancer patients were recruited from January 2001 to March 2005 in this study.Enzyme-linked immunosorbent assay was used to test serum HBV markers for colorectal cancer.Patients were divided into study (infection) group and control (non-infection) group.Clinical features of patients in two groups were compared.RESULTS:Liver metastasis was found in 319 out of the 1298 colorectal cancer patients.The incidence of liver metastasis was significantly lower in study group than in control group (14.2% vs 28.2%,P < 0.01).HBV infection significantly decreased the risk of liver metastasis [hazard ratio (HR):0.50,95% confidence interval (95% CI):0.38-0.66],but the incidence of extrahepatic metastasis was significantly higher in study group than in control group (31.9% vs 17.0%,P < 0.01).The HR was the lowest in chronic hepatitis B group (HR:0.29,95% CI:0.12-0.72).The number of liver metastatic lesions was significantly less in study group than in control group with a higher surgical resection rate.However,no significant difference was found in survival rate between the two groups (P=0.95).CONCLUSION:HBV infection decreases the risk of liver metastasis in patients with colorectal cancer and elevates the surgical resection rate of liver metastatic lesions. 展开更多
关键词 Hepatitis B virus Colorectal cancer Liver metastasis RISK
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Construction of retrovirus vector with HBV Pol gene and its expression in vitro
7
作者 冯春芝 潘卫 +1 位作者 潘欣 戚中田 《Journal of Medical Colleges of PLA(China)》 CAS 2004年第5期285-288,共4页
Objective: To construct retroviral vector with HBV Pol gene and study its expression in vitro. Methods:The recombinant plasmid HBV2/pBR322 containing 2 copies of HBV full-length gene was provided as the amplification ... Objective: To construct retroviral vector with HBV Pol gene and study its expression in vitro. Methods:The recombinant plasmid HBV2/pBR322 containing 2 copies of HBV full-length gene was provided as the amplification template. The PCR product was cloned into pMD 18-T and subcloned into pMSCVneo and pLNCX2 to construct the recombinant retroviral vectors with HBV Pol gene named by HBV P/pMSCVneo and HBV P/pLNCX2. HBV Pol gene was detected by RTPCR after transfecting the recombinant plasmids into SMMC7721 cells with liposome and G418 selection. Results: The retroviral vector with HBV Pol gene was successfully constructed and the expression of HBV Pol gene in vitro was detected by RTPCR. Conclusion: The retroviral vector with HBV Pol gene can be obtained, which will provide a new insight on the function of HBV Pol gene. 展开更多
关键词 hbv Pol gene retrovirus vector
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A new polymorphism in the GRP78 is not associated with HBV invasion
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作者 Xiao Zhu Yi Wang +5 位作者 Tao Tao Dong-Pei Li Fei-Fei Lan Wei Zhu Dan Xie Hsiang-Fu Kung 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2009年第39期4958-4961,共4页
AIM:To examine the association between -86 bp(T>A) in the glucose-regulated protein 78 gene(GRP78) and hepatitis B virus(HBV) invasion.METHODS:DNA was genotyped for the single-nucleotide polymorphism by polymerase ... AIM:To examine the association between -86 bp(T>A) in the glucose-regulated protein 78 gene(GRP78) and hepatitis B virus(HBV) invasion.METHODS:DNA was genotyped for the single-nucleotide polymorphism by polymerase chain reaction followed by sequencing in a sample of 382 unrelated HBV carriers and a total of 350 sex-and age-matched healthy controls.Serological markers for HBV infection were determined by enzyme-linked immunosorbent as-say kits or clinical chemistry testing.RESULTS:The distributions of allelotype and genotype in cases were not significantly different from those in controls.In addition,our fi ndings suggested that neither alanine aminotransferase/hepatitis B e antigen nor HBV-DNA were associated with the allele/genotype variation in HBV infected individuals.CONCLUSION:-86 bp T>A polymorphism in GRP78 gene is not related to the clinical risk and acute exacerbation of HBV invasion. 展开更多
关键词 Acute exacerbation Glucose-regulated protein 78 Hepatitis B virus Single-nucleotide polymorphism
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含阿德福韦酯耐药突变位点的HBV聚合酶逆转录酶区域的原核表达 被引量:1
9
作者 谢素兰 黄爱龙 +1 位作者 蔡雪飞 胡源 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2011年第8期893-897,共5页
目的原核表达含阿德福韦酯(Adefovir,ADV)耐药突变位点的HBV聚合酶逆转录酶(Reverse transcriptase,RT)区域。方法以野生型HBV DNA为模板,PCR扩增HBV聚合酶RT区域,克隆至质粒pHis-SUMO上,构建重组表达质粒SUMO-RTWT,并通过定点突变构建... 目的原核表达含阿德福韦酯(Adefovir,ADV)耐药突变位点的HBV聚合酶逆转录酶(Reverse transcriptase,RT)区域。方法以野生型HBV DNA为模板,PCR扩增HBV聚合酶RT区域,克隆至质粒pHis-SUMO上,构建重组表达质粒SUMO-RTWT,并通过定点突变构建含ADV耐药突变位点(181T/V+236T)的突变质粒SUMO-MT1和SUMO-MT2,转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)中,IPTG诱导表达。表达产物经SDS-PAGE及Western blot分析,并进行表达条件的优化及HBV聚合酶RT区域的结构建模。结果重组表达质粒SUMO-RTWT、SUMO-MT1和SUMO-MT2经双酶切及测序证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为56 000,可与鼠抗His单克隆抗体发生特异性结合;经表达条件优化后,3种重组质粒在大肠杆菌Roset-ta(DE3)中均获得有效稳定的表达;同源结构建模结果表明,HBV聚合酶RT区域具有典型的DNA聚合酶的结构。结论已成功构建了含ADV耐药突变位点HBV聚合酶RT区域的重组原核表达质粒,并在大肠杆菌Rosetta(DE3)中获得稳定表达的可溶性目的蛋白,为研究ADV的耐药机制奠定了基础。 展开更多
关键词 hbv聚合 逆转录区域 阿德福韦酯 融合蛋白 原核细胞 基因表达
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针对P基因的siRNA对乙肝病毒S表达稳定性的影响
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作者 姚津剑 林菊生 +2 位作者 韩思源 徐冬 于伟玲 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2007年第6期548-551,共4页
目的以乙型肝炎病毒(HBV)P基因为靶点,构建表达小干扰RNA(siRNA)的质粒载体psRNA1、psRNA2、psRNA3、psRNA4及对照psiRNA0,体外观察针对P基因的siRNA对HBs表达的影响。方法设计并合成针对HBV-P基因的siRNA寡核苷酸,经退火形成双链后克隆... 目的以乙型肝炎病毒(HBV)P基因为靶点,构建表达小干扰RNA(siRNA)的质粒载体psRNA1、psRNA2、psRNA3、psRNA4及对照psiRNA0,体外观察针对P基因的siRNA对HBs表达的影响。方法设计并合成针对HBV-P基因的siRNA寡核苷酸,经退火形成双链后克隆入psiRNA-H1neo质粒中,通过鉴定将构建成功的5个psiRNAs真核表达质粒瞬时转染HepG2.2.15细胞,用半定量RT-PCR对筛选到的位点进行了试验观测抑制效果。结果表明针对P基因的siRNA能下调HBs的表达,其中psiRNA1、psiRNA2的抑制HBs基因表达的效果最强。结论针对P基因的siRNA可以有效的抑制HBs的表达,抑制的效果和siRNA的靶位点有关。 展开更多
关键词 RNA干扰 小干扰RNA(siRNA) hbv聚合
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1648例丙型肝炎血清抗体检测分析
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作者 刘洪贵 郭玲 李素华 《安徽预防医学杂志》 2000年第4期279-280,共2页
关键词 丙型肝炎 ELISA法 血清 抗体检测 hbv酶
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