587例乙肝病毒携带者常见HBV-M模式中Pre-S1Ag与HBV-DNA-PCR的相关性探讨

目的:探讨乙肝病毒携带者常见血清模式中前S1抗原与HBV-DNA的相关性。方法:用ELISA法检测表面抗原阳性587例的前S1抗原。结果:前S1抗原与e抗原的阳性符合率为76.5%;与HBV-DNA的阳性符合率为77.3%,且前S1抗原和HBV-DNA与HBV-M阳性检出率密切相关,相关系数r=0.984。结论:前S1抗原是HBV在体内复制和传染的可靠指标,可用于乙肝的临床诊断。

乙肝病毒前S1抗原与传统二对半及HBV-DNA-PCR的相关性探讨

目的 检测前S1抗原与传统二对半中HBsAg、HBeAg及HBV -DNA -PCR的相关性 ,进一步推论前S1抗原在乙型肝炎的诊断与治疗中的临床作用 .方法 对本院 2 0 0 3年 10月至 2 0 0 3年 12月的门诊及住院病人所有乙肝六项 (二对半和前S1抗原 )检测结果进行分析 ,对其中所有HBsAg阳性者 1170例按二对半结果模式进行分类 ,计算前S1抗原在各类模式中的阳性率 ,以及前S1抗原与HBsAg、HBeAg的相关性 ,另外留取 30份HBV -DNA -PCR阳性标本 ,检测其前S1抗原及HBeAg结果 ,研究此三项指标的相关性 .结果 前S1抗原在不同模式中的阳性表达率各不相同 ,与HBsAg阳性相关率为 6 3% ,与HBeAg阳性相关率为 88.6 % ,HBV -DNA -PCR阳性者的前S1抗原阳性率为 90 %,HBeAg阳性率为 73% .结论 前S1抗原与两对半结果有很好的相关性 ,与HBV -DNA -PCR高度相关 ,优于HBeAg ,能准确客观地反应乙肝病毒感染与复制 。

HBV五项血清指标与HBV-DNA-PCR相关性探讨

ＨＢＶ五项血清指标与ＨＢＶ—ＤＮＡ—ＰＣＲ相关性探讨山东省青岛市胶州中心医院（青岛２６６３００）李志斌吴衍芝本文对５７２例肝炎门诊和住院病人进行ＥＬＩＳＡ法检测乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）五项血清指标和应用免疫ＰＣＲ技术检测ＨＢＶ－ＤＮＡ进行分析。１材料与...

HBsAg ELISA+/HBV DNA NAT-献血者血清学与分子生物学特征分析

目的 了解西安地区无偿献血人群HBsAg ELISA检测结果与HBV DNA检测结果不一致的标本相关血清学标志物的分布情况。方法 收集2022年11月1日—2023年4月30日陕西省血液中心HBsAg ELISA+/HBV DNA NAT-(ELISA+/NAT-)标本共计71份,对其采用电化学发光法检测乙肝血清学标志物,同时复检巢式PCR扩增HBV S区和C区基因片段。结果 双ELISA+/NAT-标本(n=30)巢式PCR检测阳性率远高于单ELISA+/NAT-标本(n=41)(60%vs 24.40%,P<0.05)。前者献血者100%为初次献血者,血清抗-HBc阳性率100%,血清学模式以1、4、5此3项阳性(80%)为主;后者献血者中31.7%为重复献血者,血清抗-HBc阳性率仅为19.51%,血清学模式以单2项阳性(43.90%)和全阴(36.58%)为主。结论 单ELISA+结果存在较多假阳性,导致不必要的血液报废;而NAT-标本可能存在低水平的HBV DNA,产生漏检风险。建议针对单HBsAg ELISA+/NAT-献血者,采用多套系统多种方法追溯检测,提高献血者HBV筛查的准确度,减少不必要的血液浪费。

基于微滴数字PCR技术建立单细胞水平研究HBV的方法

在单细胞水平研究肝组织内乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)是十分重要的,但相关研究技术尚处于推进阶段,不能满足临床需要。基于微滴数字聚合酶链反应技术(digital droplet polymerase chain reaction,ddPCR),本研究建立了一套单细胞水平绝对定量HBV DNA和RNA的单细胞微滴数字PCR方法(single-cell ddPCR,sc-ddPCR)。通过混合不同比例的HBV阳性和阴性细胞来模拟HBV慢性感染状态下的肝脏,分析此方法检测HBV DNA的线性和检测下限。以cccDNA来源RNA(episome-derived RNA,eRNA)为例,进一步设计针对eRNA的sc-ddPCR检测方案。利用不同来源转录本在结构上的差异,设计针对eRNA的特异性引物探针体系,在HBV肝癌细胞系中验证此引物和探针体系的特异度,并利用梯度稀释的HBV细胞株分析此方法检测eRNA的线性和检测下限。结果显示,本研究建立了基于ddPCR的DNA和RNA的单细胞水平检测方法,该方法表现出良好的线性(HBV DNA:R^(2)=0.9987;eRNA:R^(2)=0.9425),梯度稀释的HBV细胞株均能准确检测出阳性信号,具有高灵敏度(检测下限:HBV DNA为0.16%,eRNA为0.2%)。本研究建立的sc-ddPCR方法可针对多种DNA和RNA进行检测,为进一步研究肝组织内HBV病毒学活动提供了良好的技术支撑,可以更深入地分析肝组织内HBV的病毒学特征,从而有利于HBV治疗策略的优化和研发,具有广阔的应用前景。

Gentier96全自动医用PCR分析系统检测HBV-DNA及HCV-RNA的性能验证

目的 对实验室新购入设备Gentier96全自动医用PCR分析系统使用HBV-DNA及HCV-RNA定量检测项目进行性能验证。方法 通过检测HBV-DNA及HCV-RNA定量检测项目,对精密度、正确度、线性范围及抗干扰能力进行验证和评价。结果 该系统检测低水平和高水平HBV-DNA的实验室变异系数(CV)分别为4.12%、1.27%。低水平和高水平HCV-RNA的实验室变异系数(CV)分别为4.75%、1.46%。HBV-DNA国家标准物质GBW(E)090137(浓度编号S5)靶值的对数值3.15、GBW(E)090139(浓度编号S2)靶值的对数值6.66。HCV-RNA国家标准物质GBW(E)090140(浓度编号S5)靶值的对数值3.34、GBW(E)090142(浓度编号S3)靶值的对数值5.64,实测值与靶值的差异均在±0.4对数值范围内。该分析系统HBV-DNA定量检测在4.69×10~2.04×109范围内呈线性,线性回归方程为Y=0.9884X+0.1452,R2=0.9994。HCV-RNA定量检测在3.47×10~2.33×107范围内呈线性,线性回归方程为Y=0.9548X+0.3302,R2=0.9997。干扰物质血红蛋白(Hb)样本与对照组样本偏倚<±7.5%,表明常见抗干扰物质血红蛋白(Hb)浓度≤2g/dL时对HBV-DNA和HCV-RNA定量检测结果无影响。结论 Gentier96全自动医用PCR分析系统检测HBV-DNA及HCV-RNA已达到相关标准要求,可用于样本检测。

实时定量PCR测定治疗性HBV DNA疫苗工程菌的质粒拷贝数

目的 比较不同的定量方法和总DNA制备方法对实时定量PCR(real-time quantitative PCR, qPCR)测定治疗性HBV DNA疫苗工程菌的质粒拷贝数(plasmid copy number, PCN)的影响,为建立快速简便的治疗性HBV DNA疫苗工程菌的PCN测定方法提供参考。方法 通过试剂盒提取法、Triton X-100煮沸法和培养基煮沸法分别制备总DNA样品用于qPCR检测,使用绝对定量方法和相对定量方法计算不同制备方法样品的PCN,并对测定结果进行统计学分析。结果 试剂盒提取法制备的样品经绝对定量和相对定量计算PCN,结果分别为43.10±4.02和42.92±3.98,显著低于Triton X-100煮沸法的结果(69.32±6.51和68.58±6.42)以及培养基煮沸法的结果(75.73±7.46和76.15±7.50)。任一样品制备方法,比较其绝对定量和相对定量结果,差异均无统计学意义。结论 qPCR的绝对定量和相对定量计算方法都适用于治疗性HBV DNA疫苗工程菌PCN测定,Triton X-100煮沸法更适合于总DNA模板制备。

乙型肝炎患者血清HBV-DNA水平、HBV标志物及肝脏功能的相关性研究

目的 了解乙型肝炎病毒(HBV)感染者血清HBV-DNA含量、HBV血清学标志物及肝功能指标(ALT、AST)的相互关系及意义。方法 分别采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术和ELISA检测211例乙型肝炎患者血清HBV-DNA含量和HBV标志物,并与肝功能指标进行比较。结果 Pre S1抗原在HBeAg阳性模式中的阳性率(66.2％)高于HBeAg阴性模式中的阳性率(22.1％)(P<0.01);HBeAg和Pre S1抗原的阳性率随HBV-DNA拷贝数的升高而升高;HBV-DNA(-)组与HBV-DNA(+)组的ALT和AST差异显著(P<0.01),而HBV-DNA(+)组之间HBV-DNA拷贝数与ALT和AST无相关性。结论 Pre S1抗原、HBeAg和HBV-DNA含量三者彼此相关,均反映了HBV复制活性,其中HBV-DNA是最理想的指标;HBV-DNA能用于粗略判断肝功能是否正常。

PCR-ELISA检测HBV DNA方法学建立及初步临床应用

建立PCR ELISA检测HBVDNA的方法学 ,探讨其最佳实验条件并初步评价其临床应用价值。常规PCR引物用地高辛标记 ,使扩增产物带有地高辛标记成份 ,再通过亲合素 生物素系统把生物素标记探针包被在固相聚苯乙烯板小孔中 ,通过固相探针与HBVDNA扩增产物进行杂交 ,与碱性磷酸酶标记的抗地高辛抗体反应 ,经NPP显色 ,根据其A4 0 5nm值大小 ,推算样品中HBVDNA模板含量。建立PCR ELISA的最佳实验条件为PCR循环次数为 30次 ,杂交温度 37℃ ,杂交时间 1h ,批内变异系数为 9 4% ,批间变异系数 16 9% ,在 6 0例乙肝患者血清标本检出率为 70 % (4 2 /6 0 ) ,而常规凝胶电泳检出率为 46 7% (2 8/6 0 ) ,两者具有显著性差异 (χ2 =6 6 7 P<0 0 1)。

定量PCR检测乙肝患者HBV-DNA及其意义

目的 :了解乙肝患者E抗原阳性和抗 -HBe阳性血清的HBV -DNA含量和血清ALT水平之间的关系。方法 :临床标本经ELISA测定后 ,分为HBeAg(+) /HBeAb(- ) ,HBeAg(- ) /HBeAb(+)血清。采用BIO -RADiCyclerPCR定量技术 ,测定HBV -DNA使用全自动生化分析仪测定血清ALT水平。结果HBeAg(+) /HBeAb(- )血清 85例 ,HBV -DNA平均含量为 (4 .4 2± 3.2 3)× 10 7;HBeAg(- ) /HBeAb(+) 12 8例 ,HBV -DNA平均含量为 (8.32± 6 .4 4 )× 10 4。两组具显著差异。轻度慢型乙肝 2 9例 ,HBV -DNA平均含量为 (5 .92± 4 .0 1)× 10 7,中度 19例 ,HBV -DNA平均含量为 (1.2 9± 0 .72 )× 10 6,重度 2 5例 ,HBV -DNA平均含量为 (4 .4 3± 2 .4 1)× 10 3 ,轻重度组间HBV -DNA平均含量有显著差异 (P <0 .0 5 ) ,血清ALT水平与HBV-DNA含量无明显关系。结论 :多数抗 -HBE阳性患者HBV仍持续复制 ,血清病毒量低于HBeAg(+)者 ,慢乙肝病变程度与HBV -DNA平均拷贝数。

乙肝HBV DNA荧光定量检测与血清标志物结果相关性分析

目的研究乙肝血清学标志物(HBV-M)结果与HBV-DNA水平的关系,分析HBV DNA阳性率在各年龄组的分布情况。方法对深圳市部分服务行业人员血清应用荧光定量PCR检测和ELISA法检测并对结果进行分析。结果1 781例乙肝血清学标志物阳性血清中有1 102例HBV-DNA阳性。其中883例1.3.5阳性(俗称“大三阳”)血清中HBV-DNA的阳性率为96.15%;722例1.4.5阳性(俗称“小三阳”)血清中HBV-DNA的阳性率为24.38%;138例1.5阳性血清中HBV-DNA的阳性率为38.41%;22例1.3阳性血清中HBV-DNA的阳性率为90.91%;11例HBsAg阳性血清中HBV-DNA阳性率为36.36%。结论两种方法检测乙肝标志物有密切的相关性。荧光定量PCR是检测HBV-DNA含量较精确的方法,能正确反映乙肝病毒的复制水平和活跃程度;HBsAg和HBeAg与HBV-DNA含量有着明显的相关关系。

应用荧光偏振技术检测HBV DNA

目的 建立一种简便、灵敏、特异的DNA检测方法。方法 用荧光偏振技术检测 10 2例乙型肝炎患者血清中的HBVDNA ,并与多聚酶链反应 酶联免疫吸附试验 (PCR ELISA)方法作比较。结果 该方法可以检测出 1× 10 1拷贝的HBVDNA模板 ,CV为 6 .4 4 % ,对 10 2例乙型肝炎患者的血清进行检测 ,HBsAg( + )、HBeAg( + )、抗HBc( + )血清HBVDNA阳性率为 10 0 % ( 4 0 / 4 0 ) ;HBsAg( + )、抗HBe( + )、抗HBc( + )血清HBVDNA阳性率为 81.8% ( 2 7/ 33) ;HBsAg( + )、抗HBc( + )血清HBVDNA阳性率为 72 .4 % ( 2 1/ 2 9) ,其余为阴性。 30例非乙型肝炎患者血清中HBVDNA的检测结果均为阴性。结论 该方法简单、灵敏、特异 。

HBV-DNA定量和定性聚合酶链反应及其临床实用性的探讨

探讨HBV -DNA定量和定性聚合酶链反应的意义及其临床实用性。检测 2 83例临床血清标本 ,其中1 2 5例用实时荧光定量PCR测HBV -DNA含量并比较不同乙型肝炎 (乙肝 )病型 ;另 1 5 8例用定性PCR测HBV -DNA并用ELISA法规HBV血清标志物 (HBVM) ,同时进行DNA定量及定性的对比研究。结果示HBV -DNA含量与乙肝病型无明显关系 ;DNA阳性率与乙肝病型及HBVM有关 ;HBV -DNA定量与定性相关性良好。FQ -PCR可真实反映HBV -DNA复制水平 ,有广泛的应用前景 ;定量与定性HBV -DNA检测相关性良好 ,在仅需了解HBV -DNA的复制与否的诊断中 ,可用定性PCR ;对HBVM的意义应重新认识。

不同类型慢性乙型肝炎血清HBV DNA基因含量与临床的关系

探讨不同类型慢性乙型肝炎 (慢乙肝 )患者病毒复制水平与肝损害程度的关系。 180例慢乙肝患者血清HBVDNA基因含量采用荧光定量PCR方法检测。血清HBeAg阳性组HBVDNA含量 (10 6 3 5± 1 84)显著高于HBeAg阴性组 (10 4 73± 1 88) (P <0 0 1) ,不同类型慢乙肝组血清HBVDNA含量相比较无显著性差异 (P >0 0 5 )。研究证实 ,血清HBeAg的存在影响HBVDNA的水平变化 。

溶血对检测不同含量乙肝病毒DNA干扰作用的研究

目的研究不同程度的溶血对荧光定量PCR检测不同含量的HBVDNA的干扰作用。方法采用PEG沉淀法和直接煮沸法提取血清中HBVDNA，用荧光定量PCR方法研究不同程度的溶血对检测不同含量HBVDNA的干扰作用。结果采用沉淀法提取HBVDNA，重度溶血明显抑制低拷贝组至高拷贝组HBVDNA的扩增；中度溶血使低拷贝组至中拷贝组的HBVDNA含量明显降低；轻度溶血降低了低拷贝组的HBVDNA含量。采用直接煮沸法提取HBVDNA，重度及中度溶血均明显抑制低拷贝组至高拷贝组HBVDNA的扩增；对低拷贝10^3组的抑制最显著，完全抑制其HBVDNA的扩增。轻度溶血使低拷贝组至中拷贝组的HBVDNA含量明显下降。结论重度溶血对低拷贝组到高拷贝组的HBVDNA的荧光定量检测均有明显的抑制作用，对于重度溶血标本，临床应重新留样检测HBVDNA，轻度溶血主要影响低拷贝组HBVDNA的检测结果，对低拷贝的轻度溶血样本，临床应重新留样检测，对高拷贝的轻度溶血样本，可以不重新留样。溶血对直接煮沸法的影响比沉淀法更大。

乙型肝炎e抗原作为乙型肝炎病毒围术期传播监控指标的可行性研究

目的探讨乙型肝炎ｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）作为围术期乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）传播监控指标的可行性。方法使用套式ＰＣＲ（ｎＰＣＲ）极量稀释方法，以ＨＢＶ感染剂量（ＩＤ）为参比单位，ＨＢｅＡｇ与稀释血量为分类标准，评价ＨＢｅＡｇ对ＨＢｓＡｇ阳性血液传染性的影响。结果１５６例ＨＢｓＡｇ阳性者中，３１例（１９ ．９％）ＨＢｅＡｇ阳性，１１５例（７３．７％）ＨＢＶＤＮＡ阳性， ＨＢＶ传染性为 ０～１０９ ＩＤ／ｍｌ。与ＨＢｓＡｇ相比，ＨＢｅＡｇ对围术期 ＨＢＶ传播的预示作用更好。与 ＨＢｅＡｇ阴性血液相比，ＨＢｅＡｇ阳性血液的ＨＢＶ携带率更高，ＨＢＶ的传染性更强，传播所需的血量更少，对特异性预防的效果更差。结论在外科医生普遍进行ＨＢＶ特异性免疫的前提下，ＨＢｅＡｇ较ＨＢｓＡｇ更适合作为围术期ＨＢＶ传播的监控指标。

乙型肝炎病毒血清标志物与HBV DNA定量结果分析

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)血清学检测出现的组合模式与HBVDNA定量之间的关系,正确评价其临床意义。方法用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清标志物,用荧光定量PCR检测HBVDNA含量,依据乙肝病毒标志物阳性出现的模式分为7组A组191例,为HBsAg、HBeAg、HBcAb阳性(俗称大三阳);B组328例,为HBsAg、HBe-Ab、HBcAb阳性(俗称小三阳);C组26例,为HBsAg、HBeAg阳性;D组54例,为HBsAg、HBcAb阳性;E组35例,HBsAb、HBeAb、HBcAb阳性;F组11例,为HBsAb、HBcAb阳性;G组10例,为HBcAb阳性。结果各组HBVDNA>1.00ⅹ103拷贝/ml的阳性增高百分率分别为A组98.95%(189/191);B组46.34%(152/328);C组100%(26/26);D组57.41%(31/54);E组20.00%(7/35);F组18.18%(2/11);G组20.00%(2/10)。A组、C组与B、D、E、F、G组间HBVDNA阳性增高率有显著性差异(P<0.01),其他各组间比较有些差异有显著性,有些差异无显著性(P<0.01或P>0.05)。结论正确合理地分析HBV血清学指标出现的类型,与HBVDNA的联合动态检测有助于临床诊断、疗效观察及预后判断。

乙型肝炎病毒DNA定量分析的临床意义

目的:探讨乙型肝炎病毒HBV DNA含量与血清标记物的相关性及其对乙型肝炎诊断、预后的意义。方法:采用酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测1652例乙肝患者血清学标记物(HBV—M),其血清学模型包括以下9种组合;并选取160例HBV M全阴性正常人作为对照。实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测血清中HBV DNA含量。结果:1、2组HBV DNA阳性率为98.4%和96.67%,明显高于其它组。结论:HBV DNA含量与乙肝病毒e抗原具有显著相关性,HBV M和HBV DNA定量检测对于临床乙肝病毒感染、复制及临床治疗有重要意义。

乙型肝炎病毒感染者HBV DNA与血清病毒标志物的关系

目的 探讨乙型肝炎病毒 (HBV)感染者HBVDNA检出情况及其与血清病毒标志物的关系。方法 采用实时荧光定量PCR(FQ PCR)检测 2 0 0份HBV感染者血清中HBVDNA含量 ,同时用全自动免疫分析仪检测HBV 5项血清标志物。结果 2 0 0份血清中 ,乙型肝炎病毒标志物不同组合组的HBVDNA阳性率有差异 ,HBsAg、HBeAg和 (或 )HBcAb阳性组阳性率约为 98.1% ,其中 96 %以上HBVDNA≥ 10 4copy/ml;HBsAg、HBcAb和 (或 )HBeAb阳性组HBVDNA阳性率约为 76 .5 % ,但其中 90 %以上HBVDNA≤ 10 4copy/ml;单纯HBV抗体阳性组HBVDNA阳性率约为13.0 % ,但均为HBVDNA≤ 10 3 copy/ml。三组间HBVDNA阳性率及分布均有明显差异 (P <0 .0 5 )。而且HBVDNA含量与疾病严重程度相关。结论 FQ

FQ-PCR测定HBV DNA与ELISA检测HBV-M相关性分析

目的探讨HBV DNA含量与HBsAg S/CO值之间的相关性。方法分别用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测100例乙肝患者的HBV DNA含量和乙肝两对半,并记录HBsAg S/CO值。结果100例乙肝患者HBV DNA含量对数值为(4.28±1.89),HBsAg S/CO值为(15.09±6.64),两指标间作相关性分析,r=-0.0156,P>0.05,无相关性。结论HBV DNA是判断乙肝病毒复制的较准确、较直接的抗乙肝病毒疗效观察指标,而HBsAgS/CO值的高低与疾病的严重程度及疗效无关。