CXCL5/CXCR2/VEGF通路在HBV相关肝癌血管生成中的作用及其机制

目的:探讨CXCL5/CXCR2/VEGF通路在HBV相关肝癌血管生成过程中的作用及其机制。方法:收集2022年10月至2022年12月间在广西中医药大学附属瑞康医院入院的10例HBV-DNA阳性患者的外周血标本[其中5例肝细胞癌(HCC)和5例肝硬化(LC)],用高通量RNA测序技术检测并筛选差异表达mRNA,用GO富集和KEGG通路分析这些差异表达基因的生物学功能和相关信号通路。常规培养HCC细胞HepG2,用转染试剂将C-X-C基序趋化因子配体5(CXCL5)过表达质粒和对照质粒转染至HepG2细胞中,分为对照组,空载组,250 ng/mL和520 ng/mL CXCL5过表达质粒组。用CCK-8法、ELISA、血管生成实验、qPCR法、WB法和免疫荧光染色技术分别检测过表达CXCL5对HepG2细胞增殖能力、VEGF分泌、成管能力、CXCL5、CXCR2、VEGF mRNA及其蛋白表达,以及VEGF表达的影响。结果:RNA测序结果显示,HCC和LC患者外周血中mRNA表达存在显著差异。GO富集分析发现,这些差异mRNA的相关基因主要参与细胞发育过程的调控、G蛋白偶联受体活性、细胞外区域的组成和信号受体结合。KEGG通路分析发现,这些异表达基因可能参与细胞因子与受体相互作用通路、cAMP信号通路等与癌症作用机制相关的通路、神经活性配体与受体相关作用的通路、钙相关信号通路。过表达CXCL5可明显促进HepG2细胞的增殖能力(P<0.05)、VEGF的分泌(P<0.05)、人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的成管能力(P<0.05)、CXCL5、CXCR2和VEGF mRNA和蛋白的表达(P<0.05或P<0.01),以及增强HepG2细胞中VEGF的表达。结论:CXCL5可能通过CXCL5/CXCR2/VEGF轴促进HepG2细胞的增殖和HUVEC的成管能力。

RT-PCR法检测庚型肝炎病毒C(GBV-C)RNA

应用RT－PCR法在非甲～非戊型肝炎患者血清及单采浆站供血员血浆中检测到GBV－CRNA，扩增产物经序列测定进一步确证，在30例非甲～非戊型肝炎患者中阳性率为6．6％；在600例单采浆供血者血浆中阳性率为0．33％。提示GBV－C可能不是非甲～非戊型肝炎的主要致病因子，可能存在GBV－C健康携带者。

水动力注射法构建乙型肝炎病毒感染小鼠模型

目的建立尽量接近人类自然条件下发生的急性病毒性肝炎感染动物模型,研究其发病机制和治疗方法。方法选择中国地区高流行的人HBV C基因型具有复制能力的1.2倍HBV基因组为材料,构建可高效表达HBV基因组的重组腺病毒相关病毒载体pZAC2.1-HBV。利用尾静脉水动力注射法将pZAC2.1-HBV注入小鼠。结果瞬间转染人肝癌细胞系HepG2细胞后,在细胞上清和裂解液中检测到HBsAg。ELISA方法检测小鼠血清中HBsAg和HBeAg的水平可持续表达14天,随后抗-HBs、抗-HBe出现。同时在14天之内可检测到血清中HBV-DNA特异片段。结论采用水动力注射法成功建立HBV感染急性小鼠模型。

肝癌高发区不同人群HBV、HCV感染率及其与肝癌的关系

了解国内肝癌高发区ＨＢＶ、ＨＣＶ的流行情况及其与肝癌发病的关系。方法：在肝癌高发的江苏 省启东地区，对不同人群进行血清ＨＢｓＡｇ（固相放免法）、抗－ＨＣＶ（酶免法）、ＡＦＰ（固相放免法）测定，结果进行统计 学处理。结果：肝癌、肝炎、献血员三组人群中ＨＢｓＡｇ 及抗－ＨＣＶ阳性率分别为８６．０２％与７．５３％，５９．８１％与 ０．９３％，４．０４％与４．０４％。血清ＨＢｓＡｇ及ＡＦＰ含量与抗－ＨＣＶ间无明显关系。结论：国内肝癌高发区人群主要感 染ＨＢＶ并与肝癌发生有关，ＨＣＶ感染并不重要。

慢性乙肝患者病毒前C区突变株感染的检测与意义

本文采用３’端特异性ＰＣＲ技术对３６例慢性乙型肝炎患者进行了ＨＢＶ前Ｃ区１８９６位点突变检测。结果发现４例ＨＢＶ突变株感染，３例为混合感染，１例为单纯突变株感染。作者对使用３’端特异性ＰＣＲ对ＨＢＶ突变株检测的作用及ＨＢＶ突变株在乙肝病情发生、发展中的作用进行了探讨。

153名吸毒人员HIV、HBV、HCV、梅毒感染状况分析

目的了解怀化市吸毒人员HIV、HBV、HCV、梅毒感染状况。方法对吸毒人员采取统一调查表进行问卷调查,并采血检测HIV抗体、HBsAg、HCV抗体、快速血浆反应素试验(RPR)检测梅毒抗体。结果153名吸毒人员HIV、HBV、HCV、梅毒感染率分别为1.3%,21.57%,59.48%,3.92%。非静脉吸毒者未检出HIV、梅毒感染者,HBV在两种不同吸毒方式之间无显著差异,而HCV在两种不同吸毒方式之间有非常显著性差异(χ2=66.44,P<0.01)。结论在吸毒人群中开展爱滋病、丙型肝炎、梅毒知识的宣传与教育,采用有效的干预措施将是势在必行。

HBV感染致肝损伤患者CRP,hsCRP和SAA临床价值的探讨

目的探讨乙型肝炎病毒感染引起肝损伤的患者血清C反应蛋白(CRP)、超敏C反应蛋白(hsCRP)和血清淀粉样蛋白A(SAA)水平对肝脏受损程度的诊断价值。方法纳入武汉大学人民医院感染科乙型肝炎病毒型肝损伤患者127例,并分组,其中临床诊断为急慢性乙型肝炎患者(轻度组)47例,乙肝后肝硬化患者(中度组)35例,慢加急性肝衰竭患者(重度组)45例。同时纳入健康体检者50例。检测上述人群血清CRP,hsCRP和SAA水平,进行统计学分析。结果①病例组与对照组血清CRP和hsCRP水平差异有统计学意义(Mann-Whitney U检验,Z=-2.792,-8.458;P<0.01)。②病例组间血清h8CRP水平差异有统计学意义(Kru8kal-Wallis H检验,x^2=11.625,P<0.01)。③中度组和重度组血清hsCRP水平与轻度组比较,差异有统计学意义(Mann-Whitney U检验,Z=-2.849,-2.902;P<0.01)。④各组间血清SAA水平差异无统计学意义。⑤hsCRP在乙型肝炎病毒致肝损伤患者总体中阳性率为76.29%,高于CRP(11.34%),SAA(26.80%)。结论①乙型肝炎病毒致肝损伤患者血清CRP水平的临床价值优于SAA;②hsCRP水平(免疫比浊法)的临床价值优于CRP(免疫荧光法)。

维持性血透患者乙、丙型肝炎病毒和人免疫缺陷病毒感染随访研究

目的:调查维持性血透患者在长程血透治疗过程中乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)和人免疫缺陷病毒(HIV)感染情况,通过总结进一步降低血透患者上述病毒感染率。方法:收集2004年12月～2009年12月底在我院行规则维持性血液透析半年以上者共381例,每半年检查其血清HBV标志物(HBV-M)、HCV抗体(抗HCV)和抗HIV等情况;2008年1月起严格把抗HCV阳性的血液透析患者与HBsAg阳性患者单独分区和分血透机进行血液透析。比较各患者HBV-M、抗HCV和抗HIV变化情况,同时对比分区分机前后HBV和HCV感染情况。结果:(1)HBV-M检查及HBsAg抗原阳转率:2004年底～2009年底,HBsAg阳性患者分别为3,4,4,7,13,16例,增加的阳性患者均为新进入血透患者,维持性血透患者HBsAg阳转率均为0;(2)抗HCV检查及阳转率:2004年底～2009年底,抗HCV阳性患者总数分别为52例(43.3%),50例(32.3%),40例(25.8%),46例(29.9%),37例(18.8%),27例(11.3%);2005年,2006年和2007年阳转数分别为5例,2例,6例;2008年和2009年没有抗HCV阳转患者;分区分机血透后的两年和前面3年比较,抗HCV阳转率差异有统计学意义(P<0.001)。(3)抗HIV检查及阳转率:所有381例患者在随访期内没有发生抗HIV阳性。结论:在广泛应用促红素减少输血后明显降低了血透患者HBV和HCV感染率,进一步对HBV和HCV感染者采取分区分机的原则和隔离血透的治疗措施,降低了血透患者感染HBV和HCV的风险。

湛江市吸毒人群HIV、HBV、HCV、梅毒感染状况调查

[目的]了解湛江市吸毒人群HIV、HBV、HCV、梅毒感染状况及影响因素,为吸毒人群这几种疾病防治提供依据。[方法]对湛江市戒毒所350名吸毒人群进行匿名调查,采集静脉血进行HIV、HBV、HCV和梅毒血清学检测,并对结果进行统计学分析。[结果]350名吸毒人群中HIV抗体阳性15例,阳性率4.29%,HBsAg阳性103例,阳性率29.43%,HCV抗体阳性200例,阳性率57.14%,梅毒抗体阳性13例,阳性率3.71%,重叠感染HIV/HB-sAg共8人,占2.29%,重叠感染HBsAg/HCV共97人,占27.71%,重叠感染HBsAg/HCV/梅毒共9人,占2.57%,重叠感染梅毒/HCV共8人,占2.29%。[结论]吸毒人群中HIV、HBV、HCV感染率较高,与他们注射毒品行为有关,政府应开展针对性干预措施。

肝癌患者血清中HBV含量及C基因启动子基因变异的关系

目的 了解肝癌患者乙型肝炎病毒 (HBV)DNA含量及其与C基因启动子 (BCP)基因变异的关系。方法 采用PCR荧光实时定量技术检测 1 1 4例肝癌患者及 1 0 0例非肝癌乙肝患者HBV DNA含量。采用PCR 微板核酸分子杂交ELISA技术对肝癌及乙肝患者进行BCP基因变异检测。结果 肝癌患者 4 8%HBV DNA阳性 ,平均拷贝量为 4 .7× 1 0 6拷贝 /ml。BCP区域 176 2、1 76 4位突变率为 2 7% ,且BCP变异的患者HBV拷贝量明显大于非变异患者。 1 0 0例非肝癌乙肝患者HBV DNA阳性率4 1 % ,平均拷贝量 3.8× 1 0 5拷贝 /ml,BCP基因突变率为 8% ,肝癌患者的BCP基因突变率明显高于乙肝患者。结论 HBV感染可能是导致肝癌发生的重要原因 ,HBVBCP变异可能与病变程度有关。

乙型肝炎病毒preC/C基因在杆状病毒载体系统中的表达

通过ＰＣＲ获得长度为６４０ｂｐ的ＨＢＶｐｒｅＣ／Ｃ基因片段，将其克隆入转移载体质粒ｐＳＸＩＶＶＩ＋Ｘ３／４，构建出重组质粒ｐＳＸＩＶＶＩ＋Ｘ３／４－ｐＣ／Ｃ。利用共转染的方法，构建出既能形成多角体又能表达ｐｒｅＣ／Ｃ基因的重组毒株ＴｎＮＰＶ－ｐＣ／Ｃ－ＯＣＣ＋。该重组毒株中ｐｒｅＣ／Ｃ基因受到串联的双启动子－合成启动子和含ＨｉｎｄⅢ接头的ＸＩＶ启动子的双重调控。对感染重组毒株的草地夜蛾（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ，Ｓｆ）细胞及其培养上清分别进行ＨＢｅＡｇ、ＨＢｃＡｇ固相放射免疫检测，发现受感染细胞及其培养上清均呈ＨＢｅＡｇ阳性，ＨＢｃＡｇ阴性；进一步做Ｗｅｓｔｅｒｎ分析表明，受感染细胞总蛋白中２６ｋＤ及培养上清１５ｋＤ处，呈现与ＨＢｅＡｇ单克隆抗体特异性反应条带。结果表明，克隆的乙肝病毒ｐｒｅＣ／Ｃ基因在杆状病毒载体系统中得到正确表达和加工，加工产物能够有效分泌。

HBV前C区G1896A和G1899A促进e抗原血清学转换

目的:探讨乙型肝炎病毒(HBV)前C区1896位点和1899位点突变与e抗原血清转换和疾病进展的相关性。方法:收集HBs Ag阳性持续半年以上且血清HBV-DNA拷贝数>5.0×102IU/m L血清样本共238份,测序法分析HBV前C区1896和1899位点的碱基序列。同时收集样本的相关临床资料和HBe Ag的表达情况,利用SPSS 20.0,进行Spearman相关性分析和卡方检验。结果:HBV前C区1896和1899位点均可发生突变,由碱基G变成A,且均与e抗原表达密切相关(P<0.05)。G1896A和G1899A均能促进e抗原血清学转换,G1899A的转化率高于G1896A的转化率。G1899A与HBV相关疾病进展相关(相关系数0.280,P<0.05),尤其是HCC的发生。结论:HBV前C区G1896A和G1899A促进HBe Ag血清学转换。

娄底市吸毒人群HIV、HBV、HCV、梅毒感染状况及影响因素分析

目的了解娄底市吸毒人群HIV、HBV、HCV、梅毒感染状况及影响因素,为吸毒人群中这几种疾病的综合防治提供依据。方法对娄底市戒毒所戒毒人员面对面进行匿名问卷调查,并采集静脉血进行HIV、HBV、HCV和梅毒血清学检测。结果182名吸毒人员中,HIV抗体阳性1例,阳性率为0.55%、HBsAg阳性24例,阳性率为13.19%、HCV抗体阳性92例,阳性率为50.55%、梅毒抗体阳性12例、阳性率为6.59%,合并感染HIV/HCV1例,占0.55%,合并感染HBV/HCV12例,占6.59%,合并感染梅毒/HCV7例,占3.85%。结论该市吸毒人群中HCV、梅毒感染率较高,与他们的多性伴和注射毒品行为有关,应积极开展针对性地干预措施。

环介导的等温扩增技术对HBV、HCV和HIV核酸检测的研究

目的建立环介导的等温扩增技术(LAMP)对HBV、HCV和H IV核酸检测的方法并对检测灵敏度和特异性作初步考核。方法通过引物设计和筛选、内质控的设计与时间分辨浊度检测方法的运用,建立LAMP HBVDNA、HCV RNA和H IV RNA扩增体系;用连续稀释的阳性样本和不含任何病毒核酸的正常人血浆考核所建立的LAMP扩增体系的灵敏度和特异性。结果建立了LAMP HBV DNA扩增体系及HCV/H IV RNA双联检体系,该体系对5 CP/m l的HBV DNA样本的检出率为51.85%,对100 CP/m l的HCV RNA阳性样本的检出率为61.90%,对100 CP/m l的H IV RNA阳性样本的检出率为45%。对考核样本检测的相对灵敏度和特异性均为100%。结论LAMP HBV、HCV和H IV检测灵敏度较高,在进一步优化以后能用于HBV、HCV和H IV的核酸检测。

酒精性肝硬化合并肝炎病毒感染的临床特点

目的:探讨酒精性肝硬化(ALC)合并肝炎病毒感染的临床发病特点。方法:对我院1994年至2003年收治的237例ALC患者的临床资料进行分析。结果:237例ALC患者合并肝炎病毒感染79例(33.3%),其中乙肝病毒感染67例(28.3%),丙肝病毒(HBV)感染8例(3.4%),乙肝与丙肝病毒混合感染4例(1.7%),无肝炎病毒感染158例(66.7%);感染组的出血和肝性脑病发生率与非感染组相比差异显著(P<0.025);感染组血清AST、ALT明显升高的比率分别是38%和22.8%,非感染组分别是22.8%、8.8%,两组比较差异显著(P<0.025);感染组肝癌的发生率为19.3%,而非感染组仅为1.9%,两组比较差异显著(P<0.01)。结论:酒精与肝炎病毒在肝损伤过程中起协同作用,肝炎病毒感染增加了ALC肝癌发生的机会。

乙型肝炎病毒与丙型肝炎病毒重叠感染重症化探讨

目的:探讨HBV、HCV重叠感染时,病毒之间的相互关系及对病情转归的影响。方法:用ELISA法检测180例患者乙肝病毒血清学指标(HBV-M)和丙肝病毒抗体(抗-HCV),用PCR和RT-PCR体外扩增法检测HBV-DNA和HCV-RNA。结果:HBV、HCV重叠感染LC和HCC的发生率远远高于单纯HBV或HCV感染,HBV、HCV重叠感染患者中HBV-DNA和HBsAg的阳性率明显低于单纯HBV感染者。结论:HBV重叠感染HCV后,对肝细胞的损害加重,重叠感染患者病情的发展及转归可能主要与HCV有关,是HBV、HCV作用相互叠加的结果。

凉山州HIV与HBV、HCV、TP重叠感染状况分析

目的研究HIV合并HBV、HCV、TP感染的现状及其特点,为HIV/AIDS的防控和治疗提供科学依据。方法采用ELISA法,对406例HIV阳性血清进行HBV、HCV、TP检测,比较不同性别及年龄HIV感染者HBV、HCV、TP感染率。结果 406例HIV感染者合并感染HBV的有68例(16.7%),感染HCV有210例(51.7%),感染TP有69(17.0%)。同时感染HBV/HCV的有34例(8.41%),感染HBV/TP的有6例(1.5%),感染HCV/TP的有28例(6.9%),同时感染HBV/HCV/TP的有4例(0.93%)。结论治疗HIV应注意HCV、HBV、TP的多重感染治疗,并加强HIV、HCV、HBV、TP感染者健康教育。

1829例HBeAg阳性慢性乙型肝炎的临床特点分析

目的通过大样本回顾性调查,比较HBeAg阴性与HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者临床特点的异同.方法对1829例慢性乙型肝炎患者的住院病历进行回顾性调查,分析HBeAg阴性与HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者年龄、肝功能、HBVDNA定量、HBV-DNA前C区变异、肝组织病理炎症及纤维化分级、临床诊断及预后等指标的差异.结果HBeAg阴性组的平均年龄较大;HBeAg阳性组和HBeAg阴性组入院时肝功能各项指标均有差异,HBeAg阴性组的TB升高和ALB降低更明显一些.HBeAg阳性HBVDNA阳性率高于HBeAg阴性组.HBeAg阴性组HBV-DNA前C区变异阳性率明显高于HBeAg阳性组.HBeAg阴性组的肝硬化、肝衰竭和肝癌的构成比明显均高于HBeAg阳性组;HBeAg阴性组的病死率也高于HBeAg阳性组.结论HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者年龄较大、病程较长,HBV-DNA前C区变异发生率高,HBVDNA复制水平低,易发展为肝硬化、肝衰竭和肝癌.

AIDS合并肝细胞癌临床病理分析

目的总结AIDS合并肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)病例的临床病理特征。方法回顾性分析2009年1月至2021年12月首都医科大学附属北京佑安医院诊治的7例AIDS合并HCC患者的临床和病理资料,总结其临床病理特点,并与同期HIV阴性的HCC患者(n=33)做对比分析。结果7例AIDS合并HCC中,3例共感染HBV,3例共感染HCV,1例合并脂肪性肝病。与HIV阴性HCC患者比较,HIV阳性组共感染HCV多见(P=0.022),肿瘤灶多发(P=0.003),门脉分支侵犯多见(P=0.011);另外,HIV阳性HCC肿瘤低分化,免疫组化高表达GPC3、Ki-67和P53(P=0.024、0.016、<0.001)。结论AIDS合并HCC患者多共感染HBV或HCV,病理分级高,肿瘤多灶和门脉侵犯常见。对于共感染患者应同时重视基础肝病和抗HIV治疗,规范复查、定期监测。

HBVC区基因克隆和PCR条件优化

目的建立PCR优化条件和方法,探讨HBVC区基因在乙型肝炎PCR检测中的应用价值,为荧光定量PCR检测HBV摸索条件。方法将HBV基因组导入DH5α大肠杆菌,SDS碱裂解法小量提取大肠杆菌阳性构建质粒DNA,设计合适引物对HBVC区基因进行PCR扩增,对PCR条件中的退火温度、Mg2+浓度进行了优化,并比较三种不同Taq DNA聚合酶的灵敏度。结果转化的大肠杆菌质粒DNA最佳退火温度为58℃,最佳Mg2+浓度为1.5mM,同时确定天源公司的Biostar Taq DNA聚合酶灵敏度最高,扩增到10-6。结论确立了HBVC区PCR的优化条件,将为后期进行荧光定量PCR检测HBV感染奠定基础以及为探索更有效的检测方法提供实验依据。